SciELO - Scientific Electronic Library Online

 
vol.130 número8Estudio clínico-genético molecular de la fibrosis quística en la V Región, Chile índice de autoresíndice de assuntospesquisa de artigos
Home Pagelista alfabética de periódicos  

Serviços Personalizados

Journal

Artigo

Indicadores

Links relacionados

Compartilhar


Revista médica de Chile

versão impressa ISSN 0034-9887

Rev. méd. Chile v.130 n.8 Santiago ago. 2002

http://dx.doi.org/10.4067/S0034-98872002000800001 

Rev Méd Chile 2002; 130: 841-849

Anticuerpos a proteínas recombinantes Ro60
Kd, Ro52 Kd y La48 Kd, en el síndrome de
Sjögren primario. Utilidad de la combinación
de métodos analíticos para detectar
anticuerpos anti Ro y anti La

Sergio Aguilera C, María Julieta González B1, Paola Pérez R2,
Darwin Castillo A3, Héctor Gatica R.

Antibodies against recombinant Ro 60 Kd,
Ro52 Kd and La 48 Kd proteins in primary
Sjögren's Syndrome

Background: The use of new recombinant antigens may increase the sensitivity and specificity of the detection of anti Ro and anti La antibodies in Sjögren's syndrome. Aim: To determine the immune reactivity of sera from patients with Sjögren's syndrome, against fusion recombinant proteins (prf) Ro60 Kd, Ro52 Kd and La48 Kd expressed in E coli and recombinant protein Ro52 Kd, expressed in baculovirus (prb). Material and methods: Serum samples from 46 patients with a diagnosis of Sjögren's syndrome, according to the European criteria of 1997, were studied. Using conventional ELISA assays, 32 patients had positive anti Ro antibodies (group A) and 16 patients had negative anti Ro and anti La antibodies, but had positive antinuclear antibodies or rheumatoid factors (group B). Antibodies against recombinant proteins were measured by ELISA or Western Blot. Results: Reactivity against prf Ro60 was present in 69% of samples from group A patients and in 36% of samples from group B. Reactivity against prf Ro52 was present in 94% of samples from group A and 50% of samples from group B. Reactivity against prb Ro52 was present in 75% of samples from group A and 40% of samples from group B. Reactivity against prf La was present in 78% of samples by ELISA and 97% of samples by Western Blot. In 10 of 14 serum samples from group B patients, there was reactivity against at least one recombinant protein. Conclusions: A high prevalence of reactivity against recombinant Ro and La proteins was detected in serum samples from patients with Sjögren syndrome (Rev Méd Chile 2002; 130: 841-9).
(Key Words: Antibody specificity; Recombinant proteins; Sjögren syndrome)

Recibido el 13 de marzo, 2002. Aceptado en versión corregida el 3 de julio, 2002.
Financiado parcialmente por Clínica Indisa, Instituto Karolinska de Suecia, Laboratorios Tecnofarma
y Fondecyt #1020755.
1 Master en Ciencias, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
2 Bioquímico, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
3 Bioquímico, Clínica Indisa. Santiago de Chile.

El síndrome de Sjögren primario (SSp) es un desorden autoinmune sistémico que afecta principalmente a las glándulas exocrinas, llevando a los bien conocidos síntomas de sequedad. Ocurre en ausencia de otras enfermedades del tejido conectivo1. El infiltrado linfocítico focal de las glándulas exocrinas y la presencia de marcadores serológicos de autoinmunidad, tales como anticuerpos antinucleares (ANA), factores reumatoideos (FRs), y particularmente autoanticuerpos contra las ribonucleoproteínas Ro y La, son los marcadores principales en el diagnóstico de síndrome de Sjögren (SS)2. Clínicamente, el SSp tiene un amplio espectro que va de una enfermedad confinada a las glándulas exocrinas, a una enfermedad sistémica con gran variedad de manifestaciones extraglandulares o sistémicas. Algunos pacientes pueden aun desarrollar una gamopatía monoclonal o un linfoma de células B3.

No hay un criterio de diagnóstico universalmente aceptado para el diagnóstico de SS y esto ha llevado a confusión tanto en la investigación clínica como en la práctica. El criterio modificado de 1997, el cual requiere para diagnosticar la enfermedad la demostración de anti Ro y/o anti La, y/o una biopsia positiva de glándulas salivales4,5, ofrece ventajas si se compara con el criterio europeo de 1993 y el criterio americano, y parece estar ganando una amplia aceptación6,7. Las técnicas convencionales para detectar anti Ro en el suero de pacientes con SS, frecuentemente no detectan el altamente prevalente anti Ro528,9, por esto, el uso de antígenos recombinantes para pesquisar autoanticuerpos en el suero de pacientes con SS y de otras enfermedades del tejido conectivo (ETC), han recibido una mayor atención10,11. Puesto que estos autoanticuerpos no son específicos para el SS, su presencia debe ser interpretada en el contexto clínico12. La frecuencia de anti Ro y anti La en el SS publicadas, depende del método empleado para la detección, los criterios de clasificación utilizado para seleccionar los pacientes y ciertos sesgos como el interés de los centros de referencia para estudiar la enfermedad. La contrainmunoelectroforesis y ELISA son usualmente los métodos más ampliamente usados para detectar anti Ro y anti La13,14. El Western blot (WB), ensayo radioligante cuantitativo o el immunoensayo en línea dan una más alta prevalencia de autoanticuerpos que las técnicas previamente mencionadas10,15. El uso de nuevos antígenos recombinantes, puede aumentar la sensibilidad y especificidad para la detección de anti Ro (60 y 52) y anti La10,11,16.

El objetivo de este estudio fue buscar la presencia de autoanticuerpos contra antígenos recombinantes Ro60, Ro52 y La48 en el suero de pacientes con SSp. El 100% de los pacientes seropositivos a Ro/La comercial tenían alguna reacción positiva a antígenos recombinantes, y en grupo Ro/La negativos, 70% eran positivos con antígenos recombinantes. Los resultados fueron correlacionados con los hallazgos clínicos y de laboratorio y se determinó el grado de concordancia entre los diferentes métodos para detectar los anticuerpos.

MATERIA Y MÉTODO

Pacientes con SSp y criterios de diagnóstico. Cuarenta y seis pacientes mujeres cumplían por lo menos con 4 de los 6 ítemes de acuerdo al criterio europeo modificado de 19974,5 para el diagnóstico definitivo de SSp. Ellas necesitaron tener por los menos anticuerpos anti Ro/La y/o una biopsia positiva de glándulas salivales menores de labio con un score de foco de linfocitos ≥1 en 4 mm2. Las pacientes fueron evaluadas de acuerdo a las indicaciones establecidas por grupos de trabajo de criterios de diagnóstico para el SS17,18. Se obtuvo consentimiento informado de todas las pacientes, siguiendo las pautas del Comité de Ética de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile. Las pacientes fueron agrupadas en 2 categorías de acuerdo a su perfil de autoanticuerpos avaluado con la técnica convencional de ELISA20-22: Grupo A (n=32) incluyó pacientes que fueron anti Ro positivas, y en grupo B (n=16) pacientes que fueron anti Ro y anti La negativas, pero tenían pruebas positivas para ANA y/o FRs.

Pruebas de laboratorio. Un completo set de exámenes de laboratorio de rutina fue realizado a todas las pacientes estudiadas. Valores anormales fueron considerados como sigue: anemia cuando el hematocrito fue <35%, leucopenia si el recuento de glóbulos blancos fue <4.000 células por mm3, trombocitopenia si la cuenta de plaquetas era <150.000 mm3, VHS alta >20 mm/h (Westerngren), hipergamaglobulinemia cuando el total de gamaglobulina fue ³1,6 g/L. ANA fueron detectados por IFI en células Hep-2, fueron considerados positivos si el suero era ³1/160. FRs fueron considerados positivos si eran ³1/180 (técnica látex) o 1/32 (técnica de Waaler Rose). Autoanticuerpos a antígeno nuclear extractable: Ro, La, Sm y nRNP fueron determinados por ELISA comercial (Inova Diagnostic, Inc., San Diego, USA). Los antígenos nativos que preservan la estructura conformacional tridimensional, fueron obtenidos de extractos de timo de ternera. Se siguieron las recomendaciones del fabricante para la realización de las pruebas de ELISA19. En caso de resultado en el límite, la prueba fue considerada positiva sólo si el resultado podía ser duplicado con un kit diferente de otro laboratorio. Anti Ro y anti La fueron realizados por lo menos 2 veces al año. Las crioglobulinemias fueron medidas por criocrito y clasificadas en base a su composición (tipo I, II, III). La gamopatía monoclonal fue caracterizada por inmunoelectroforesis e inmunofijación en suero y orina. Complemento C3 y C4 fueron medidos por nefelometría y el CH50 por la técnica hemolítica, (rangos normales: 100-200 mg/dL, 18-48 mg/dL y 120-200 U/mL, respectivamente). IgG, IgA e IgM sérica fueron determinadas por nefelometría (rangos: 723 a 1.650 mg/dL, 69 a 360 mg/dL y 63 a 250 mg/dL, respectivamente). También estudiamos la presencia de otros autoanticuerpos tales como anti dsDNA, anti Jo-1, anti ScL-70, anticardiolipinas (IgG e IgM), anti centrómero y anti citoplasmático de los neutrófilos (anti proteinasa-3 y anti mieloperoxidasa).

Proteínas recombinantes. Las proteínas recombinantes de fusión (prf) fueron donadas por la Dra. Marie Wahren-Herlenius, del Instituto Karolinska de Suecia. Brevemente, el DNA humano complementario que codificó las proteínas Ro60 Kd, Ro52 Kd y La48 Kd fueron expresadas usando el vector pMAL (fusion partner). El constructo pMAL fue expresado en Escherichia coli TB-1 y purificado como se ha descrito previamente23,24. Los kits de ELISA que contenían la proteína recombinante Ro52 Kd expresada en baculovirus (prb) fueron donados por el laboratorio INOVA, y fueron usadas como está indicado en el producto. Brevemente, el gen humano que codifica Ro52 Kd, fue clonado en un baculovirus y expresado en células de insecto en cultivo (Spodoptera frugipoda)16. Como controles se usaron 20 sueros de sujetos normales, todos fueron negativos para los antígenos recombinantes estudiados.

Anticuerpos contra antígenos recombinantes de fusión. La detección de anti Ro60 Kd, anti Ro52 Kd y anti La48 Kd contra prf fueron realizadas por el Dr. Lars Ottoson en el Centro de Medicina Molecular del Instituto Karolinska de Suecia, usando las técnicas de ELISA y WB, como se ha comunicado previamente23,24.

Análisis estadístico. Comparaciones fueron hechas usando la prueba exacta de Fisher25 para variables discretas. P <0,05 fue considerada como una diferencia significativa. La concordancia entre las pruebas fue evaluada por el coeficiente Kappa (k)26.

RESULTADOS

Correlación de los grupos serológicos y los hallazgos clínicos. La Tabla 1 resume las principales características clínicas y de laboratorio de los grupos A y B. El promedio de edad era menor (39,3 vs 63,7 años) y la hipergammaglobulinemia (46,8% vs 7,1%) más frecuente en el grupo A que en el B. Una paciente del grupo A tuvo una gamopatía benigna (IgGk) y otra paciente del grupo B sufrió de un linfoma de células B en la piel del muslo.


Reactividad del grupo A a los antígenos recombinantes. En la Tabla 2 se muestra la frecuencia de los autoanticuerpos a antígenos nativos (ELISA comercial) y recombinantes. Todos los sueros eran positivos para Ro y 81% para La, con ELISA comercial. Pero, sólo 50% de los sueros fueron reactivos con la prf Ro60 Kd por ELISA y 66% fueron positivos por WB. Anticuerpos contra la prf Ro52 Kd fueron detectados en alta frecuencia por ELISA (94%) y WB (97%). Los anticuerpos a prb Ro52 Kd fueron encontrados en 75% de los sueros, porque seis sueros reactivos a la prf Ro52 Kd carecían de reactividad prb con Ro52 Kd. Los sueros eran positivos con la prf La en 78% (ELISA) y 97% (WB). Sólo un suero fue negativo para prf La con las pruebas usadas.


Reactividad del grupo B a los antígenos recombinantes. En las Tablas 2 y 3 se muestra el perfil de autoanticuerpos a antígenos recombinantes y las manifestaciones extraglandulares. Anti Ro60 Kd fue detectado en 1 suero por ELISA y 5 por WB, anti prf Ro52 Kd se identificó en 4 sueros por ELISA y 7 por WB. Los mismos 4 sueros positivos por ELISA a prf fueron también positivos con prb Ro52 Kd. En 4 sueros sólo se detectó anti Ro52 Kd, en ausencia de anti Ro60 Kd. Anticuerpos anti prf La48 Kd se encontraron en 9 de los 14 sueros (64%), en 6 sueros por ELISA y en 5 por WB. Dos sueros fueron positivos con ambas técnicas. En resumen, 10 de los 14 sueros (70%) tenían anticuerpos contra proteínas recombinantes.


Correlación entre ELISA y WB. La Tabla 4 muestra el coeficiente kappa de concordancia entre ELISA y WB, para detectar anti Ro60 Kd, anti Ro52 Kd y anti La48 Kd a prf25,26. En el grupo A se observó una concordancia moderada de ELISA y WB para anti Ro60 Kd (k= 0,563) y una concordancia sustancial para anti Ro52 Kd (k= 0,625). Ambas técnicas tenían similar sensibilidad para detectar anticuerpos. En el grupo B fue encontrada sólo una moderada concordancia para anti prf Ro52 Kd entre ELISA y WB.


DISCUSIÓN

Determinamos la reactividad y especificidad de sueros de pacientes con SSp a antígenos nativos y recombinantes. De los 46 sueros, 42 (91%) tuvieron reactividad a ELISA comercial y/o a las pruebas extras con antígenos recombinantes. Diez de 14 sueros (71%), que fueron negativos para anti Ro y La con ELISA comercial, fueron positivos a antígenos recombinantes. Las proteínas nativas Ro60 Kd, Ro52 Kd y La48 Kd son importantes autoantígenos presentes principalmente en el SS y lupus eritematoso sistémico10. La significancia biológica de estos hallazgos, sin embargo, es poco conocida.

La proteína Ro60 Kd existe asociada no covalente con una de los 4 hYRNA pequeños, y con La48 Kd. Se ha determinado que Ro60 Kd puede funcionar como parte del control de la vía de descarte para los precursores de RNA ribosomal 5S defectuosos11,27. Ro60 Kd tiene por lo menos 20 distintos epítopes primarios y su antigenicidad depende principalmente de la estructura terciaria de la molécula11,28,29. Todas las pacientes del grupo A tenían anti Ro positivo (ELISA comercial). Sin embargo, sólo 50% de los sueros fueron reactivos a la prf Ro60 Kd por ELISA y 66% fueron positivos con WB. Los resultados demuestran que el uso de la prf Ro60 Kd puede preservar parcialmente la antigenicidad en casi la mitad de los sueros, mejor sensibilidad se obtuvo con el ELISA comercial. Esta falta de concordancia podría explicarse por diferencias en los epítopes y/o en la afinidad de los anticuerpos, como resultado del problema potencial en la conformación que tienen las prf por una inadecuada modificación post traduccional como fosforilación o metilación, o bien por la degradación que pueden tener las proteínas durante su extracción2,15. En el grupo B de pacientes, 47% de sus sueros fueron reactivos con el recombinante Ro60 Kd. Estos resultados también podrían sugerir la presencia de epítopes específicos en el recombinante Ro60 Kd que no tendrían reacción cruzada con el antígeno natural detectado con ELISA9,29,30.

La asociación física de la proteína Ro52 Kd a la partícula Ro60/La ha sido controvertida. De acuerdo a los datos de la purificación bioquímica Ro52 no estaría asociada a ella31. Sin embargo, hay también evidencias que sugieren que Ro52 puede participar en el complejo con Ro60 vía calreticulina o por una interacción proteína-proteína32,33. Anticuerpos a Ro52 Kd no son tan dependientes de la estructura terciaria y tienden a reconocer preferentemente proteínas denaturadas34. Con la excepción de un suero anti Ro positivo del grupo A, todos los otros sueros contenían anticuerpos que reconocían a la prf Ro52 Kd. Otros autores han informado frecuencias de respuesta anti Ro52 Kd similares, realizando radioimmunoensayo en línea con Ro52 Kd denaturado o con ELISA10,15. Sólo 75% de los sueros del grupo A fueron reactivos a la proteína prb que se caracteriza por ser similar a la proteína humana nativa Ro52. Estos resultados podrían ser explicados, en parte, por las diferencias estructurales terciarias entre el prf y prb de 52 Kd34,35.

Las pacientes también mostraron una alta tasa de anticuerpos contra el antígeno recombinante La (87%). La proteína La48 Kd se une a hYRNAs pequeños que están asociados por lo menos transitoriamente con el Ro60 Kd como un componente de la partícula Ro/La36 y entre otras funciones biológicas es conocida su función en la formación de transcriptos de RNA polimerasa III37. En el grupo A encontramos una alta frecuencia de anticuerpos anti La nativo (81%) y a prf La (78%). Tres sueros fueron reactivos sólo al antígeno recombinante y otros 3 positivos sólo con antígeno nativo. La alta sensibilidad del recombinante La para detectar anti La (50% de positividad) es también demostrada en el grupo B que era negativo para anti La nativo por ELISA. Estos resultados están de acuerdo con otras observaciones que indican que diferentes tipos de epítopes podrían ser reconocidos por los anticuerpos anti La recombinante10,38.

En la determinación de anticuerpos contra antígenos recombinantes, muchas son pruebas de investigación aún no validadas que pronto estarán disponibles comercialmente, y van a requerir de una estandarización entre los laboratorios39,40. Los ensayos con antígenos recombinantes pueden ser de ayuda en el diagnóstico de SS y el diagnóstico diferencial de otras enfermedades que producen síntomas de sicca tales como infecciones virales crónicas con HTLV-1, HIV o hepatitis C41 y fibromialgia reumática42.

El papel patogénico de anti Ro y anti La no ha sido aún clarificado. Sin embargo, es conocido que ellos podrían inducir bloqueo cardíaco congénito en niños con lupus neonatal43,44. Se ha demostrado que la producción de estos anticuerpos, también ocurre en las glándulas salivales de labio de pacientes con SS23. A pesar de su potencial papel patogénico de estos anticuerpos y su alta frecuencia en los sueros, no todos los pacientes desarrollan manifestaciones extraglandulares. Las evidencias disponibles indican que las manifestaciones sistémicas pueden también resultar de otros factores patogénicos tales como apoptosis anormal, presencia de complejos inmune, producción de otros anticuerpos, alteraciones en la producción de citoquinas, excesiva sobre expresión de algunas metaloproteinasas o factores genéticos21,44,46-49. Diferencias cualitativas y/o cuantitativas en la especificidad fina de los autoanticuerpos contra Ro60 Kd, Ro52 Kd y La48 Kd, que reconoce epítopes precisos podría ayudar a entender los mecanismos biológicos que llevan al daño tisular en el SS y su significado clínico50.

Los resultados también apoyan la existencia de los 2 grupos de pacientes con SSp obtenidos con ELISA comercial y otras técnicas convencionales. El grupo A eran pacientes jóvenes con una mayor expresión de autoanticuerpos anti Ro y anti La. Este hallazgo se ha asociado a un compromiso inflamatorio más agresivo de las glándulas exocrinas, aumento de la incidencia de compromiso extraglandular; y mayor frecuencia de marcadores genéticos HLA-B8, DR3 y DRw52; comparado con el grupo B de edad significativamente mayor21,51.

En resumen, se enfatiza la utilidad de usar antígenos recombinantes para detectar anticuerpos anti Ro60, anti Ro52 y anti La48 en pacientes con SS diagnosticados de acuerdo al criterio europeo revisado de 1997. Un número significativo de pacientes a quienes les ha sido dado el término "Síndrome de Sjögren anti Ro y/o anti La negativo", pueden tener reactividad con antígenos recombinantes, la separación del SS en subgrupos de acuerdo al perfil serológico debería ser revisada.

REFERENCIAS

1. Talal N, Moutsopoulos HM, Kassan SS, Eds. Sjögren's syndrome. Clinical and immunological aspects. Springer Verlag Berlin 1987. ISBN: 3-540- 174777-X.         [ Links ]

2. Fox RI, Saito I. Criteria for diagnosis of Sjögren's syndrome. Rheum Dis Clin North Am 1994; 2: 391-407.         [ Links ]

3. Talal N. Sjögren's syndrome: Historical overview and clinical spectrum of disease. Rheum Dis Clin North Am 1992; 18: 507-15.         [ Links ]

4. Vitali C, Bombardieri S, Moutsopoulos HM, Coll J, Gerli R, Hatron PY et al. Assessment of the European classification criteria for Sjögren's syndrome in a series of clinically defined cases: results of a prospective multicentre study. Ann Rheum Dis 1996; 55: 116-21.         [ Links ]

5. Vitali C, Bombardieri S and European Study Group on Diagnostic Criteria for SS. The European classification criteria for Sjögren's syndrome (SS). Proposal for modification of the rules for classification suggested by the analysis of the receiver operating characteristic (ROCS) curve of the criteria performance. J Rheum 1997; 24 (Suppl): S18.         [ Links ]

6. Fox RI. Sjögren's syndrome. Controversies and progress. Clinics Lab Med 1997; 17: 431-44.         [ Links ]

7. Fox RI, Tornwall J, Murayama T, Stern M. Evolving concepts of diagnosis, pathogenesis and therapy of Sjögren's syndrome. Curr Opin Rheumatol 1998; 10: 446-56.         [ Links ]

8. McCauliffe DP, Wang L, Satoh M, Reeves WH, Small D. Recombinant 52 Kd Ro (SSA) ELISA detects autoantibodies in Sjögren's syndrome sera that go undetected by conventional serologic assays. J Rheum 1997; 24: 860-6.         [ Links ]

9. McCauliffe DP, Yin H, Wang LX, Lucas L. Autoimmune sera react with multiple epitopes on recombinant 52 and 60 Kda Ro (SSA) proteins. J Rheumatol 1994; 21: 1073-80.         [ Links ]

10. Meheus L, Van Venrooij WJ, Wiik A, Charles PJ, Tzioufas AG, Meyer O et al. Multicenter validation of recombinant, natural and synthetic antigens used in a single multiparameter assay for the detection of specific anti-nuclear autoantibodies in connective tissue disorders. Clin Exp Rheum 1999; 17: 205-14.         [ Links ]

11. Scofield RH, Farris AD, Horsfall AC, Harley J. Fine specificity of the autoimmune response to the Ro/SSA and La/SSB ribonucleoproteins. Arthritis Rheum 1999; 42: 199-209.         [ Links ]

12. Sánchez-Guerrero J, Lew RA, Fossel A, Schur P. Utility of anti-RNP, anti-Ro/SS-A, and anti-La/SS-B (extractable nuclear antigens) detected by enzyme linked immunosorbent assay for the diagnosis of systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum 1996; 39: 1055-61.         [ Links ]

13. Reichlin M, Scofield RH. SS-A (Ro) autoantibodies. In: Peter JB, Schoenfeld Y, eds.: Autoantibodies, Amsterdam: Elsevier 1996; 783-8.         [ Links ]

14. Keech CL, Mc Cluskey J, Gordon TP. SS-B (La) autoantibodies. In: Peter JB, Schoenfeld Y eds.: Autoantibodies, Amsterdam: Elsevier 1996; 783-8.         [ Links ]

15. Yamamoto AM, Amoura Z, Johannet C, Jerónimo AL, Campos H, Koutouzov S et al. Quantitative radioligand assays using de novo-synthesized recombinant autoantigens in connective tissue diseases. Arthritis Rheum 2000; 43: 689-98.         [ Links ]

16. Frank MB, Mc Cubbin VR, Heldermon C. Expression and DNA binding of the human 52-Kd Ro/SSA autoantigen. Biochem J 1995; 305: 359-62.         [ Links ]

17. Workshop on diagnostic criteria for Sjögren's syndrome. I. Questionnaires for dry eye and dry mouth. II. Manual of methods and procedures. Clin Exp Rheumatol 1989; 7: 211-9.         [ Links ]

18. Vitali C, Moutsopoulos HM, Bombardieri S, European Study Group on Diagnostic Criteria for Sjögren's syndrome. The European Community Study Group on diagnostic criteria for Sjögren's syndrome. Sensitivity and specificity of tests for ocular and oral involvement in Sjögren's syndrome. Ann Rheum Dis 1994; 53: 637-47.         [ Links ]

19. Ishikawa E. Development and clinical applications of sensitive enzyme immunoassays for macromolecular antigens-a rewiew. Clin Biochem 1987; 20: 375-85.         [ Links ]

20. Kelly CA, Foster H, Pal B, Gardiner P, Malcolm AJ, Charles P et al. Primary Sjögren's syndrome in North East of England. A longitudinal study. Br J Rheumatol 1991; 30: 437-42.         [ Links ]

21. Pease CT, Charles PJ, Shattles W, Markwick J, Maini RN. Serological and immunogenetic markers of extraglandular primary Sjögren's syndrome. Br J Rheumatol 1993; 32: 574-7.         [ Links ]

22. Davidson BKS, Kelly CA, Griffiths ID. Primary Sjögren's syndrome in North East of England: a long term follow-up study. Rheumatology 1999; 38: 245-53.         [ Links ]

23. Tengnér P, Haeise A-K, Haga H-J, Jonsson R, Wahren-Herlenius M. Detection of anti-Ro/SSA and anti-La/SSB autoantibody-producing cells in salivary glands from patients with Sjögren's syndrome. Arthritis Rheum 1998; 41: 2238-48.         [ Links ]

24. Elagib KEE, Tengnér P, Levi M, Jonsson R, Thompson KM, Natvig JB, Wahren-Herlenius M. Immunoglobulin variable genes and epitope recognition of human monoclonal anti- Ro 52-Kd in primary Sjögren's syndrome. Arthritis Rheum 1999; 42: 2471-81.         [ Links ]

25. Walter SD. Methods of reporting statistical results from medical research studies. Am J Epidem 1995; 141: 896-906.         [ Links ]

26. Kramer MS, Feinstein AR. Clinical biostatistics LIV. The biostatistics of concordance. Clin Pharmacol Ther 1981; 29: 111-23.         [ Links ]

27. O'Brian CA, Wolin SL. A possible role for the 60-KD Ro autoantigen in a discard pathway for defective 5S RNA precursors. Gene Develop 1994; 8: 2891-903.         [ Links ]

28. Huang S-C, Scofield RH, Kurien BT, Harley JB. Human anti-Ro autoantibodies bind multiple conformational epitopes of 60-kD Ro autoantigen. J Clin Immunol 1997; 17: 212-9.         [ Links ]

29. Wahren M, Rudén U, Andersson B, Ringertz NR, Pettersson Y. Identification of antigenic regions of the human Ro 60kDa protein using recombinant antigen and synthetic peptides. J Autoimmun 1992; 5: 319-32.         [ Links ]

30. James JA, Dickey WD, Fujisaku A, O'Brien CA, Deutscher SL, Keene JD et al. Antigenicity of a recombinant Ro (SS-A) fusion protein. Arthritis Rheum 1990; 33: 102-6.         [ Links ]

31. Boire G, Gendron M, Monast N, Bastin B, Ménard HA. Purification of antigenically intact Ro ribonucleoproteins; biochemical and immunological evidence that the 52-kD protein is not a Ro protein. Clin Exp Immunol 1995; 100: 489-98.         [ Links ]

32. Kelekar A, Saitta MR, Keene JD. Molecular composition of Ro small ribonucleoprotein complexes in human cells. Intracellular localization of the 60- and 52-KD proteins. J Clin Invest 1994; 92: 1637-44.         [ Links ]

33. Cheng ST, Nguyen TQ, Yang YS, Capra JD, Sontheimer RD. Calreticulin binds hY RNA and the 52-kDa polypeptide component of the Ro SS-A ribonucleoprotein autoantigen. J Immunol 1996; 156: 4484-91.         [ Links ]

34. Itoh Y, Reichlin M. Autoantibodies to the Ro/SSA antigen are conformation dependent. I: Anti-60 kD antibodies are mainly directed to the native protein; anti 52 kD antibodies are mainly directed to the denatured protein. Autoimmunity 1992; 14: 57-65.         [ Links ]

35. Pourmand N, Pettersson I. The Zn++ binding domain of the human Ro 52 Kda protein is a target for conformation-dependent autoantibodies. J Autoimmun 1998; 11: 11-7.         [ Links ]

36. Boire G, Craft J. Human Ro ribonucleoprotein particles: characterization of native structure and stable association with the La polypeptide. J Clin Invest 1990; 85: 1182-90.         [ Links ]

37. Yoo CL, Wolin SL. The yeast La protein is required for the 3' endonucleolytic cleavage that nature tRTNA precursors. Cell 1997; 89: 393-402.         [ Links ]

38. Williams DG, Stocks MR, Charles PJ, Maini RN. Antibodies to La, Jo-1, n RNP and Sm detected by multi-track immunoblotting using a novel filter holder: A comparative study with counterimmunoelectrophoresis and immunodiffusion using sera from patients with systemic lupus erythematosus and Sjögren's syndrome. J Immunol Methods 1986; 91: 65-73.         [ Links ]

39. Emlen W, O'Neill L. Clinical significance of antinuclear antibodies: comparison of detection with immunofluorescence and enzyme linked immunosorbent assays. Arthritis Rheum 1997; 40: 1612-8.         [ Links ]

40. Tan EM, Smolen JS, McDougal JS, Butcher BT, Conn D, Dawkins R et al. A critical evaluation of enzyme immunoassays for detection of antinuclear autoantibodies of defined specificities. Precision, sensitivity and specificity. Arthritis Rheum 1999; 42: 455-64.         [ Links ]

41. Fox RI, Stern M, Michelson P. Update in Sjögren's Syndrome. Curr Opin Rheum 2000; 391-8.         [ Links ]

42. Gunaidin I, Terhorst T, Eckstein A. Assessment of Keratoconjunctivitis sicca in patients with fibromyalgia: results of a prospective study. Rheumatol Int 1999; 19: 7-9.         [ Links ]

43. Buyon JP, Slade SG, Reveille JD, Hamel JC, Chan EKL. Autoantibody responses to the native 52-kDa SS-A/Ro protein in neonatal lupus syndromes, systemic lupus erythematosus, and Sjögren's syndrome. J Immunol 1994; 152: 3675-84.         [ Links ]

44. Miranda-Carús ME, Tseng CE, Rashbaum W, Ochs RL, Casiano CA, Didonato F et al. Accessibility of SS-A/Ro and SS-B/La antigens to maternal autoantibodies in apoptotic human fetal cardiac myocytes. J Immunol 1998; 161: 5061-9.         [ Links ]

45. Anaya JM, Talal N. Sjögren's syndrome comes of age. Sem Arthritis Rheum 1999; 28: 355-9.         [ Links ]

46. Pérez P, Goicovich E, Alliende C, Aguilera S, Leyton C, Molina C et al. Differential expression of gelatinases A/MMP-2, B/MMP-9 and stromelysin 1/MMP-3 in labial salivary glands of patients with primary Sjögren's syndrome: Exocrine parenchyme destruction mechanism. Arthritis Rheum 2000; 43: 2807-17.         [ Links ]

47. Tseng C-E, Chan EKL, Miranda E, Gross M, Di Donato F, Buyon JP. The 52-Kd protein as a target of intermolecular spreading of immune response to components of the SS-A/Ro-SS-B/La complex. Arthritis Rheum 1997; 40: 936-44.         [ Links ]

48. Bacman S, Sterin-Borda, Camusso JJ, Arana R, Hubscher O, Borda E. Circulating antibodies against rat parotid gland M3 muscarinic receptor in primary Sjögren's syndrome. Clin Exp Imm 1996; 104: 454-9.         [ Links ]

49. Witte T, Mathias T, Arnett FC, Peter HH, Hartung K, Saachse C et al. IgA and IgG autoantibodies against a-fodrin asa markers for Sjögren's syndrome. J Rheumatol 2000; 27: 2617-20.         [ Links ]

50. Buyon JP, Tseng CE, Di Donato F, Rashbaum W, Morris A, Chan EKL. Cardiac expression of 52 ß an alternative transcript of the congenital heart block-associated 52-KD SS-A/Ro autoantigen, is maximal during fetal development. Arthritis Rheum 1997; 40: 655-60.         [ Links ]

51. Gerli R, Muscat C, Giansanti M, Danieli MG, Sciuto M, Gabrielli A et al. Quantitative assessment of salivary gland inflammatory infiltration in primary Sjögren's syndrome: Its relationship to different demographic, clinical and serological features of the disorder. Br J Rheumatol 1997; 969-75.         [ Links ]

Agradecimientos

Agradecemos al Dr. Juan Fernández, de la Facultad de Ciencias de la Universidad de Chile por su revisión crítica del manuscrito.


Correspondencia a: Dr. Sergio Aguilera. Reumatólogo.Clínica Indisa, Av. Santa María 1810, Providencia, Santiago, Chile. Tel: (56-2) 362 5555, Fax: (56-2) 234 2953. E-mail: caylm@hotmail.com

Creative Commons License Todo o conteúdo deste periódico, exceto onde está identificado, está licenciado sob uma Licença Creative Commons