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Parasitología al día

versão impressa ISSN 0716-0720

Parasitol. día v.23 n.3-4 Santiago jul. 1999

http://dx.doi.org/10.4067/S0716-07201999000300012 

NOTA PRACTICA

Utilidad de una encuesta para identificar donantes de
sangre de zonas no endémicas, potencialmente
infectados con Trypanosoma cruzi

MARCELA VASQUEZ*, SYLVIA VIDAL*, CLAUDIA ESPINOZA*, IVAN PALOMO*, MARISA TORRES**, CHRISTIAN ALVARADO**, MARINELA CANALES**, ANA MARIA SALINAS**, JAIME PEREIRA** y GUILLERMO JEREZ**

USE OF A QUESTIONNAIRE TO IDENTIFY BLOOD DONORS OF
NONENDEMIC AREA, POTENTIALY INFECT WITH Trypanosoma cruzi

Large numbers of immigrants from endemic areas for Chagas' disease resided in Maule Region and transmission can occur by blood transfusion.is important evaluated the usefulness of a questionnaire for identifying Trypanosoma cruzi infected blood donors in nonendemic area. In this work participate blood donors of 7 hospitals of the Region. During the 6-month period, 1.581 blood donors were asked and their samples were analysed for T. cruzi antibodies.The effectiveness of the questionnaire was evaluated by comparing donor's answers about their risk for Chagas' disease with the result of testing with an enzyme-linked immunosorbent assay. Positives samples were confirm by: indirect immunofluorescence, and polymerase chain reaction. Only one donor was positive to Chagas' disease. This donors reported no risk factors. Therefore blood donors seropositive for T. cruzi are presente in donors population of nonendemic area without the usual identifiable risk factors.
Key word: Trypanosoma cruzi, Chagas' disease.

* Departamento de Ciencias Clínicas, Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad de Talca.
**Departamento de Hematología-Oncología, Banco de Sangre y UDA Laboratorios Clínicos, Escuela de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile.
Trabajo financiado parcialmente por la Dirección de Investigación de la Universidad de Talca, proyecto Nº 97.442.09.

INTRODUCCION

La enfermedad de Chagas, es una zoonosis endémica en Latino América, causada por un parásito protozoo flagelado el Trypanosoma cruzi.1 El ser humano se infecta a través de las deyecciones del insecto vector Triatoma infestans conocido vulgarmente como vinchuca. La transmisión de hombre a hombre puede ocurrir a través de la transfusión sanguínea así como también por vía transplacentaria.2, 3 La enfermedad de Chagas asociada a transfusión es un problema de salud pública importante en muchos países donde la enfermedad es endémica y este modo de infección constituye el riesgo principal de adquirir la infección entre habitantes de zonas no endémicas, donde pueden llegar a ser donantes de sangre personas previamente infectadas. El parásito permanece viable más de 21 día en sangre conservada a 4°C, puede resistir la crioconservación y el descongelamiento de los hemocomponentes.1, 3, 4

En Chile, la enfermedad es endémica en área rurales y periurbanas de la zona norte del país (I a VI y región Metropolitana) solamente en estas regiones es obligatorio la detección de anticuerpos anti- T. cruzi a nivel de bancos de sangre, para descartar donantes de sangre posiblemente infectados por el parásito5.

Según fuentes del INE (Instituto Nacional de Estadística), la VII región es la quinta más poblada del país y en ella existe un 3% de personas foráneas de las cuales el 67,7% provienen de zonas endémicas para Chagas.6 La presencia de éstas, como se mencionó previamente, trae consigo riesgo de transmisión de enfermedad de Chagas asociada a transfusión.

En el Banco de Sangre del Hospital Regional de Talca de la VII Región, se realizó el año 1984 (datos no publicados) un estudio de seroprevalencia para Chagas, en el cual no se encontraron personas seropositivas. Posteriormente no se habían realizado nuevos estudios de seroprevalencia, los cuales resultan fundamentales para implementar estrategias de prevención de la transmisión transfusional de la enfermedad.

El propósito de este estudio fue evaluar la utilidad de un cuestionario antes de la donación de sangre para identificar dadores con riegos de estar infectados con T. cruzi y paralelamente también conocer la seroprevalencia a nivel de algunos bancos de sangre en la VII Región de Chile, donde se atiende un promedio de 3.900 donantes de sangre anualmente.

MATERIAL Y METODO

El estudio fue realizado en el Departamento de Ciencias Clínicas de la Universidad de Talca y el Departamento de Oncohematología, Banco de Sangre y UDA de Laboratorios Clínicos de la Universidad Católica de Chile. Se invitó a participar a 7 hospitales de la región, localizados en las ciudades de Curicó, Molina, Hualañé, San Javier, Constitución, Parral y Cauquenes. Desde noviembre de 1997 a mayo de 1998 se encuestó y tomó muestra a los donantes de sangre que fueron atendidos en los servicios respectivos, todos habían sido aceptados como donantes, de acuerdo a los criterios del Capítulo Chileno de Medicina Transfusional. Las muestras de sangre fueron tomadas sin anticoagulante, coaguladas a temperatura ambiente, luego de lo cual el suero fue separado y almacenado a -20°C hasta el análisis.

Cuestionario de predonación para T.cruzi Se consideró como factor de riesgo de infección por T. cruzi, los antecedentes siguientes: a) haber vivido más de 1 año en áreas endémicas y además b) conocer la enfermedad de Chagas o a las vinchucas, ó c) haber recibido transfusiones previas. En tanto se consideró sin riesgo a las personas que respondieron negativamente a estas preguntas (ver Encuesta 1).

 


Encuesta 1. Cuestionario de predonación de sangre para identificar dadores
de sangre con riesgo de estar infectados con Trypanosoma cruzi.

1.- Conoce Ud. la enfermedad de Chagas
2.- Ha recibido transfusiones de sangre
3.- Conoce Ud. a las vinchucas
4.- Ha vivido o viajado entre Arica y San Fernando (Si su respuesta es SI por
  favor contestes las siguientes preguntas, de lo contrario no es necesario)
5.- Cuanto tiempo estuvo en ese lugar: más de 1 año menos de 1 año
6.- Por favor marque con una x la Región en la que vivió más de 1 año
  I Región (Arica, Iquique) II Región (Antofagasta, Calama)
  III Región ( Copiapo, Caldera) IV Región (La Serena, Ovalle)
  V Región (Valparaíso, Los Andes) VI Región (Rancagua, San Fdo.)
  Metropolitana (Santiago, Melipilla)  
7.- En que tipo de casa vivió allí  
  Adobe Madera Ladrillo Piedra Techo de paja

Pruebas serológicas:

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima (ELISA): El suero de todos los donantes fue analizado para detectar anticuerpos anti-T. cruzi (ELISA de primera generación, Bioschile). Este reactivo usa como antígeno la cepa Tulahuen y MNZ2 de T. cruzi y detecta anticuerpos de tipo IgG. El ensayo se llevó a cabo siguiendo las indicaciones del fabricante. La presencia de anticuerpos anti-T. cruzi fue considerada negativa si el valor de absorbancia era menor que el valor de corte, de lo contrario se consideraron positivas. Las muestras dudosas o reactivas fueron analizadas nuevamente por ELISA. Las muestras doblemente positivas fueron analizadas por Inmunofluorescencia Indirecta.

Inmunofluorescencia Indirecta (IFI). Esta técnica fue realizada con diluciones de las muestras y de los controles positivos (diluida desde 1 en 10 a 1 en 320), los controles negativos fueron diluidos 1 en 10 y 1 en 20. Las muestras cuyos títulos fueron igual o superior a 1 en 20 fueron consideradas reactivas. A aquellos donantes cuyas muestras se confirmaron positivas por IFI, se les extrajo una nueva muestra, con el fin de confirmar los resultados obtenidos anteriormente y realizar PCR.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Esta técnica se realizó para confirmar el diagnóstico, para ella se tomaron 2,5 ml de sangre en un tubo estéril con EDTA. La extracción del DNA y la amplificación fue realizada siguiendo descripciones de otros autores.7-9 Se usaron 2 pares de partidores: TCZ1 y TCZ2 que amplifican un fragmento de DNA de 188 pares de bases (pb) correspondientes al DNA nuclear de T. cruzi y los partidores S35 y S36 que amplifican un segmento de 330 pb correspondientes al DNA de kinetoplasto del parásito. Para confirmar que los productos de amplificación correspondían a T. cruzi, se llevo a cabo un estudio de hibridación usando las secuencias oligonucleotídicas TCZP y S67 que corresponden a DNA nuclear y kinetoplasto, respectivamente (estandarización previa de la técnica de PCR).

Análisis de los productos de amplificación del PCR: Diez microlitros de productos de amplificación, en paralelo con un estándares de peso molecular, fueron analizados mediante electroforesis en gel de agarosa al 3%. Para visualizar el DNA, el gel fue sumergido en una solución de bromuro de etidio a una concentración de 0,5 µg/ml, lavado y observado a través de un transiluminador de radiación ultravioleta.

RESULTADOS

Durante el período de muestreo se recolectaron 1.581 muestras de sangre alogénicas (41% del promedio de donantes de sangre anuales, en las localidades estudiadas) y sus respectivas encuestas. El 62% de ellas (983) procedían de individuos que tenían entre 18 a 34 años de edad. De los donantes, 1.116 (74%) eran varones y 415 (26%) mujeres y de ellos, 137 (8,7%) individuos tenían riesgo geográfico, 150 (9,5%) conocían la enfermedad de Chagas o a las vinchucas y 29 (1,8%) tenían antecedentes de transfusiones. Sin embargo, de acuerdo al criterio definido en la Tabla 1, solamente 39 (2,5%) fueron considerados de riesgo.

 

Tabla 1. Distribución de antecedentes de riego de estar infectados con Trypanosoma cruzi en dadores de
sangre de la VII Región de Chile, según localidades.

Localidad Total Vivir más de
1 año en zona
endémica
Conocer Enfermedad
o las vinchucas
Historia de
transfusiones
Riesgo (%)

Curicó 952 87   112      18   22 (2,3%)
Hualañé     9 0 0 0 0 (0,0%)
Molina 176 28   18   8 11 (6,3%)
San Javier   90 7 6 0 1 (1,1%)
Constitución   33 0 6 0 0 (0,0%)
Parral   74 10   4 1 3 (4,1%)
Cauquenes
247
5 4 2 2 (0,8%)
           
Total
1.581   
137 (8,7%) 150 (9,5%) 29 (1,8%) 39 (2,5%)

El estudio serológico, permitió detectar solamente a un donante (0,06%) positivo por ELISA, que posteriormente fue analizado por IFI (título 1/320). Al analizar la nueva muestra mediante técnica de PCR se logró amplificar fragmentos de 188 y 330 pb que corresponden al DNA nuclear y kinetoplasto respectivamente.. Otras pruebas serológicas realizadas a su sangre (VDRL, HIV, HBV, HCV) fueron negativas.

El donante seropositivo era de sexo masculino, nacido en Curicó el año 1971, con residencia actual en esa ciudad, siendo ésta la segunda ocasión en que donaba sangre. De acuerdo a la Encuesta 1, este donante había sido clasificado sin riesgo pues había respondido negativamente a todas las preguntas. Los antecedentes familiares del donante señalaban que su madre había vivido hasta los 15 años en La Estrella, localidad cercana a Pichilemu en la VI Región. La mujer manifestó conocer a las vinchucas y al analizar muestras de su sangre se encontraron anticuerpos anti-T. cruzi. Además a un hermano del donante que había donado sangre en Santiago, también se le había encontró infección por T. cruzi, situación que no había sido conversada con el resto del grupo familiar.

DISCUSION

El presente estudio evaluó la utilidad de una encuesta de predonación en la identificación de individuos seropositivos para T. cruzi. Mediante ésta, se clasificó a 39 de los 1.581 donantes, con riesgo de estar infectados, sin embargo, las serología demostró que ninguno de ellos tenía un título detectables de anticuerpos específicos anti-T. cruzi. Por el contrario, un donante que había sido considerados sin riesgo de acuerdo a la encuesta, resulto seropositivo, confirmándose esta situación con el estudios de PCR.

Estos resultados demuestran que la selección de potenciales donantes de sangre mediante una encuesta de predonación, tiene una utilidad limitada para disminuir la transmisión transfusional de la enfermedad de Chagas, pues podría llevar al rechazo de donantes de sangre que, considerados de riesgo, no están infectados, o por el contrario, aceptar como donante a un individuo positivo a la infección, por haber sido considerado sin riesgo, como fue lo que ocurrió en este estudio.

Contrario a los hallazgos de este estudio, trabajos realizados en Estados Unidos concluyen que el uso de un cuestionario, similar al empleado aquí, es útil para identificar a la mayoría de las personas infectadas con T. cruzi, pudiendo reducir marcadamente el riesgo de transmisión de la enfermedad por transfusión de sangre. Además, el problema de rechazar a muchos donantes considerados de riego por la encuesta, se podría superar al someter las muestras de esos donantes a estudios de detección de anticuerpos anti-T. cruzi. Sin embargo, hay que considerar que en esos estudios no se analizaron los sueros de los individuos considerados sin riego.10, 11

En estudios más recientes realizados en una zona no endémica de Brasil, se analizaron más de 14.000 suero de donantes de sangre, demostrando que el uso de un cuestionario de predonación es solo de utilidad parcial como estrategia de prevenir la enfermedad de Chagas por transfusión sanguínea, puesto que detectaron un 0,23% de dadores de sangre con anticuerpos anti-T. cruzi pero que habían respondido negativamente a todas las preguntas de su cuestionario, el cual era similar al empleado en este estudio pero que además incluía preguntas sobre antecedentes de la madre o algún familiar con enfermedad de Chagas.12 .

Otro estudio de seroprevalencia realizado en los estados de Oklahoma y Texas en Estados Unidos, demostró una seroprevalencia para T. cruzi de 0,003% y también encontraron presencia de anticuerpos en donantes sin factores de riesgos identificables, puesto que habían nacido en el país y no tenían antecedentes de haber viajado a zonas endémicas.13

Todos estos antecedente y nuestros resultados nos permiten concluir que debería implementarse una estrategias a nivel de los bancos de sangre, que permitan la detección de anticuerpos anti-T. cruzi en todos los donantes del país, de tal manera de brindar a la población equidad para acceder a un terapia de transfusión de sangre lo más segura posible, en cualquier parte del territorio nacional.

RESUMEN

Un número importante de inmigrantes provenientes de áreas endémicas para enfermedad de Chagas viven en la VII Región. Dado que una de las formas de transmisión del Chagas es por transfusión sanguínea, es importante evaluar , en zonas no endémicas, la utilidad de una encuesta de predonación para identificar donantes de sangre infectados con Trypanosoma cruzi. En este trabajo participaron 7 hospitales de la Región, durante un período de 6 meses, 1.581 donantes de sangre fueron encuestados y sus sueros analizados para detectar la presencia de anticuerpos anti-T.cruzi. La efectividad del cuestionario empleado fue evaluada, correlacionando las respuestas a las diferentes preguntas sobre la enfermedad, con el resultado del ensayo inmunoabsorbente ligado a enzima. Las muestras positivas fueron confirmadas por: inmunofluorescencia indirecta y reacción en cadena de la polimerasa. Solamente un donante fue positivo para enfermedad de Chagas. Este dador no reportó factores de riesgo. Por lo que, donantes de sangre seropositivos y parasitémicos para T. cruzi, están presentes en la población de donantes de sangre de zonas no endémicas, sin tener los usuales factores de riesgo.

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