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Archivos de medicina veterinaria

versión impresa ISSN 0301-732X

Arch. med. vet. vol.47 no.1 Valdivia  2015

http://dx.doi.org/10.4067/S0301-732X2015000100019 

COMUNICACIÓN

 

Carcinoma mamario en un canino macho: caracterización clínica e inmunohistoquímica

Mammary carcinoma in a male dog: clinical and immunohistochemical characterisation

 

JI Ariasa, E Paredesb, CG Torresa*

a Departamento de Ciencias Clínicas, Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias, Universidad de Chile, Santiago, Chile.
b Instituto de Patología Animal, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Austral de Chile, Valdivia, Chile.
* crtorres@uchile.cl


SUMMARY

Mammary tumors in male dogs are rare, not exceeding 2% of all cases of mammary tumors in males and females. These have proved to be mostly of low-grade malignancy and positive for the presence of estradiol receptor α. In this case report, a male mammary cancer in a mixed breed dog is shown. This case report presents a case or mammary tumor which was clinically evaluated and surgically resolved, it was also under cytological, histological and immunohistochemical assessment, by studying proteins such as estradiol receptor α and β (ERα , REβ) epidermal growth factor receptor 2 (EGFR2) vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2), cyclooxygenase-2 (COX2) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA). Clinical examination showed that the patient had a well-defined mass, filled with liquid, adjacent to the prepuce and forming part of the right inguinal mammary gland. Cytology and histology showed neoplastic epithelial cells, consistent with a tubular carcinoma simple type, histological grade I. When performing immunedetection, high expression of REα, REβ and EGFR2 and absence of expression of COX2 and VEGFR2 were detected. These immunological results are consistent with the clinical and histological finds of the studied tumor.

Key words: mammary carcinoma, male dog, estradiol receptor.


RESUMEN

Las neoplasias mamarias en perros machos son poco comunes, no superando el 2% de la totalidad de casos de tumores mamarios en machos y hembras. Estos han mostrado ser en su mayoría de baja malignidad y positivos a la presencia del receptor de estradiol α. En este reporte se presenta un caso de tumor mamario en un perro mestizo macho, que fue evaluado clínicamente, resuelto quirúrgicamente y estudiado citológica, histológica e inmunohistoquimicamente mediante el estudio de proteínas como receptor de estradiol α y β (REα, REβ), receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico (EGFR2), receptor 2 del factor de crecimiento vascular endotelial (VEGFR2), ciclooxigenasa 2 (COX2) y antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA). Al examen clínico, el paciente presentó una masa bien definida, llena de líquido, adyacente al prepucio y formando parte de la glándula mamaria inguinal derecha. La citología y el estudio histológico mostraron células epiteliales neoplásicas concordantes con un carcinoma tubular simple de grado histológico I. Al realizar inmunodetección, se observó una alta expresión de REα, REβ y EGFR2 y ausencia de expresión de COX2 y VEGFR2, resultados que son concordantes con el patrón clínico-histológico de la neoplasia estudiada.

Palabras clave: carcinoma mamario, perro macho, receptor de estradiol.


 

INTRODUCCIÓN

Los tumores de glándula mamaria en caninos son comúnmente diagnosticados en la clínica diaria (Moe 2001, Richards y col 2001). Estos representan alrededor del 50% de los tumores que se producen en las perras (Zatloukal y col 2005), siendo esta incidencia tres veces superior a la reportada en mujeres (Caicedo y col 2012). La mayoría de los tumores de la glándula mamaria en perras son de origen epitelial, y aproximadamente el 50% son malignos (Sleeckx y col 2011). El cáncer de mama humano es poco frecuente de ser encontrado en el hombre, representando menos del 1% del total de casos diagnosticados (Crichlow y Galt 1990). Por lo general se detectan en hombres mayores y los factores de riesgo más probables para esta enfermedad incluyen aumento de la edad, lesiones testiculares, obesidad, ginecomastia, síndrome de Klinefelter y una historia familiar de cáncer de mamas (Bhagat y Kline 1990, Crichlow y Galt 1990, Demeter 1990). La mayoría de estos tumores son malignos, y aproximadamente el 65-80% expresan el receptor de estradiol tipo a (Bezwoda y col 1987). Lo anterior hace que estos tumores en el hombre sean asociados a alteraciones en el equilibrio de estrógenos y andrógenos, con un mayor riesgo en pacientes con testículos no descendidos, orquitis, daño testicular o en alteraciones que conllevan un estado de hiperestrogenismo (Giordano y col 2002).

En el caso de los perros machos se repite esta estadística, presentándose en forma poco frecuente. Es así como Mulligan (1975), al hacer una revisión de 120 casos de tumores mamarios en caninos, solo encontró dos casos en machos (1,66%). Unos años después Priester y McKay (1980) estudiaron 1.195 casos de neoplasias mamarias malignas confirmadas histológicamente, y solo encontraron 13 machos afectados (1,08%), mientras que de 562 neoplasias mamarias benignas, solo 10 ocurrieron en machos (1,7%) (Priester y McKay 1980). Saba y col (2007) analizaron tumores mamarios provenientes de ocho perros machos, los que mostraron una alta expresión del receptor de estrógeno a. Por otra parte, la expresión del receptor de progesterona, aunque estaba presente en todos los tumores, fue de menor intensidad.

El objetivo de esta comunicación es caracterizar clínica e inmunohistoquimicamente un caso de neoplasia mamaria en un perro macho.

MATERIAL Y MÉTODOS

CASO CLÍNICO

En el Hospital Clínico Veterinario de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Austral de Chile se presentó un perro macho entero, mestizo, de 10 años de edad, que presentaba una masa de 10 cm de diámetro llena de líquido, adyacente al prepucio y formando parte de la glándula mamaria inguinal derecha. Se realizó examen clínico general, hematología, bioquímica sanguínea y radiografías de tórax como métodos diagnósticos complementarios. El paciente fue estadificado clínico-patológicamente según lo descrito por Cassali y col (2011). Posteriormente, el paciente fue sometido a cirugía (mastectomía inguinal derecha) bajo anestesia general inhalatoria y técnica quirúrgica aséptica.

CITOLOGÍA, HISTOPATOLOGÍA E INMUNOHISTOQUÍMICA

Se obtuvieron muestras mediante punción con aguja fina y drenaje del tumor ya extraído quirúrgicamente para realizar un examen citológico del mismo. Esta muestra fue directamente extendida sobre portaobjetos y secada al aire para luego ser teñida con tinción Diff- Quick®.

Por otra parte, se obtuvieron muestras del tejido mamario extirpado, siendo fijadas en formalina tamponada al 10%, posteriormente fueron deshidratadas e incluidas en parafina mediante técnicas rutinarias. Los cortes de 4 μm así obtenidos, fueron teñidos con tinción H&E para su caracterización histológica. El tipo y graduación histológica se realizó de acuerdo con lo descrito por Goldschmidt y col (2011). Para caracterizar molecularmente la neoplasia en estudio se realizó análisis inmunohistoquímico del receptor de estradiol α y β (REα, REβ), receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico (EGFR2), receptor 2 del factor de crecimiento vascular endotelial (VEGFR2), ciclooxigenasa 2 (COX2) y antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA) (Torres y col 2009). Brevemente, después que los cortes histológicos fueron desparafinados en Neoclear (Merck) y rehidratados en etanol, se realizó recuperación antigénica sumergiendo los cortes en buffer citrato 0,01M, pH 6.0 y fueron hervidos durante 40 minutos en vaporera. Las muestras fueron sometidas a bloqueo de peroxidasa endógena en H2O2 al 10% durante 30 minutos para posteriormente mantenerse durante 15 minutos en una solución de albúmina sérica bovina (BSA) 2% en TBS. Se realizó incubación con anticuerpos primarios (cuadro 1) durante toda la noche a 4° C. Para la reacción inmunohistoquímica se utilizó el kit ImmPressTM Universal Antibody (Vector Laboratories) (anticuerpos secundarios anti-IgG de ratón / anti-IgG de conejo conjugados con un complejo polímero/peroxidasa). Para evidenciar la reacción se utilizó el sustrato 3,3'-Diaminibenzidina (DAB) y contratinción con Hematoxilina de Mayer. Se consideraron controles negativos donde se realizó incubación con solución de BSA 2% en vez del anticuerpo primario.

 

Cuadro 1. Anticuerpos primarios utilizados en el estudio inmunohistoquímico.

Primary antibodies used in the immunohistochemical study.

 

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Clínicamente, el tumor mamario se mostró bien delimitado, de base pedunculada, de aspecto fluctuante, indoloro y de crecimiento no invasivo (figura 1a), características que son propias de una neoplasia de baja malignidad (Sorenmo 2003). El examen clínico general y las pruebas complementarias no revelaron alteraciones que sugieran cambios paraneoplásicos (datos no mostrados), estadificándose la neoplasia en estadio clínico III. Luego de la mastectomía regional, el tumor fue diseccionado constatando la presencia de un líquido sero-sanguinolento con un volumen aproximado de 200 ml; esto demostró la naturaleza quística de la neoplasia (figura 1b). El tumor involucraba al pezón de la mama inguinal derecha (figura 1c), desarrollándose probablemente desde el ducto mamario hacia el parénquima glandular. Al drenar completamente la masa quística original se observó que el tamaño real del tumor era de 4 cm en su eje principal (figura 1d). Considerando lo anterior, la neoplasia se reestadificó en estadio clínico II (Cassali y col 2011).

 


Figura 1. Fotografías prequirúrgicas e intraoperatorias del tumor mamario. (a) se observa
el tamaño y ubicación de la masa tumoral (t); (b) se muestra el tumor quístico (q) ya
extraído con su contenido sero-sanguinolento; (c) muestra la superficie de la piel extirpada
y la ubicación del pezón de la mama inguinal (p); (d) muestra la morfología del tumor (t)
por debajo del pezón afectado.

Prequirurgical and intraoperatory mammary tumor photographs. (a) the size and location of
the tumoral mass (t) can be observed; (b) cystic tumor (q) already excised with its
serosanguinolent content; (c) the surface of the excised skin and the location of the
inguinal mammary nipple (p) is shown; (d) the morphology of the tumor (t) under de
affected nipple is shown.

 

En el diagnóstico de la neoplasia mamaria no se recomienda el aspirado con aguja fina para citología debido a que es un método de baja sensibilidad (Sorenmo 2003). No obstante ya que la masa original era quística, se consideró relevante hacer un análisis morfológico del sedimento celular del líquido intratumoral. La citología mostró presencia de abundantes células epiteliales de aspecto neoplásico dispuestas en grupos cohesivos. Estas células tenían alta relación núcleo-citoplasma, pleomorfismo y anisocitosis leve a moderada, presencia de nucléolos prominentes y citoplasma basofílico, todas características de malignidad (figura 2a). Debido a lo anterior y pese a lo descrito por la literatura pertinente, se sugiere que hacer citología de masas tumorales de aspecto quístico podría ayudar a orientar el diagnóstico definitivo.

 


Figura 2. Citología y sección histológica del tumor mamario. (a) Citología del líquido
intratumoral muestra abundantes acúmulos de células epiteliales de aspecto neoplásico.
Diff- Quick®, barra corresponde a 20
μm; (b) Corte histológico muestra la presencia de
tejido neoproliferativo de base epitelial con formación de abundantes túbulos, compatibles
con carcinoma tubular simple de grado histológico I. Hematoxilina & Eosina,
barra corresponde a 100
μm.

Mammary tumor cytology and histological section. (a) Intratumoral liquid cytology
showing abundant epithelial cells clusters of neoplastic aspect. Diff- Quick®, bar corresponds
to 20
μm; (b) Histological section shows the presence of epithelial based neoproliferative
tissue with abundant tubules, compatible with histological grade I carcinoma simple
tubular Type. Hematoxilina & Eosina, bar corresponds to 100
μm.

 

Histológicamente, las secciones de la neoplasia mamaria mostraron un tejido de neoformación bien delimitado, no encapsulado, compuesto por células epiteliales neoplásicas dispuestas en nidos y cordones con formación de abundantes túbulos, algunos de ellos con presencia de material eosinofílico en su lumen, rodeados por un estroma fibrovascular en moderada cantidad. Las células tumorales mostraron atipia nuclear leve a moderada y escasa actividad mitótica. El estudio histopatológico fue concordante con un carcinoma tubular simple de grado histológico I (figura 2b) según lo descrito por Goldschmidt y col (2011). Al respecto, Sorenmo (2003) y Cassali y col (2011) describen que los carcinomas tubulares de bajo grado histológico, pese a ser de naturaleza histológica maligna, tienen bajo potencial de reaparición local y metástasis, lo que se traduce en una alta probabilidad de tiempos de sobrevida prolongados posterior al manejo quirúrgico.

Para determinar el pronóstico se hizo un análisis inmunohistoquímico estudiando proteínas cuya presencia se asocian a buen (REα, REβ (Millanta y col 2005) y mal pronóstico (COX2 y VEGFR2) (Doré 2011, Camacho y col 2014). Se observó una alta presencia del REα (figura 3b) y REβ, expresión que se visualizó tanto a nivel nuclear como citoplasmático de las células neoplásicas. EGFR2 se inmunodetectó en el citoplasma de la mayoría de las células neoplásicas que formaban parte del tumor estudiado (figura 3c). No se observó expresión de COX2 (figura 3d) ni de VEGFR2 (no mostrado). Con el fin de establecer más específicamente la tasa proliferativa de esta neoplasia, se estudió proliferación celular mediante la inmunodetección de PCNA, biomarcador que se expresa en todas las fases del ciclo celular a excepción de G0 donde se expresa escasamente (Vinothini y col 2009). Así, la expresión de PCNA fue baja a moderada (17,5 + 4,1 %). Estos resultados inmunohistoquímicos son concordantes con una neoplasia de baja malignidad y corroboran las observaciones clínicas e histológicas ya descritas. La baja malignidad observada en este caso es congruente con lo descrito por Bearss y col (2012), quienes caracterizaron 27 casos de neoplasia mamaria en perros machos, cuyos patrones histológicos fueron benignos. Recientemente, Im y col (2014) describieron una nueva clasificación molecular para tumores mamarios en perros basado en una clasificación utilizada en las neoplasias mamarias humanas, la cual tiene valor pronóstico y orientaría de forma más específica el tratamiento. El tumor mamario aquí descrito se clasificaría molecularmente como Luminal B debido a su patrón de expresión positivo para REα y EGFR2, patrón que se presenta fundamentalmente en carcinomas de grado histológico bajo y moderado (Im y col 2014).

 


Figura 3. Imágenes inmunohistoquímicas representativas de la neoplasia mamaria.
La inmunotinción positiva (nuclear o citoplasmática) fue observada con un precipitado
marrón. (a) Control negativo; (b) RE
α; (c) EGFR2; (d) COX2. Método
polímero-peroxidasa-DAB, barra corresponde a 100
μm.

Immunohistochemical representative images of mammary tumor. The positive immunostaining
(nuclear or cytoplasmatic) was observed as brown precipitate. (a) Negative control,
(b)
ER
α, (c) EGFR2, (d) COX2. Method polymer-peroxidase-DAB, bar corresponds to 100 μm.

 

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Aceptado: 10.07.2014

 

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