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Latin american journal of aquatic research

versión On-line ISSN 0718-560X

Resumen

ABARCA, Andrés et al. Parámetros para la evaluación del efecto de Zimosán A como inmunoestimulante sobre leucocitos de rinón cefálico (HKL) de salmónidos. Lat. Am. J. Aquat. Res. [online]. 2012, vol.40, n.SpecIssue, pp.545-552. ISSN 0718-560X.  http://dx.doi.org/103856/vol40-issue3-fulltext-4.

El interés en la caracterización de la respuesta inmune de peces contra patógenos o el descubrimiento de nuevas moléculas inmunoestimulantes, requiere el uso de técnicas de uso masivo y rápido. El modelo clásico ha sido el desafío en estanques de 1000 L, con un elevado número de peces, lo que tiene un alto costo económico. El objetivo de este trabajo fue reducir al mínimo los costos de dichos ensayos, utilizando modelos celulares in vitro. Para ello, se evaluó el efecto del inmunoestimulante de Zymosan A, un tipo de β-glucano, sobre la respuesta inmune en cultivos primarios de leucocitos de rinón cefálico (HKL), mediante la cuantificación enzimática y la detección de citoquinas pro-inflamatorias. La actividad de la fagocito oxidasa y de la óxido nítrico sintetasa inducible (iNOS), se midió indirectamente a través de la reducción de NBT, por especies reactivas de oxígeno, y la reacción de Griess para óxido nítrico, respectivamente. La detección de citoquinas pro-inflamatorias como el TNF-α, IL-6 e IL-Ιβ, se realizó mediante ELISA indirecto, con anticuerpos monoespecíficos generados en nuestro laboratorio. Los parámetros inmunológicos fueron evaluados en diferentes concentraciones y tiempos de incubación con el Zimosán A. Los resultados sugieren las condiciones óptimas para la evaluación de glucanos con capacidad inmunoestimulante, en base a indicadores de buena respuesta inmunitaria, que considera la activación de macrófagos (ROS e iNOS) y la secreción de moléculas pro-inflamatorias. Actualmente, el trabajo está dirigido a mejorar estos métodos, a través de la creación de un ELISA sandwich y generación de anticuerpos contra las proteínas totales de HKL para la pre-absorción de las muestras inducidas. En particular, la aplicación de ELISA para la caracterización de los perfiles de secreción de citoquinas es una contribución biotecnológica en la acuicultura, lo que no ha sido aplicado antes de este tipo de análisis.

Palabras clave : leucocitos de rinón cefálico; Zimosán A; inmunidad innata de peces; salmónidos; Chile.

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