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Revista chilena de infectología

versión impresa ISSN 0716-1018

Rev. chil. infectol. v.25 n.2 Santiago abr. 2008

http://dx.doi.org/10.4067/S0716-10182008000200013 

Rev Chil Infect 2008; 25 (2): 137-138

Carta al Editor

Sr. Editor:

He leído con sumo interés el artículo "Utilidad de la reacción de polimerasa en cadena en tiempo real en el diagnóstico de infecciones por virus respiratorio sincicial en adultos", de R. Rabagliati y cols (Rev Chil Infect 2007; 24: 441-5), que marca un enorme progreso en las herramientas diagnósticas que usualmen-te empleamos para detectar virus respiratorios, en nuestro medio asistencial.

Quiero hacer las siguientes observaciones y solicitar aclaraciones a los autores, con la finalidad de enriquecer conceptualmente los hallazgos que ellos describen en su artículo original.

• El protocolo empleado estudió muestras negativas por IF pero no se efectuó comparación con estándar de oro alguno (cultivo) ni se comparó los hallazgos de la IF con la RPC en las muestras que fueron positivas por IF. Habría sido valioso hacer esta evaluación.
• No queda claro cómo se escogieron las muestras (133 en 2 meses) y si se excluyeron algunas, y si así fue, por qué causa?
• Llama la atención que sólo existieron resultados positivos para VRS B.
• No se descartaron coinfecciones con otros virus en las muestras estudiadas (también posibles de diagnosticar por RPC).
• No se menciona, y debiera mencionarse, si se usaron los controles negativos y positivos en cada reacción. Tampoco mencionan el umbral de detección de número de copias virales de su RPC.
• No se menciona el tiempo ni el voltaje al cual se corrieron los geles. Todo esto es importante ya que la información entregada en el artículo debe ser reproducible.
• No se hizo la RPC en las muestras con IF positiva, por lo que no es clara la afirmación del primer párrafo de la discusión.

En aspectos formales, me permito observar lo siguiente :

• Es mejor mencionar cuál fue la enzima utilizada en el kit (x ej: MLV) y no decir "la enzima del kit".
• El ARN, en general, no se obtiene, se "extrae". Así también, la "amplificación" no se "traspasa a un gel", sino que se corre un gel de agarosa con los productos de amplificación de la RPC.
• Hay un error en las unidades de volumen, ya que ninguna RPC se hace con mL (mililitros), sino con uL (microlitros).

Con lo realizado en este trabajo, no podría concluirse que las técnicas de biología molecular duplican el diagnóstico de la infección respiratoria por VRS; sí hay otros artículos de la literatura que lo han mencionado.

En general, creo que el tema planteado es excelente y muy importante para mejorar el diagnóstico, pero los autores podrían considerar los puntos anteriores con el fin de mejorar los datos entregados.

Juan P. Torres T.
Departamento de Pediatría Oriente
Hospital Luis Calvo Mackenna
Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

Sr. Editor:

En relación a nuestro reciente articulo "Utilidad de la reacción de polimerasa en cadena en tiempo real en el diagnóstico de infecciones por virus respiratorio sincicial en adultos", el Dr. J. P Torres plantea una serie de inquietudes que respondemos de modo de aclarar dudas y enriquecer los datos comunicados.

Respecto al primer punto vale la pena recalcar que el estudio contempló trabajar sólo con el universo en el cual desconocíamos el diagnóstico virológico específico luego de haber utilizado la técnica de rutina usada en nuestro hospital, IFD para VRS, esta técnica es descrita como la más sensible en referencia a otras técnicas rápidas. El cultivo carece de una buena sensibilidad por lo tanto no es aconsejable su uso como estándar de oro, (en nuestro laboratorio el aislamiento de VRS tiene un rendimiento no superior a 50%).

En relación al segundo punto, las muestras incluidas fueron escogidas de pacientes hospitalizados a quienes se les había solicitado el examen de IFD para virus respiratorios (que incluye VRS) ante la sospecha clínica de una infección viral respiratoria en las semanas señaladas, aquellas de circulación del VRS en la comunidad de Santiago, información obtenida por la Red de Vigilancia Metropolitana de virus respiratorios que lidera la Pontificia Universidad Católica de Chile (http://virus.med.puc.cl/virus_respiratorios/inicio.html).

Compartimos la observación de lo llamativo que puede resultar que sólo obtuvimos VRS B, y así lo señalamos en los resultados, técnicamente es correcto ya que el control positivo de ambos VRS (A y B) fue corrido en cada tipificación viral y en ambas situaciones funcionó correctamente.

En el diseño del estudio no consideramos la búsqueda de co-infecciones, pero evidentemente es un área interesante de investigar; las actuales herramientas diagnósticas de biología molecular facilitarán estos estudios y permitirán comprender de mejor forma la epidemiología de las infecciones virales en el adulto, y en base a eso diseñar intervenciones de prevención y tratamiento en la medida que estén disponibles.

Respecto a si se usaron controles negativos y positivos en cada reacción y otros aspectos técnicos, efectivamente se corrieron controles positivos y negativos en cada reacción, a la temperatura de melting determinada para distinguir la presencia de VRS en la muestra (TM 84 °C). A su vez los geles de agarosa al 2% migraron a 100 volt por 30 min. Con esto se logró la diferenciación entre los tipos VRS A (334 pb) y B (183 pb).

Finalmente, coincidiendo con la última frase del Dr. Torres, creemos importante destacar la importancia de este tipo de estudios de virus respiratorios en población adulta chilena y en particular insistir en la importancia de estudios dirigidos a optimizar nuestro en-frentamiento diagnóstico. Este último aspecto es el principal aporte de este estudio: llamar la atención al clínico sobre la disponibilidad de herramientas de biología molecular para el diagnóstico de esta infección viral en particular. La aplicación de esta técnica en muestras de pacientes con sospecha de infección viral en que se había descartado VRS con el método tradicional permitió duplicar el número de casos de infección por VRS diagnosticados. En nuestra práctica habitual la reciente incorporación de la técnica de TR-RPC en tiempo real para VRS ha demostrado su utilidad ya que nos ha permitido realizar un diagnóstico etiológico específico, tomar medidas de control de infecciones y ajustar terapias, en especial en pacientes adultos inmunocomprometidos.

Ricardo Rabagliati B.1 y Marcela Ferres G.2

1 Departamento de Medicina Interna Programa de Enfermedades Infecciosas del adulto. Pontificia Universidad Católica de Chile.
2 Departamento de Pediatría y Centro de Investigaciones Médicas Laboratorio de Infectología Virología Molecular. Pontificia Universidad Católica de Chile.

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