SciELO - Scientific Electronic Library Online

 
vol.130 número6Perfil del hipertenso adulto mayor tratadoSíndrome de Williams: estudio clínico, citogenético, neurofisiológico y neuroanatómico índice de autoresíndice de materiabúsqueda de artículos
Home Pagelista alfabética de revistas  

Servicios Personalizados

Revista

Articulo

Indicadores

Links relacionados

Compartir


Revista médica de Chile

versión impresa ISSN 0034-9887

Rev. méd. Chile v.130 n.6 Santiago jun. 2002

http://dx.doi.org/10.4067/S0034-98872002000600004 

Rev Méd Chile 2002; 130: 623-630

Detección de secuencias del gen
BCR-ABL mediante RT-PCR en
pacientes con leucemia en la IX
Región. Chile

Carmen Gloria Artigas A1, Angélica Melo A1,
Juan Carlos Roa S, Eduardo Páez F, Cecilia Vittini de R,
Mónica Arriagada M, Luis González O1,
Erna Pflaumer F2, Iván Roa E.

Detection of BCR-ABL gene
sequences using polymerase chain
reaction reverse transcriptase in
patients with leukemia

Background: The BCR-ABL fusion gene is the molecular expression of the Philadelphia chromosome. This cytogenetic aberration is the most frequent alteration found in leukemias, which is produced by the translocation t(9;22). Two different fusion proteins are produced depending on the break point (210 kD and 190 kD). The detection of this gene has both diagnostic and prognostic importance, associated with poor prognosis in acute lymphoblastic leukemia (ALL). Aim: To detect BCR-ABL gene sequences in patients with leukemia from the IX Region of Chile. Material and methods: We studied 58 patients: 5 chronic myeloid leukemia (CML), 35 ALL, 15 acute myeloid leukemia (AML) and 3 biphenotypic leukemia. The gene sequences were detected using reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Results: BRC-ABL gene sequences were positive in all patients with CML, 2 of 35 ALL (one child and one adult). The remaining patients were negative. We found p210 and p190 co-expression in 2 CML and 1 ALL. Conclusions: Our results are in agreement with other reports. The detection of these and other genetic alterations will allow us to have invaluable diagnostic and prognostic information from our patients with leukemia (Rev Méd Chile 2002; 130: 623-30).
(Key Words: Leukemia; Oncogene proteins, fusion; Philadelphia chromosome, Reverse transcriptase polymerase chain reaction).

Recibido el 14 de marzo, 2001. Aceptado en versión corregida el 2 de mayo, 2002.
Financiado por la Universidad de La Frontera, a través del Proyecto DIUFRO Nº 9922.
Departamento de Medicina Interna. Unidad de Anatomía Patológica-Citología.
Departamento de Cirugía Infantil y Pediatría. Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera.
Temuco, Chile. Servicio de Medicina, Hospital de Temuco, Chile.
1 Tecnólogo Médico
2 Enfermera

El cromosoma Philadelphia descrito por Nowell y Hungerford en 19601, es la anormalidad citogenética más común observada en leucemias. Esta anormalidad cromosómica es originada por una translocación recíproca entre los cromosomas 9 y 22 t(9;22)(q34;q11)2.

En el cromososma 22 se encuentra la región BCR (breakpoint cluster region), denominada también gen BCR, en el cual se puede distinguir la región mayor (M-bcr) entre los exones 12 y 16 (originalmente descritos como exones b1-b5), la región menor (m-bcr) ubicada entre los exones e2’ y e2 y la micro región (µ-bcr) ubicada en el exon 193-5.

Cuando una parte del gen ABL (Abelson) localizado en el cromosoma 9, es transferida e insertada dentro del gen BCR se origina el gen de fusión BCR-ABL. Los puntos de ruptura más frecuentes en el gen BCR ocurren en los exones: 1(e1), 12(b2), 13(b3) y 19(e19) y el punto de ruptura en el gen ABL habitualmente se produce en el exon 2(a2), generando los reordenamientos e1a2, b2a2 o b3a2 y el e19a2. Los productos de estos reordenamientos corresponden a proteínas de fusión de 190 kd (p190BCR-ABL), de 210 kd (p210BCR-ABL) y de 230 kd (p230BCR-ABL), asociadas principalmente a leucemia linfoblástica aguda (LLA), leucemia mieloide crónica (LMC) y LMC neutrófila respectivamente4,6-9.

Normalmente el gen ABL codifica una proteína de 145 kd, con actividad tirosinaquinasa que juega un rol crítico en el control y proliferación celular. Además se le ha asociado un rol en la respuesta celular al estrés genotóxico. En cambio las proteínas generadas del gen de fusión BCR-ABL tienen actividad tirosinaquinasa aumentada, lo que favorece la proliferación neoplásica de las células hematopoyéticas a nivel de células primitivas pluripotenciales, tanto en la LMC como en la LLA10-12. Recientemente se ha introducido como tratamiento en la LMC, la droga Gleevec (STI 571) que actúa precisamente inhibiendo la actividad de la tirosinaquinasa, con la cual se ha logrado respuestas clínicas en un alto porcentaje de pacientes con LMC, especialmente en la fase crónica o en la fase acelerada13,14.

El gen de fusión BCR-ABL está presente en más del 95% de las LMC y su detección tiene importancia diagnóstica6,15,16. Se ha visto que se negativiza el gen de fusión BCR-ABL con terapias prolongadas de Interferón Alfa16 y la detección de este gen post-trasplante alogénico de médula ósea, es considerado un predictor independiente de recaída15,18,19. En pacientes con LLA se ha detectado en el 3-5% de los niños y en el 20-30% de los adultos6,7,16,20,21. Su presencia es un factor de mal pronóstico y de riesgo independiente; presentando los pacientes una remisión de corta duración, por lo que se recomienda terapias más agresivas y/o considerar el trasplante de médula ósea18,20,21,23,24. En la LMA se ha detectado el gen de fusión BCR-ABL en el 2% de los casos y sobre el 30% en la leucemia bifenotípica, siendo en ambas también un factor de mal pronóstico16,25-27.

Durante varias décadas la detección y estudio de anormalidades citogenéticas se ha realizado mediante el análisis o mapeo cromosómico. Actualmente técnicas de biología molecular basadas en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) han permitido identificar más de 50 translocaciones cromosómicas, muchas de las cuales han demostrado ser específicas para distintos subtipos de leucemias. Una de las técnicas más usadas, es la PCR con transcripción reversa (RT-PCR), mediante la cual a partir de secuencias del ARN mensajero es posible detectar transcriptos de fusión del gen BCR-ABL e identificar diferentes reordenamientos según el punto de ruptura dentro del gen BCR con una mayor sensibilidad y especificidad que con el estudio citogenético15,28,29. De este modo, el uso de la técnica de RT-PCR entrega mayor información para el diagnóstico y pronóstico de las leucemias, como también es de gran utilidad en la detección de la enfermedad residual mínima (ERM) durante la remisión clínica15,20,23,29.

Aun cuando la técnica de RT-PCR está disponible en nuestro país, no existe información sobre la detección del gen de fusión BCR-ABL mediante esta técnica en pacientes con leucemia; sólo existen trabajos donde se ha utilizado citogenética y Southern Blot para la detección del cromosoma Philadelphia y reordenamientos del gen BCR, respectivamente30,31.

Dada la escasa información existente en nuestro medio y considerando que en la IX región el diagnóstico de los pacientes con leucemia no cuenta con el estudio citogénetico ni molecular, nos propusimos detectar transcriptos de fusión que codifican las proteínas p210BCR-ABL y p190BCR-ABL, mediante RT-PCR, en pacientes con leucemia mieloide crónica y pacientes con leucemia aguda.

MATERIAL Y MÉTODO

Casos. Se estudiaron 58 pacientes en forma consecutiva, niños y adultos, durante 1999-2000, con diagnóstico de LMC y leucemia aguda. Todos procedían de la Unidad de Hemato-Oncología del Hospital Temuco. Las muestras fueron obtenidas previo consentimiento informado del paciente o de un familiar cercano. El presente estudio fue aprobado de acuerdo a la Declaración de Helsinki, por el Comité de Etica del Hospital Temuco.

Recolección de muestras. Se procesaron indistintamente muestras de aspirado de médula ósea o sangre periférica32. Se recolectaron con EDTA, separando los leucocitos con una solución de Lymphoprep (Nycomed Pharma Norway). El concentrado de leucocitos se almacenó en tiocianato de guanidina a -70°C hasta la extracción de ARN la cual se realizó según el método de Chomczynski33.

RT-PCR. Esta técnica amplifica secuencias de ADN a partir de ARN mensajero. Mediante el uso de la enzima transcriptasa reversa, M-MLV (Gibco), se obtuvo una copia del ADN. Se utilizó como control interno un PCR simple, empleando un par de iniciadores dirigidos al gen DRB134. Posteriormente se realizó una PCR en nido con 30 y 35 ciclos y 64°C de temperatura de hibridación, usando 6 iniciadores (Tabla 1, Figura 1), que amplifican segmentos génicos de los transcriptos de fusión que codifican las proteínas p210BCR-ABL (456 ó 385 bp) y p190BCR-ABL (444 bp)15,28 (Figuras 2 y 3). Los segmentos amplificados fueron visualizados por electroforesis en gel de agarosa al 1,8% teñido con bromuro de etidio.



Figura 1. Representación esquemática del gen BCR y ABL. Se indican con flechas (|) los puntos de ruptura. En las 3 figuras inferiores, se representan los reordenamientos más frecuentes (e1a2, b2a2 y b3a2) y la proteína de fusión generada (p190 y p210).
bp: pares de bases.
Se indica la posición en el gen de los iniciadores utilizados en el presente estudio.

Para simplificar la nomenclatura nos referiremos a estos segmentos génicos de transcriptos de fusión amplificados como p190BCR-ABL y p210BCR-ABL.


Figura 2. RT-PCR de casos positivos para p210BCR-ABL correspondiente a reordenamiento b3a2 o b2a2.
Carril 1: marcador de ADN de 100 bp. Carril 2: control positivo. Carril 3 y 4: casos 1 y 2 con LMC. Carril 5 y 6: casos 6 y 7 con LLA. Carril 7: control negativo. Carril 8: control blanco. Las bandas representan un fragmento de 456 ó 385 bp. Gel agarosa 1,8% teñido con bromuro de etidio.
bp: pares de bases.
Figura 3. RT-PCR de casos positivos para 190BCR-ABL correspondiente a reodenamiento e1a2. Carril 1: marcador de ADN de 100 bp. Carril 2: control positivo. Carril 3: caso 1 con LMC. Carril 4: caso 7 con LLA. Carril 5: control negativo. Carril 6: control blanco. Las bandas representan un fragmento de 444 bp. Gel agarosa 1,8% teñido con bromuro de etidio.
bp: pares de bases.

Como control positivo se utilizaron células leucémicas positivas para p210BCR-ABL y p190BCR-ABL. Como control negativo se utilizaron leucocitos negativos para el gen de fusión BCR-ABL. Ambos controles fueron procesados simultáneamente con las muestras.

Todas las muestras positivas y negativas fueron reconfirmadas en otro laboratorio.

RESULTADOS

El diagnóstico hematológico de los pacientes fue el siguiente: LMC 5 casos (adultos), LLA 35 casos (28 niños y 7 adultos), leucemia mieloide aguda (LMA) 15 casos (6 niños y 9 adultos), leucemia bifenotípica 3 casos (2 niños y 1 adulto). El rango de edad de los niños fue de 7 meses a 15 años y de los adultos de 17 a 76 años. Dos de 5 pacientes con LMC y 19 de los 53 con leucemia aguda (35,8%), eran de raza mapuche.

La mayoría de los pacientes (54 casos) fueron estudiados al momento del diagnóstico, 3 pacientes con LMC durante el tratamiento y 1 paciente con LLA en una recaída.

El gen de fusión BCR-ABL fue detectado en 7/58 casos, en los 5 adultos con LMC y en 2 pacientes con LLA: 1/28 niños (3,6%) y 1/7 adultos (14,3%).

Leucemia mieloide crónica. Las características de los 5 casos con el gen BCR-ABL positivo se muestra en la Tabla 2. Los pacientes 1 y 2, que presentaron positividad a p210BCR-ABL y p190BCR-ABL fueron estudiados en fase acelerada y ambos habían recibido 9 meses de tratamiento con Hidroxiurea. El paciente 3, quien recibió tratamiento con Hidroxiurea, Busulfán e Interferón alfa durante 8 meses previo al estudio, se le detectó únicamente p210BCR-ABL.


Leucemia linfoblástica aguda. Las características de los casos positivos se presentan en la Tabla 2. El paciente 6 presentó positividad para p210BCR-ABL y el paciente 7 presentó positividad para p210BCR-ABL y p190BCR-ABL. Ambos pacientes tenían morfología FAB-L2, inmunofenotipo común y recuento de leucocitos elevado (>100 x103/uL). Los dos pacientes recayeron precozmente en médula ósea, después de 5 y 8 meses de remisión, respectivamente.

Leucemia mieloide aguda y leucemia bifenotípica. Los 15 pacientes con LMA y los 3 con leucemia bifenotípica no fueron positivos para el gen de fusión BCR-ABL.

DISCUSIÓN

La detección del gen de fusión BCR-ABL en pacientes de la IX región, reveló una frecuencia similar a la descrita en la literatura, a pesar del número limitado de casos estudiados.

En nuestro grupo de LMC encontramos positividad de p210BCR-ABL en los 5 pacientes analizados, de los cuales 2 pacientes en fase acelerada expresaron p210BCR-ABL y p190BCR-ABL. La presencia de la co-expresión de p210BCR-ABL y p190BCR-ABL es explicada como consecuencia de un evento alternativo o "missplicing" en el gen BCR. Aunque este hecho de co-expresión sólo ha sido detectado mediante RT-PCR en casos esporádicos de LMC en crisis blástica35-37. Estos resultados podrían hacernos pensar que en nuestra población de LMC la co-expresión de p210BCR-ABL y p190BCR-ABL sería un hallazgo más frecuente, que lo observado en la literatura.

Por otro lado, se ha observado que el tipo de quimioterapia empleado afecta la expresión de p210BCR-ABL y p190BCR-ABL. Utilizando la técnica RT-PCR, se ha detectado que la presencia del gen de fusión BRC-ABL se negativiza en los pacientes que están bajo terapia prolongada con Interferón alfa17. A nuestro paciente con LMC en crisis blástica sólo le detectamos p210BCR-ABL y no p190BCR-ABL, como podría esperarse por estar cursando una crisis blástica. Este hecho de no detección de p190BCR-ABL podría explicarse por una baja carga tumoral o por haber recibido este paciente, terapia con Interferón alfa durante un tiempo lo cual no fue suficiente para negativizar la presencia de p210BCR-ABL.

Por otra parte, se ha visto que el uso de terapia convencional no negativiza la detección del gen de fusión BRC-ABL38, lo cual explicaría porqué los pacientes 1 y 2 (tratados con Hidroxiurea), continuaban expresando p210BCR-ABL y p190BCR-ABL durante su tratamiento.

En los últimos años, mediante PCR competitiva, los transcriptos de fusión para la p190BCR-ABL, asociados clásicamente a la LLA, han podido ser detectados aunque en bajos niveles en la mayoría de los pacientes con LMC al momento del diagnóstico, en todos los pacientes con LMC en crisis blástica y en los pacientes con LLA que expresan p210BCR-ABL39,40.

Con respecto a la LLA, los 2 pacientes positivos para el gen de fusión BCR-ABL, presentaron al diagnóstico una leucocitosis marcada, morfología FAB-L2 e inmunofenotipo común, falleciendo ambos pacientes por recaída medular precoz. Estas características clínicas concuerdan con la descripción de la literatura22-24. Si bien se señala que transcriptos de fusión para p190BCR-ABL son detectados con mayor frecuencia en la LLA7,21, nuestros casos fueron inusuales. El paciente 6 expresó sólo p210BCR-ABL, hecho que se ha descrito en la literatura con una frecuencia entre 5 y 46%20,7,8,21,37 y el paciente 7 co-expresó p210BCR-ABL y p190BCR-ABL, hallazgo reportado en un número reducido de casos (3/90 y 1/24) con LLA7,37.

En nuestros pacientes con LMA y leucemia bifenotípica, no detectamos p210BCR-ABL ni p190BCR-ABL hecho que podríamos atribuir al escaso número de pacientes estudiados.

La técnica de RT-PCR para la detección de los transcriptos de fusión que codifican la proteína p230BCR-ABL no se incluyó en este estudio, por tener la LMC neutrófila una muy baja frecuencia en la población9, lo cual disminuye mucho las posibilidades de estudiar pacientes que presenten esta patología.

En conclusión, consideramos fundamental realizar este estudio tanto en los pacientes con LMC para confirmar el diagnóstico, como en los pacientes con LLA, debido a la implicancia pronóstica que tiene la detección de p210BCR-ABL y p190BCR-ABL y para monitorizar el tratamiento, ya que la detección de transcriptos del gen de fusión BCR-ABL, aporta relevante información que permite diseñar estrategias de tratamiento apropiadas.

REFERENCIAS

1. Nowell PC, Hungerford DA. A minute chromosome in human chronic granulocytic leukemia. Science 1960; 132: 1497-500.         [ Links ]

2. Rowley JD. A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and Giemsa staining. Nature 1973; 243: 290-3.         [ Links ]

3. Heisterkamp N, Stam K, Groffen J, De Klein A, Grosveld G. Structural organization of the BCR gene and its role in the Ph translocation. Nature 1985; 315: 758-61.         [ Links ]

4. Deininger M, Goldman J, Melo J. The molecular biology of chronic myeloid leukemia. Blood 2000; 96: 3343-56.         [ Links ]

5. Laurent E, Talpaz M, Kantarjian H, Kurzrock R. The BCR Gene and Philadelphia Chromosome-positive Leukemogenesis. Cancer Res 2001; 61: 2343-55.         [ Links ]

6. Kurzrock R, Gutterman J, Talpaz M. The molecular genetics of Philadelphia chromosome-positive leukemias. N Engl J Med 1988; 319: 990-8.         [ Links ]

7. Maurer J, Janssen JW, Thiel E, Van Denderen J, Ludwig WD, Aydemir U et al. Detection of chimeric BCR-ABL genes in acute lymphoblastic leukaemia by the polymerase chain reaction. Lancet 1991; 337: 1055-8.         [ Links ]

8. Melo JV, Gordon DE, Tuszynski A, Dhut S, Young BD, Goldman JM. Expression of the ABL-BCR fusion gene in Philadelphia-positive acute lymphoblastic leukemia. Blood 1993; 81: 2488-91.         [ Links ]

9. Pane F, Frigeri F, Sindona M, Luciano L, Ferrara F, Cimino R et al. Neutrophilic-Chronic Myeloid Leukemia: A distinct disease with a specific molecular marker (BCR/ABL with C3/A2 junction). Blood 1996; 88: 2410-4.         [ Links ]

10. Lisker R. El cromosoma Philadelphia. En: Ruiz-Argüelles GJ, San Miguel JF. Actualización en Leucemias. México DF: Editorial Médica Panamericana, 1996; 97-106.         [ Links ]

11. Sánchez-García I, Grütz G. The tumorigenic activity of the BCR-ABL genes is mediated by BCL-2. Proc Natl Acad USA 1995; 92: 5287-91.         [ Links ]

12. Cobaleda C, Gutiérrez-Cianca J, Pérez-Losada T, Flores R, García-Sanz M, González M et al. A primitive hematopoietic cell is the target for the leukemic transformation in human Philadelphia- positive acute lymphoblastic leukemia. Blood 2000; 95: 1007-13.         [ Links ]

13. Kawaguchi Y, Jinnai I, Nagai K, Yagasaki F, Yakata Y, Matsuo T et al. Effect of a selective Abl tyrosine kinase inhibitor, STI571, on in vitro growth of BCR-ABL-positive acute lymphoblastic leukemia cells. Leukemia 2001; 15: 590-4.         [ Links ]

14. Buchdunger E, Zimmermann J, Mett H, Meyer T, Muller M, Regenass U et al. Selective inhibition of the platelet-derived growth factor signal transduction pathway by a protein-tyrosine kinase inhibitor of the 2-phenylaminopyrimidine class. Proc Natl Acad Sci USA 1995; 92: 2558-62.         [ Links ]

15. Cross N, Hughes T, Feng L, O’Shea P, Bungey J, Marks D et al. Minimal residual disease after allogeneic bone marrow transplantation for chronic myeloid leukaemia in first chronic phase: correlation with acute graft-versus-host disease and relapse. Br J Haemat 1993; 84: 67-74.         [ Links ]

16. Faderl S, Talpaz M, Estrov Z, O’Brien S, Kurzrock R, Kantarjian H. The biology of chronic myeloid leukemia. N Engl J Med 1999; 341: 164-72.         [ Links ]

17. Eren E, Aytac U, Tetik E, Akman O, Kansu E, Gunduz U. Detection of BCR-ABL gene rearrangement and the elimination of rearranged clone in chronic myelocytic leukemia patients. Am J Hematol 2000; 63: 85-9.         [ Links ]

18. Radich JP, Gehly G, Gooley T, Bryant E, Clift RA, Collins S et al. Polymerase chain reaction detection of the BCR-ABL fusion transcript after allogeneic marrow transplantation for chronic myeloid leukemia: results and implications in 346 patients. Blood 1995; 85: 2632-8.         [ Links ]

19. Serrano J, Román J, Sánchez J, Jiménez A, Castillejo J, Herrera C et al. Molecular analysis of lineage-specific chimerism and minimal residual disease by RT-PCR of p210BRC-ABL and p190BCR-ABL after allogeneic bone marrow transplantation for chronic myeloid leukemia: increasing mixed myeloid chimerism and p190BCR-ABL detection precede cytogenetic relapse. Blood 2000; 95: 2659-65.         [ Links ]

20. Beyermann B, Agthe A, Adams H, Seeger K, Linderkamp C, Goetze G et al. Clinical features and outcome of children with first marrow relapse of acute lymphoblastic leukemia expressing BCR-ABL fusion transcripts. Blood 1996; 87: 1532-8.         [ Links ]

21. Westbrook C, Hooberman A, Spino C, Dodge R, Larson R, Davey F et al. Clinical significance of the BCR-ABL fusion gene in adult acute lymphoblastic leukemia: A cancer and leukemia group B study (8762). Blood 1992; 80: 2983-90.         [ Links ]

22. Fletcher JA, Lynch EA, Kimball VM, Donnelly M, Tantravahi R, Sallan SE. Translocation (9;22) is associated with extremely poor prognosis in intensively treated children with acute lymphoblastic leukemia. Blood 1991; 77: 435-9.         [ Links ]

23. Beyermann B, Adams HP, Henze G. Philadelphia chromosome in relapsed childhood acute lymphoblastic leukemia; a matched-pair analysis. J Clin Oncol 1997; 15: 2231-7.         [ Links ]

24. Rambaldi A, Attuati V, Bassan R, Neonato MG, Viero P, Battista R et al. Molecular diagnosis and clinical relevance of t(9;22), t(4;11) and t(1;19) chromosome abnormalities in a consecutive group of 141 adult patients with acute lymphoblastic leukemia. Leuk Lymphoma 1996; 21: 457-66.         [ Links ]

25. Paietta E, Racevskis J, Bennett JM, Neuberg D, Cassileth PA, Rowe JM et al. Biologic heterogeneity in Philadelphia chromosome-positive acute leukemia with myeloid morphology: the Eastern Cooperative Oncology Group experience. Leukemia 1998; 12: 1881-5.         [ Links ]

26. Carbonell F, Swansbury J, Min T, Matutes E, Farahat N, Buccheri V et al. Cytogenetic findings in acute biphenotypic leukaemia. Leukemia 1996; 10: 1283-7.         [ Links ]

27. Killick S, Matutes E, Powles RL, Hamblin M, Swansbury J, Treleaven JG et al. Outcome of biphenotypic acute leukemia. Haematologica 1999; 84: 699-706.         [ Links ]

28. Cross N. Detection of BCR-ABL in Hematological Malignancies by RT-PCR. En: Cotter F. Molecular diagnosis of cancer. Totowa, New Jersey: Humana Press 1996; 25-36.         [ Links ]

29. Van Dongen JJ, MacIntyre EA, Gabert JA, Delabesse E, Rossi V, Saglio G et al. Standardized RT-PCR analysis of fusion gene transcripts from chromosome aberrations in acute leukemia for detection of minimal residual disease. Report of the BIOMED-1 Concerted Action: investigation of minimal residual disease in acute leukemia. Leukemia 1999; 13: 1901-28.         [ Links ]

30. Lira P, Barriga F, Risueño C, Alfaro J, Legües ME, Grebe G. Leucemia mieloide crónica: estudio citogenético y molecular y su relación con la evolución de la enfermedad. Rev Méd Chile 1993; 121: 864-72.         [ Links ]

31. Legües ME, Campbell M, Cabrera ME, Vargas L, Becker A, Salgado C et al. Estudios citogenéticos en niños chilenos con leucemia linfoblástica aguda. Rev Méd Chile 1994; 122: 1239-47.         [ Links ]

32. Lin F, Goldman JM, Cross N. A comparison of the sensitivity of blood and bone marrow for the detection of minimal residual disease in chronic myeloid leukaemia. Br J Haematol 1994; 86: 683-5.         [ Links ]

33. Chomczynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Analytical biochemistry 1987; 162: 156-9.         [ Links ]

34. Artigas CG, Melo A. Gen DRB-1: Su utilidad como control interno en la técnica de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa reversa (RT-PCR). Rev Chil Cs Méd Biol 2000; 10: 47-50.         [ Links ]

35. Lichty BD, Keating A, Callum J, Yee K, Croxford R, Corpus G et al. Expression of p210 and p190 BCR-ABL due to alternative splicing in chronic myelogenous leukaemia. Br J Haematol 1998; 103: 711-5.         [ Links ]

36. Tanaka M, Yamazaki Y, Hattori M, Tsushita K, Utsumi M, Yoshida S. The dual expression of minor and major BCR-ABL chimeric mRNA in blast crisis of chronic myelogenous leukemia. Leuk Res 1996; 20: 575-80.         [ Links ]

37. Kantarjian HM, Talpaz M, Dhingra K, Estey E, Keating MJ, Ku S et al. Significance of the p210 versus p190 molecular abnormalities in adults with Philadelphia chromosome-positive acute leukemia. Blood 1991; 78: 2411-8.         [ Links ]

38. Osorio G, Muñoz L. Leucosis mieloide crónica. En: Osorio G. Hematología, Diagnóstico y Terapéutica. Santiago. Publicaciones Técnicas Mediterráneo, 1997; 206-19.         [ Links ]

39. Van Rhee F, Hochhaus A, Lin F, Melo JV, Goldman JM, Cross N. p190 BCR-ABL mRNA is expressed at low levels in p210-positive chronic myeloid and acute lymphoblastic leukemias. Blood 1996; 87: 5213-7.         [ Links ]

40. Saglio G, Pane F, Gottardi E, Frigeri F, Buonaiuto MR, Guerrasio A et al. Consistent amounts of acute leukemia-associated p190BCR-ABL transcript are expressed by chronic myelogenous leukemia patients at diagnosis. Blood 1996; 87: 1075-80.         [ Links ]

Agradecimientos:

Agradecemos a la Sra. Concepción Risueño de la Pontificia Universidad Católica de Chile por la confirmación de los resultados, así como por su valiosa cooperación en el montaje de esta técnica, y a la Dra. María Elena Cabrera por la revisión del manuscrito.


Correspondencia a: Carmen Gloria Artigas A. Departamento Medicina Interna, Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera. Casilla 54-D. Temuco-Chile. Fono: 45-325220. Fax: 45-325236. E-mail: cgartiga@ufro.cl

Creative Commons License Todo el contenido de esta revista, excepto dónde está identificado, está bajo una Licencia Creative Commons