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Biological Research

Print version ISSN 0716-9760

Biol. Res. vol.33 n.3-4 Santiago  2000

http://dx.doi.org/10.4067/S0716-97602000000300009 

XLIII REUNION ANUAL DE LA SOCIEDAD DE BIOLOGIA DE CHILE

14 al 17 de Noviembre 2000

Pucón
Chile

Auspiciadores

FERMELO S.A.
IVENS S.A.
EQUILAB
REICHMANN
GENESYS CHILE LTDA.
MERCK QUIMICA CHILE LTDA.
PHARMA BRIL LTDA.
PRODUCTOS ROCHE LTDA
BIOS CHILE IGSA
ARQUIMED
TCL LTDA.

Patrocinantes

CENTRO DE ESTUDIOS CIENTIFICOS
CONICYT
FUNDACION CHILENA PARA BIOLOGIA CELULAR
FUNDACION CIENCIA PARA LA VIDA
METRO DE SANTIAGO
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS,
PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATOLICA DE CHILE
DID, UNIVERSIDAD DE CHILE
FACULTAD DE CIENCIAS, UNIVERSIDAD DE CHILE
UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE
UNIVERSIDAD AUSTRAL DE CHILE
UNIVERSIDAD NACIONAL ANDRES BELLO
FONDAP BIOMEDICINA
MIFAB

Conferencias

CONFERENCIA INAUGURAL

THE GOLDEN AGE OF BIOLOGY: THE BIOLOGICAL SYNTHESIS IN THE NEW MILLENIUM. Dr. Terry L. Yates. Director, Division of Environmental Biology, National Science Foundation, USA; Professor of Biology, Department of Biology, University of New Mexico, USA.

The past 100 years have seen the science of Biology grow and mature to take its place among the leading scientific disciplines as a unified science. The science has moved from a vertically oriented one focusing on particular groups of organisms and entering at a given level of organization in the taxon in question. As the century progressed the science of Biology became more reductionist driven primarily by advances made possible by the molecular revolution. An emphasis shifted to a search for more general phenomena within levels of organization without regard for variation among groups. This was an incredibly productive period in the biological sciences but was overshadowed by the golden age of physics taking place at the same time. The science of biology began to mature during the last two decades of the past century subdividing the study of life in many directions at once. Bought at the price of increasing specialization, this period has set the stage for biology to come of age.

This paper will explore the vast potential now being unleashed in this discipline by the birth or rebirth of holistic biology. Armed this time with the power of genomics, the vast array of ecological and evolutionary theory, and the technological infrastructure needed to address many of the grand challenge questions of the last and current century, biology stands ready to enter its golden age. The development of an understanding of the rate and nature of ecological change, biological diversity, biocomplexity, and the role of climate change are within our grasp. These questions will require synthetic analyses by teams of investigators working across disciplines and international borders if they are to be solved. The new age called by some the Anthropocene will be dominated by the science of biology, the study of life.

CARACTERIZACION DEL GEN QUE CODIFICA PARA LA PROTEÍNA FACTOR 5 DEL INICIO DE LA TRADUCCION EN EUCARIOTAS, eIF-5, EN Zea mays.(Characterization of the gene which codes for the protein factor 5 of the translation initiation in eukaryotes, eIF-5, in Zea mays). López Ribera, I. y Pere Puigdomènech. Departament de Genètica Molecular. Institut de Biologia Molecular de Barcelona. CID-CSIC. Jordi Girona, 18-26. 08034 Barcelona.

Dos clones aislados uno de de cDNA y otro genómico a partir de genotecas de realizadas en plántulas de maíz (Zea mays L.) de 8 días de desarrollo fueron secuenciados. Los 1975 pares de bases del cDNA codifican una proteína de 451 aminoácidos, cuyo peso molecular es de 49,04 kDa. La secuencia de amino ácidos inferida tiene similitud con proteínas eIF-5 de diferentes organismos. La región N-terminal está altamente conservada, y en ella se ha localizado la presencia de una región de dominio dedo de Zn. Siete kilo bases secuenciadas a partir del clon genómico revela la existencia de numerosos elementos repetitivos en las regiones intergénicas y de un largo intrón de 1300 pares de bases en la región 5' no codificante. Estudios de expresión realizados por análisis de hibridización Northern como por hibridación in situ, muestran que la acumulación de RNA mensajero de este gen está ligada a procesos de división celular con mayor expresión en regiones meristemáticas. Del conocimiento de la función de la proteína eIF-5, en la fase inicial de la síntesis de proteínas, se deduce su posible interacción con la subunidad ribosómica 40S. Los estudios de interacción in vitro, realizados entre la proteína eIF-5 y polímeros de DNA de cadena sencilla y de poliU, demostraron la dependencia del ion Zn en la unión de la proteína a los polímeros. Se propone que, el dominio dedo de Zn y las regiones conservadas del extremo N-terminal, tienen un papel importante en la interacción de la proteína con la subunidad ribosómica 40S.

PARTICIPACION DEL NEUROPEPTIDO Y, DE CANABINOIDES Y OTROS FACTORES HIPOTALAMICOS EN EL SINDROME DE OBESIDAD. Alejandro J. Daniels Department of Metabolic Diseases, Glaxo Wellcome Inc., Research Triangle Park, North Carolina, USA

La obesidad es una condición crónica caracterizada por una sobreabundancia de tejido adiposo y que normalmente se acompaña de una serie de riesgos asociados como hipertensión, enfermedades cardíacas, diabetes y alteraciones del metabolismo esteroidal. El principal factor ambiental asociado con la prevalencia de la obesidad es el estilo de vida sedentario, agravado por un aumentado nivel de ingesta calórica. Por otro lado, se estima que alrededor de un 50% de los fenotipos asociados con obesidad son de origen genético. Como la obesidad se caracteriza por un exceso de energía almacenada, para reducir la masa de tejido adiposo se requiere de un período de balance negativo de energía, el que se puede lograr ya sea reduciendo la ingesta o aumentando el consumo de energía.

Hoy en día es ampliamente reconocido que la expresión química del apetito es codificada en el hipotálamo. La desregulación progresiva de este complejo sistema de señales neuroquímicas a través de factores genéticos, hormonales y del medio ambiente, trae como cosecuencia los sindromes de Obesidad o Anorexia.

Esta nueva visión conceptual ha llevado a la identificación y caracterización de una multitud de Neurotransmisores/Neuromoduladores en el sistema nervioso central y periférico, que propagan o regulan señales orexigénicas (NPY, AGRP, Canabinoides endógenos MCH, Galanina, Opioides, Orexinas, etc) y anorexigénicas (a-MSH, 5-HT, DA, CRF, GLP-1, CCK y Leptina) en el hipotálamo. Más aún, este conocimiento ha permitido identificar las vías neuronales para estas señales y la intrincada interacción entre ellas.

El explosivo reciente avance en el conocimiento de los factores que median el Hambre, la Saciedad y la utilización y almacenamiento de energía ha permitido comenzar a entender, a nivel molecular, el complejo mecanismo del balance energético y permitirá el desarrollo de nuevas farmacoterapias para combatir la obesidad, un sindrome de proporciones epidémicas.

INTRANUCLEAR TRAFFICKING OF TRANSCRIPTION FACTORS: IMPLICATIONS FOR BIOLOGICAL CONTROL Gary S. Stein., Department of Cell Biology, University of Massachusetts Medical School, Worcester, MA.

The subnuclear organization of the nucleic acids and cognate regulatory factors suggests that there are functional interrelationships between nuclear structure and gene expression. Nuclear proteins that are localized in discrete domains within the nucleus include the leukemia-associated AML and PML factors, the SC-35 RNA processing factors, nucleolar proteins, and components of the DNA replication machinery. Mechanisms that control the spatial distribution of transcription factors within the three-dimensional context of the nucleus contribute to the sorting of regulatory information as well as the assembly and activity of sites that support gene expression. Molecular, cellular, genetic and biochemical approaches have identified distinct protein segments, termed intranuclear targeting signals, that are responsible for directing regulatory factors to specific subnuclear sites. Gene rearrangements that remove or alter intranuclear targeting signals are prevalent in leukemias, and result in altered localization of regulatory factors within the nucleus. Modifications in the intranuclear targeting of transcription factors may abrogate fidelity of gene expression in tumor cells.

CONFERENCIA MIFAB*

CELLULAR PROTEASES DRIVE THE IMMUNE RESPONSE. Paula Wolf Bryant1, Ana-Maria Lennon-Duménil2, and Hidde L. Ploegh2.1The Ohio State University, Department of Microbiology, Columbus, OH 43212 2Harvard Medical School, Department of Pathology, Boston, MA 02115

The hallmark of the vertebrate immune system is the specific recognition of antigen. The antigen specific receptors of T lymphocytes rely on major histocompatibility complex (MHC) class I and class II molecules to recognize and engage antigen. MHC molecules display antigen on the cell surface in the form of small peptides, generated intracellularly by fragmentation of the intact protein antigen. MHC-restricted antigen presentation in the periphery directs T cell recognition of infected cells, and in the thymus, drives selection of T cells capable of distinguishing self from non-self. MHC class II molecules are distinct from class I in that they acquire their peptide cargo in an endocytic compartment. Upon synthesis in the ER, the class II ab-dimer associates with another polypeptide, the invariant chain (Ii), via a region of Ii's lumenal domain, designated CLIP, with the peptide-binding groove of class II. Ii contains sorting signals in its cytoplasmic tail that target class II molecules to the endocytic pathway where they encounter peptides generated from protein antigens that have also accessed this route.

We have studied how class II molecules are loaded with peptides - a process completely dependent on the action of cellular proteases. As class II-Ii complexes travel the endocytic route, Ii is sequentially degraded by the combined action of cysteine- and aspartyl-proteases, until all that remains is the CLIP fragment of Ii in the peptide-binding groove. The cysteine protease Cathepsin S (Cat S) is the key enzyme required for conversion of Ii into CLIP in B cells and dendritic cells. Cat L is the protease required for Ii degradation in thymic epithelial cells. The CLIP fragment that remains associated with class II molecules is dislodged and replaced with antigenic peptides by interaction of ab-CLIP with a "class II-like" molecule, DM. Peptide loaded class II molecules are then released to the cell surface.

In mice lacking Cat S, Ii processing is halted at a stage referred to as Iip10, a fragment corresponding to the 100 residues of Ii extending from its very NH2 terminus to the COOH terminus of CLIP. Nonetheless, peptide loaded class II molecules eventually appear on the cell surface, with considerable delay. In contrast, cells from DM-deficient mice accumulate ab-CLIP complexes - ab-peptide complexes are never detected. By crossing the DM and Cat S deficient mice to create double deficient animals, we now show that the ab-peptide complexes expressed in the absence of Cat S are DM-dependent, and are generated via an ab-CLIP intermediate. Thus, in addition to Cat S, yet another protease(s) is present in B cells that can digest Ii into CLIP, albeit with less efficiency. Moreover, the actions of cellular proteases are required for class II molecules to interact with DM, and to provide a functional substrate for DM-mediated peptide loading.

The interplay between components of the class II antigen presentation pathway and normal cellular constituents such as proteases is not one sided, but instead mutually beneficial: we now show that an isoform of Ii actually protects Cat L from degradation by Cat S and Cat B in late endocytic compartments. Thus, lysosomal proteases help direct the movement of class II molecules through the endocytic pathway, which in turn helps shape the cells own active protease content.
* Conferencia patrocinada por el Instituto Milenio de Biología Fundamental y Aplicada (MIFAB).

CONFERENCIA H. NIEMEYER

USING GFP TO STUDY NERVE CELL DEVELOPMENT AND FUNCTION IN C. ELEGANS Martin Chalfie, Department of Biological Sciences, Columbia University, New York, NY, USA

Since its introduction as a biological marker in 1994, green fluorescent protein (GFP) has been used in a wide variety of cells and tissues. Examples from our studies of neuronal function and development in the nematode Caenorhabditis elegans demonstrate some of the uses of this molecule. Among these uses are the characterization of patterns of gene expression and protein localization using promoter and protein fusions with GFP, the characterization of mutant phenotypes and the isolation of new mutants based on alterations of GFP expression patterns, the isolation of cells using a fluorescence-activated cell sorter, and the electrophysiological recording of GFP-labeled cells in situ.

EL PROBLEMA DEL POBLAMIENTO AMERICANO Y LOS ESQUELETOS HUMANOS FINI-PLEISTOCENO EN EL CONTINENTE (The problem of the American settlement and the fini-pleistocene human skeletons in the continent) Francisco Mena. Museo Chileno de Arte Precolombino

El poblamiento inicial de América ha sido un tema debatido por siglos. Desde un punto de vista científico, el estudio de la colonización de un enorme y variado territorio por parte de un ser humano plenamente moderno (con facultades de planificación, lenguaje y tecnología compleja) promete aportar al desarrollo de una teoría biogeográfica de migraciones que contemple factores culturales. Desde el punto de vista del público en general, se trata de un problema misterioso y casi detectivesco referido en parte al territorio de Estados Unidos, con una numerosa población relativamente solvente, un activo sistema de comunicaciones y prensa, y falta de recursos arqueológicos monumentales, que son generalmente la base para la explotación turística y sensacionalista de la arqueología. En este campo de estudios convergen las más diversas disciplinas, contribuyendo tanto marcos teóricos y conceptules como datos empíricos (ej. paleoclimatología, paleontología de vertebrados, lingüística, arqueología). El aporte de la bioantropología, sin embargo, se ha visto limitado a análisis filéticos a partir de observaciones actuales, por la sencilla razón de que prácticamente no se conocen esqueletos finipleistocénicos en América. Aunque debe haber unos treinta esqueletos para los cuales se ha postulado una edad anterior al 8000 AP, la mayoría son severamente cuestionados y hay apenas una docena de ellos que han sido datados directamente. Entre ellos se encuentran los restos exhumados recientemente por nuestro equipo en la Cueva Baño Nuevo, XI Región, correspondientes a dos adultos enterrados bajo un túmulo de piedras y a tres neonatos en estado muy fragmentado. Tanto el análisis morfológico como los estudios moleculares en marcha sugieren que se trata de una población distinta de la representada por los indígenas que aun vivían en Patagonia hasta fines del siglo XIX.

SEQUENCING MICROBIAL AND EUCARIOTIC GENOMES BY THE ONSA CONSORTIUM. Paulo Arruda. Centro de Biologia Molecular e Engenharia Genética, Universidade Estadual de Campinas, 13083-970, Campinas, SP, Brasil (parruda@unicamp.)

The Organization for Nucleotide Sequencing and Analysis (ONSA) of the Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) is a network of laboratories established since 1997 to sequence and analyze genomes of socio/economic interest for the country. By now 65 sequencing laboratories, 4 bioinformatic laboratories and over 60 data mining groups are working trough the net to decode and analyze genomes. In March 2000 ONSA finished sequencing of Xyllela fastidiosa, the first plant pathogenic bacteria to be decoded. Currently ONSA has closed the 5.4 Mb genome of Xanthomonas citri the causal bacterium of citri cancer and sequenced 260,000 sugarcane ESTs and over 700,000 human cancer ESTs. Sequencing of genomes of another two bacteria, Xyllela fastidiosa that causes Pierce disease in grape vine and Leifsonia xyli a sugar cane phytobacteria, are in progress. In this presentation I will show the organization and operation of the ONSA consortium as well as relevant results obtained in the different projects.

EVOLUCION DE LOS CROMOSOMAS SEXUALES EN VERTEBRADOS: ESTUDIOS CITOGENETICOS Y MOLECULARES. (Evolution of sex chromosomes in vertebrates: cytogenetic and molecular studies.) P. Iturra . Programa de Genética Humana. ICBM. Facultad de Medicina Universidad de Chile.

Entre los diversos sistemas de determinación del sexo en vertebrados, la existencia de cromosomas sexuales es el sistema genético más conocido. Actualmente, se acepta que el establecimiento de un par de heterocromosomas en los vertebrados sería el resultado de la acumulación de genes determinantes del sexo heterogamético en uno de los componentes de un par de cromosomas homólogos, con reducción del entrecruzamiento meiótico entre éstos, iniciándose un aislamiento genético entre los cromosomas X-Y o Z-W. Esta reducción de la recombinación genética llevaría gradualmente a cambios estructurales de la arquitectura cromosómica así como a la menor actividad genética del cromosoma Y(W). La evolución de los cromosomas sexuales comprendería cambios o alteraciones moleculares en el DNA, como heterocromatinización, acumulación de secuencias repetidas, pseudogenes o elementos transponibles, que probablemente no estén involucrados directamente con la información genética relacionada con la determinación del sexo. A diferencia de lo observado en mamíferos y en la mayoría de las aves, en el resto de los vertebrados hay un gran número de especies en las cuales los cromosomas del par sexual (X/Y o Z/W) son indistinguibles o escasamente diferenciados mostrando, similitud morfológica, recombinación genética entre ellos e incluso viabilidad de individuos YY (WW). Constituyen las especies de anfibios, reptiles y peces modelos interesantes para la reconstrucción de los primeros pasos en la evolución de los cromosomas sexuales en vertebrados. Las evidencias que hemos obtenidos de estudios citogenéticos y moleculares comparados en estos taxa, se discutirán en relación con las hipótesis sobre los mecanismos involucrados en la diferenciación de los cromosomas sexuales en vertebrados.

AVANCES EN BIOLOGIA MARINA EXPERIMENTAL EN CHILE Y SU SIGNIFICADO PARA LA CONSERVACION Y EL MANEJO DE LOS RECURSOS Y AMBIENTES COSTEROS MUNDIALES. (Experimental Marine Biology progresses in Chile and their significance for marine conservation and the management of resources and coastal environments in the world). Juan Carlos Castilla Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas Pontificia Universidad Católica de Chile Casilla 114-D, Santiago, Chile

Los pasados 15-20 años muestran avances científicos de importancia en Biología Marina, particularmente en ecología experimental en zonas costeras. Se destacan aquellos en que se ha involucrado directamente al ser humano como actor ecológico. Gracias a experimentos de gran escala y duración de décadas, en que se han comparado sistemas costeros con y sin intervención humana, se lo ha reconocido como una de las especies claves en los funcionamientos de comunidades marinas. La Estación Costera de Investigaciones Marinas de Las Cruces (PUC), fundada en 1982, ha jugado un papel trascendente para lo anterior.

En ella se ha generado conocimiento básico como para entender el funcionamiento de dichas comunidades y además éste se ha institucionalizado en la ley, hacia aplicaciones prácticas de manejo de recursos, con notorios beneficios para los pescadores y el país. Los resultados obtenidos en esta reserva marina son reconocidos mundialmente. Del mismo modo que los procesos de institucionalización y la generación en Chile, a partir de ello, de herramientas de manejo sustentable de recursos costeros. Una de tales herramientas son las Areas de Explotación y Manejo, que en Chile han sido usadas en conjunto con legislación relacionada al otorgamiento de derechos exclusivos de usos de recursos costeros por comunidades de pescadores. Estas herramientas son reconocidas a nivel mundial como una de las vías posibles de salida a la sobre-explotación de recursos. A través de lo anterior en el país se están generando nuevos paradigmas ambientales. El más importante es aquel que reconoce que tanto la conservación como el manejo son partes de un gradiente de administración y evita la confrontación equivoca entre ambos conceptos, azuzada innecesariamente durante el siglo pasado.

HIGH RESOLUTION STRUCTURE OF SEVEN-TRANSMEMBRANE RECEPTORS.Javier Navarro, Eva Pebay-Peyrula and Ehud M. Landau. Membrane Protein Laboratory (MPL) at the Department of Physiology & Biophysics, University of Texas Medical Branch, Galveston, TX 77555.

About 30% of the genes encode membrane proteins, and approximately 10% of them encode G protein-coupled receptors, which exhibit a typical seven-transmembrane a-helices. Bacterial rhodopsins are the paradigm of G protein-coupled receptors. Unveiling the molecular mechanism of action of these proteins requires determining their molecular structure at atomic resolution. X-ray crystallography is the most widely used method to determine the molecular structure of proteins, although it depends critically on the availability of well-diffracting crystals. Whereas almost more than one structure of soluble proteins are solved at high resolution every day, less than 30 structures of membrane proteins are known. This is mainly due the difficulties of overexpressing membrane proteins in heterologous hosts. But most critically on growing well-diffracting crystals of membrane proteins, as their surface exhibit both hydrophobic and hydrophilic regions. Our work describes a novel concept for crystallization of membrane proteins from lipid cubic phases. Crystal formation is triggered by inducing a phase transition from the lipid cubic phase to a lamellar phase. Using this procedure we have crystallized several membrane proteins including bacterial rhodopsins and photosynthetic reaction centers, and have solved the X-ray structure of these proteins at high resolution. Furthermore, we have solved the X-ray structures of catalytic intermediates of the bacterial rhodopsins, which are essential to elucidate the molecular mechanism of action of signal and energy transduction mediated by seven-transmembrane proteins.

ALGAS ROJAS COALESCENTES (Coalescing Rhodophyta). Bernabé Santelices, Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile, Casilla 114-D, Santiago, Chile.

Con registros fósiles que datan de 1.200-1.300 millones de años de antigüedad, las algas rojas (Rhodophyta) son los primeros eucariotes conocidos. En la actualidad comprenden cercano a 5.000 especies que habitan ambientes intermareales y submareales en todas las costas del mundo. El estudio de su ecología y estilos de vida abre ventanas al pasado y permite comparar adaptaciones y organización con otros grupos de algas más recientes, que coexisten con las Rhodophyta.

Estudios poblacionales y comunitarios complementados con cultivos en laboratorio y en terreno, análisis (TEM y SEM) de distintos estados de desarrollo y aplicación de RAPDs a individuos y poblaciones sugieren en estas algas la existencia de un estilo único de crecimiento y diferenciación. Propágulos recién asentados, estadios tempranos de desarrollo e incluso plantas adultas de distinto origen genético pueden fusionarse o coalescer, estableciendo conexiones celulares secundarias entre los grupos coalescentes. Supervivencia, crecimiento y reproducción son respuestas fuertemente influidas por el número inicial de entes coalescentes, mientras que los patrones de diferenciación morfológica y reproducción sugieren que la coalescencia es seguida por integración fisiológica y translocación diferencial de fotosintetatos.

Este estilo de crecimiento y desarrollo está ampliamente representado entre especies de algas rojas ecológicamente dominantes en diversos hábitats. Ello lleva a analizar estos hallazgos en el contexto de fuentes de variabilidad biológica, procesos de selección de organismos quiméricos y de interacciones competitivas versus coalescencia en las comunidades marinas.
(Apoyado por proyectos FONDECYT 1960646 y 1990160).

Simposios

HANTA VIRUS ECOLOGY AND DISEASE IN CHILE

Coordinador:
P, Marquet

THE BIOCOMPLEXITY OF OUTBREAKS: A TROPHIC CASCADE HYPOTHESIS. Yates,T.L., Director, Division of Environmental Biology National Science Foundation, USA; Professor of Biology, Department of Biology, University of New Mexico, USA.

Hantaviruses are a group of negative-stranded RNA viruses, some of which are known to be highly pathogenic for humans. Disease caused by the viruses in this group was thought to be largely restricted to Europe and Asia, until 1993 when an outbreak of hantavirus pulmonary syndrome (HPS) caused by a previously unknown hantavirus, Sin Nombre virus (SNV), occurred in the Southwestern United States. The new virus was found to have the deer mouse, Peromyscus maniculatus, as its primary reservoir and to result in a fatal outcome in nearly 50% of recognized human infections. Since the discovery of SNV, over 20 hantaviruses have been described from the New World. The cause of the outbreak in 1993 has remained speculative, but a climate-driven model for SNV outbreaks, at least, in North America is suggested. The data suggest that increased late winter and spring precipitation in the Southwestern US caused by the El Nino Southern Oscillation (ENSO) is responsible for an increase in plant primary productivity which in turn results in increased rodent population densities. A direct correlation exists between increases in deer mouse population densities, increases in number of infected rodents and increased incidence of HPS. Furthermore, these data show that SNV and other New World hantaviruses have been present, essentially in their current form, in the Western Hemisphere for decades and probably have been co-evolving with their rodent hosts in this part of the world for 20 million years. An understanding of the relationship between climate change, ecology, and hantaviruses may enable development of improved predictive models for human infection. A trophic cascade triggered by climate fluctuation as a model for predicting HPS is proposed. The potential of these types of models for predicting outbreaks of infectious disease will be discussed.

ENFERMEDADES INFECCIOSAS EMERGENTES: EL PAPEL DE LOS MODELOS MATEMATICOS (Emergent infectious diseases: The role of mathematical models). Velasco-Hernández, J.X., Departamento de Matemáticas, Universidad Autónoma Metropolitana, México

La modelación matemática ha jugado un papel importante en el desarrollo de la epidemiología y la ecología. Su impacto fundamental ha sido en el aspecto teórico de estas disciplinas pero su potencial de aplicabilidad a situaciones de campo practicas no es pequeño. En esta platica presentaremos algunos de los modelos epidemiológicos básicos y sus aplicaciones o adaptaciones a la epidemiología de enfermedades emergentes.

ARENAVIRUS AND HANTAVIRUS ECOLOGY IN SOUTH AMERICA:  ROLE OF RODENT BIOLOGY AND BEHAVIOR IN TRANSMISSION OF INFECTION TO MAN. Karl M. Johnson, M.D.Depts. of Biology and Medicine, University Of New Mexico, Albuquerque, USA.

The ecology of zoonotic virus infections of humans is complex; variables including soil, and climate, the population dynamics and behavior patterns of virus hosts and vectors, as well as the perturbations of both macro- and micro-habitats occasioned by human activity, all play important roles in determining place, time and scale of occurrence of human disease.  Virus replication in definitive zoonotic hosts also is crucial in the context of providing virions, which are either made available to biological vectors or are released into the environment which is under constant human sampling.  The latter pattern of transmission characterizes both arenaviruses and hantaviruses and each of the pathogenic members of these families is usually specific for a single rodent host/vector.  Chronic infection of host is a critical biologic event, and the quantitative patterns of virus excretion, principally in urine, are of great importance in determining extent of transmission to man.

Examples of differential patterns of rodent biology and behavior as they relate to observed patterns of human transmission of hemorrhagic fever will be described.  The arenaviruses Junin and Machupo will be compared as will the hantaviruses Sin Nombre and Andes. A striking example of serendipitous biological control will be provided to demonstrate that biological invasions are not always detrimental to a given biome.

HANTAVIRUS CARDIOPULMONARY SYNDROME Mertz, G.J., Professor and Chief, Division of Infectious Diseases, Department of Internal Medicine, University of New Mexico, Albuquerque, New Mexico, USA; Principal Investigator NIH Project: Hantavirus Ecology and Disease In Chile.

Hantavirus cardiopulmonary syndrome (HCPS) was first recognized in the southwestern United States in 1993 during investigation of an outbreak of a previously unrecognized syndrome. Serum samples from patients with the syndrome showed cross- reaction in assays for known, pathogenic hantaviruses, and samples from P. maniculatus trapped in the outbreak area also showed hantavirus antibodies. Subsequently, the primary pathogen in the United States, a previously unrecognized hantavirus, Sin Nombre virus, was identified in both humans and P. maniculatus, and Sin Nombre virus was later isolated from P. maniculatus. HCPS is now recognized throughout most of South America, including Chile and Argentina where the primary pathogen is Andes virus.

The clinical syndromes and epidemiology are similar in persons with Sin Nombre virus and Andes virus, but hemorrhage is much more common in persons infected with Andes virus. Person-to-person transmission has not been documented in Sin Nombre virus. However, person-to-person transmission has been clearly documented in one large outbreak in Argentina. The clustering of 1/3 of cases in Chile among household contacts also strongly suggests that person-to-person transmission occurs in Chile.

Significant recent developments in the US include the observation that Sin Nombre virus neutralizing antibody levels at the time of hospital admission are significantly lower in persons with severe HCPS as compared to those with mild HCPS. Significant recent developments in Chile include the first isolation of a hantavirus from a human in the Americas.

FILOGEOGRAFIA DEL COLILARGO CHILENO (SIGMODONTINAE: Oligoryzomys) BASADA EN SECUENCIAS DEL mtDNA. (mtDNA phylogeography of the Chilean colilargo (Sigmodontinae: Oligoryzomys) Palma, R. E. y Rivera-Milla, E. Departamento de Ecología, P. Universidad Católica de Chile, Casilla 114-D, Santiago, Chile

Actualmente se reconocen 15 especies del género de roedores sigmodontinos Oligoryzomys, cuyo rango de distribución comprende desde México hasta la Patagonia. El hábitat de este taxón está restringido a zonas húmedas, se caracteriza por una gran vagilidad y taxonómicamente forma parte de una de las tres grandes tribus de roedores del Nuevo Mundo, Oryzomyine, próxima al stock ancestral del cual habrían radiado otros grupos de roedores sudamericanos. En Chile se reconocen dos espcies del género: O. longicaudatus entre la III y XI regiones, y O. magellanicus en Magallanes y Tierra del Fuego.

La especie O. longicaudatus se caracteriza por presentar una de las más altas prevalencias para el virus Hanta a lo largo de su rango geográfico en Chile, principalmente entre la IV y XI regiones. Como parte de un estudio multidisciplinario que pretende entender las relaciones ecológicas y epidemiológicas del virus Hanta, realizamos un estudio filogeográfico entre representantes de diversas poblaciones de O. longicaudatus, secuenciando el gen citocromo b.

Utilizando diversos algoritmos de reconstrucción filogenética (PAUP 4.0), no se detectó un patrón filogeográfico de los haplotipos analizados a lo largo del gradiente latitudinal. Estos resultados son coincidentes con anteriores aproximaciones a la biología evolutiva de esta especie que consideraron estudios morfológicos, cromosómicos y alozímicos, lo cual confirmaría la alta capacidad de dispersión de este taxón.
Financiado por Proyecto NIH-ICIDR 1 U19 AI45452-01 (USA).

BIOINFORMATICA

Coordinador:
M. Canales

PROTEIN EVOLUTION - HOW FAR BACK CAN WE SEE? William R. Pearson. Department of Biochemistry, University of Virginia, Charlottesville, USA.

Sequence similarity searching is the most effective method available for characterizing newly determined protein sequences. More than 80% of the gene assignments for bacterial, yeast, C. elegans, and Drosophila genomes are based on similarity searches. Similarity searching is popular because it is surprisingly effective. For the yeast genome, similarity searching found homologues to more than 75% of the yeast genes, and for the much more distantly related Methanococcus, homologues could be found for more than 50% of the genes.

However, finding homologues for 75% or 50% of the genes means that 25% to 50% of the genes are unidentified. Most "novel," "non-homologous" genes may share a common ancestor with sequences in the databases that has diverged so much that the homology cannot be detected. However, some unidentified genes may be genuinely novel - not present in other organisms. By comparing human proteins to the proteins in completely determined genomes (C. elegans, yeast, E. coli, M. jannaschii) we can estimate how far back in time we can look, and possibly discover "young" protein sequences. If many "young" proteins have emerged in the past 800 My, one might infer that discovering (or rediscovering) protein folds is easier than expected.

MOLECULAR MODELING OF THE COLLAGEN-LIKE TAIL OF SYNAPTIC ACETYLCHOLINESTERASE. Deprez, P. Centro de Biología Celular y Patología, Dpto. de Biología Celular y Molecular, P. Universidad Católica, Santiago, Chile.

The asymmetric form of acetylcholinesterase consists of one to three catalytic tetramers attached to ColQ, a collagen-like tail responsible for the anchorage of the enzyme to the synaptic basal lamina at the neuromuscular junction. In particular, the collagen-like domain of ColQ contains two heparin-binding domains which interact with heparan sulfate proteoglycans. Due to the features of collagen, it has been difficult to study its structure in natural occurring sequences. A three-dimensional model of the collagen-like domain of ColQ was constructed. The model presents an undulated shape consistent with negative staining micrographs of asymmetric acetylcholinesterase. This results from the presence of a substitution and an insertion in the Gly-Xaa-Yaa repeating pattern characteristic of the triple-helical structure, as well as from low imino-acids regions, in agreement with studies using synthetic and shorter collagen structures. Those flexible regions are likely to constitute sites for interaction with other molecules, as for the heparin-binding domains. The analysis of heparin interaction with those domains suggested a dependence upon triple-helical conformation, what was confirmed experimentally using different approaches. Thus, molecular modeling prove useful in the prediction of the characteristics of interaction between molecules, as well as a useful guide for experimental studies.

MOLECULAR MODELING OF PROTEINS AND LIGANDS: FROM BIOINFORMATICS TO BIOENGINEERING P.M.Bisch . Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho ­ UFRJ, Rio de Janeiro, Brazil

Increasing data obtained by genome projects has produce a large number of information which should be now translated into structure and function of biomolecules. The computer could be used not only to store and analyze the genome sequences but also to predict and simulate protein structures and also to engineering ligands as possible drugs and function modulators, opening a new view on bioengineering research. Recently, a software package (THOR) has been developed by our group in order to simulate molecular interactions between ligands and proteins. The main program includes both geometry optimization and molecular dynamics simulations, allowing for implicit or explicit representation of solvent (water) molecules. The explicit simulations, allow us to use temperature, volume and pressure control. We explore this molecular modeling methods to investigate interactions of inhibitors with the catalytic site of Cruzain and Cruzipain2, important cysteine protease in the vital cycle of T. cruzi, and of Falsipaine, a similar protease from the palsmodium falciparum of Malaria. Following the same lines, we are investigating the binding of specific polysaccharides to lectins, involved in recognition processes and adhesion of T. cruzi to host cells. A new project involves the investigation of the protease and potential inhibitors of the Brazilian mutants of the HIV.

CAENORHABDITIS ELEGANS

Coordinador:
N. Inestrosa

THE MOLECULAR BASIS OF TOUCH SENSITIVITY IN C. ELEGANS. Martin Chalfie, Department of Biological Sciences, Columbia University, New York, NY, USA

Gentle touch in the nematode Caenorhabditis elegans is detected by six mechanoreceptor neurons. Genetic screens for touch insensitive mutants have identified twelve genes that are needed for the function of these cells. Eleven genes have been cloned and their predicted sequences and gene interactions suggest a mechanical model for the sensing of touch by these cells. In this model a channel (containing the MEC-4 and MEC-10 degenerin proteins) is tethered both to the extracellular matrix (containing the MEC-5 collagen and the MEC-1 and MEC-9 EGF repeat/Kunitz domain proteins) and to intracellular microtubules (containing the MEC-12 alpha-tubulin and the MEC-12 beta-tubulin). Displacement of the two tethering points activates the channel. In addition to the degenerin proteins, two other membrane proteins are required. One of these, the stomatin-like protein MEC-2, appears to link the channel with the microtubule cytoskeleton. The other, MEC-6, which is similar to vertebrate paraoxonases, is not only needed for touch cell lysis produced by mec-4 and mec-10 gain-of-function mutations, but also for the cell phenotypes produced by similar mutations in degenerin genes expressed in other cells. Because these gain-of-function mutations presumably activate the resulting channels, MEC-6 is needed for channel function. We have expressed some of these proteins in Xenopus oocytes to characterize channel function. Only control currents are seen when MEC-4 and MEC-10 (even with the gain-of-function changes) are expressed. An amiloride-sensitive current is seen, however, when either MEC-2 or MEC-6 are coexpressed with these proteins. A synergistic effect is seen when both MEC-2 and MEC-6 are expressed. These electrophysiological results support the genetic and molecular model for mechanosensation, and are the first steps in reconstructing the mechanosensory complex in heterologous cells.

STRUCTURE (AND FUNCTIONS?) OF THE FOUR ACETYLCHOLINESTERASE GENES IN THE NEMATODE CAENORHABDITIS ELEGANS. Jean-Pierre Toutant1, Didier Combes1,2, Yann Fedon1 and Martine Arpagaus1,2. (1) INRA Montpellier and (2) INRA Antibes, France.

It was previously reported that three genes, ace-1, ace-2 and ace-3 encode three pharmacological classes of acetylcholinesterase (AChE) in the nematode Caenorhabditis elegans. ace-1 was first cloned and characterized, but sequences of three other ace genes ace-2, ace-3 and ace-4 were finally identified.

ace-1. The functional study of the 5' flanking region of ace-1 was performed through phenotype rescue of null mutants and GFP reporter constructs were used to analyze the developmental and tissue pattern of expression of ace-1. ace-1 promoter prominently drives GFP expression in muscle cells (body-wall muscles, pharynx muscle cells pm5, anal sphincter) and only only 6 neurons of the head ganglia.

ace-2, located on chromosome I, presents all characteristics of an AChE gene and is trans-spliced to SL1 and SL2. In the null mutant gp72 , a point mutation (G441E) adjacent to H440 of the catalytic triad was found. The promoter region of ace-2 was studied using injection of GFP reporter constructs in vivo. The pattern of expression is limited exclusively to nerve cells.

ace-3 and ace4. In both C. elegans and C. briggsae, those two sequences were located in very close proximity on chromosome II, with only 356 and 369 nt respectively between the stop of ace-4 and the ATG of ace-3. These two ace genes were transcribed in vivo and were trans-spliced to both SL1 and SL2. So far we have no evidence for an active protein encoded by ace-4.

CAENORHABDITIS ELEGANS: CONTRIBUTIONS OF A GENETIC MODEL ORGANISM TO OUR UNDERSTANDING OF THE FUNCTION AND INTERACTIONS OF HUMAN DISEASE GENES. David B. Sattelle. MRC Functional Genetics Unit, Department of Human Anatomy & Genetics, University of Oxford, South Parks Road, Oxford, OX1 3QX, UK.

The first animal genome to be completely sequenced (>19,000 predicted genes) was that of the nematode worm Caenorhabditis elegans.This animal model offers several experimental advantages. Its speed of growth, ease of maintenance in the laboratory, short life cycle (3.5 days at 20×C) and the production of large numbers of progeny (~ 300) by self-fertilisation have made it well suited to genetic analysis. There are only 959 cells in the adult hermaphrodite, 302 of which are neurons. The complete cell lineage of the animal is known, as is the synaptic wiring diagram. Another advantage is the availability of a detailed genetic map, containing approximately 2000 loci, complemented by a physical map of overlapping cosmids and yeast artificial chromosomes (YACs), all aligned to the genetic map.A growing number of researchers are exploring C. elegans with a view to enhancing our understanding of human disease genes. Sequences of positionally-cloned human disease genes have been compared with the C. elegans database of predicted genes(1). As a result, a number of orthologues of human disease genes are currently under investigation. Examples from spinal muscular atrophy(2), polycystic kidney disease, muscular dystrophy and Alzheimer's disease, will be used to show how data from Caenorhabditis elegans can yield new insights into the function and interactions of human disease genes.
(1) Culetto, E. and Sattelle, D.B. (2000) Human Mol. Genet. 9, 869-877.
(2) Miguel-Aliaga, I. et al. (1999) Human Mol. Genet. 8, 2133-2143.

GENETIC AND MOLECULAR ANALYSIS OF SPERMATOGENESIS IN CAENORHABDITIS ELEGANS. Minniti, Alicia N.1,2 and Ward, Samuel1. 1Department of Molecular and Cellular Biology, University of Arizona, USA, and 2Center for Cell Regulation and Pathology, Faculty of Biological Sciences, P. Catholic University of Chile.

The development of C. elegans sperm provides an excellent opportunity to study how cell morphology is specified genetically. We have used biochemical, genetic and more recently microarray technology approaches to identify genes implicated in sperm development. Mutations in spe-8, spe-12, spe-27 and spe-29 block the differentiation of round spermatids into highly asymmetric crawling spermatozoa resulting in sterile hermaphrodites. However, mutant males are fertile and mating induces the activation of the hermaphrodite's own mutant spermatids presumably due to contact with and activator present in the seminal fluid. Three of these genes (spe-12, spe-27 and spe-29) encode novel proteins and are expressed exclusively in the sperm producing germ line. SPE-29 and SPE-12 each contain a single predicted transmembrane domain and SPE-12 is localized to the spermatid plasma membrane. All 4 genes play an essential role in hermaphrodite spermatids. SPE-12 (and probably SPE-27 as well) seems to have a supplementary but non-essential role in the male and may function as a signal amplifier inducing spermatids to become spermatozoa. The 4 identified members of the activation pathway interact with spe-6, a previously identified early acting gene required for MSP (Major Sperm Protein) assembly in the spermatocytes. spe-6 encodes a member of the casein kinase type 1 family of serine/threonine protein kinases.We are in the process of identifying and characterizing more components of this signaling pathway in an attempt to understand how information is relayed and processed to produce morphological changes solely by rearrangement and modification of preexisting components.
Supported by FONDAP-Biomedicine 13980001 and NIH (GM-25243).

COBRE

Coordinador:
J. Correa

ECOTOXICOLOGIA Y HOMEOSTASIS DE COBRE EN PECES DULCEACUICOLAS: IMPORTANCIA DE INVESTIGACION BASICA EN REGULACION DE METALES EN AMBIENTES ACUATICOS (Ecotoxicology and homeostasis of copper in freshwater fish: relevance of fundamental research to the regulation of metals in aquatic environments). Wood, C.M. Department of Biology, Mc Master University, Hamilton, Ontario, CANADA L8S 4K1; woodcm@mcmail.cis.mcmaster.ca

Ambient Water Quality Criteria (AWQC) for metals such as Cu are "blanket" regulations based on acute lethality tests, which take into account only one aspect of water chemistry, hardness. However, lethality tests with vertebrates are now illegal in many jurisdictions, and there is strong evidence illustrating that factors such as pH, alkalinity, DOC, major cations and anions, can greatly alter acute toxicity. In this context, the Biotic Ligand Model (BLM) was developed and recently approved for site-specific acute regulation of Cu by the USEPA. However, the regulatory focus is now moving towards the much less known chronic toxicity. This uncertainty has led to the application of the Precautionary Principle, which has resulted in inappropriate and unworkable criteria. The first step in the generation of useful chronic AWQC is to understand the mechanisms of uptake, homeostasis, and excretion of metals such as Cu which are both essential for life and potentially toxic. Our work on freshwater fish demonstrated that intestinal tract and gills are normal routes of Cu uptake, that the two routes interact but exhibit different degrees of regulation, and that liver function and biliary excretion play a critical role in Cu homeostasis. The cellular and molecular mechanisms of Cu transport are under investigation. Basic mechanistic research is the most effective tool to reduce uncertainty, and thereby avoid inappropriate application of the Precautionary Principle, and may eventually lead to a modeling approach for chronic AWQC analogous to the BLM for acute criteria.

COBRE EN EL AMBIENTE ACUATICO: APROXIMACION MULTIDISCIPLINARIA PARA MONITOREAR Y PREDECIR SU IMPACTO SOBRE LA BIOTA (Copper in the aquatic environment: multidisciplinary approach to monitor and predict its impact on the biota). Stauber, J.L., Apte, S.C., Batley, G.E. & Correa, J.A. Centre for Advanced Analytical Chemistry, CSIRO Energy Technology, Sydney, Australia & Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile. Santiago.

Increased copper concentrations in the aquatic environment result from both natural and anthropogenic sources. The long residence time of copper and its ability to bind to biotic ligands stresses the importance to understand the potential bioavailability of the metal. An integrated approach including chemical analyses, ecotoxicity tests and ecological studies is currently used to assess copper impacts in aquatic systems.Copper bioavailability to aquatic organisms is dependent on the physicochemical form or speciation of the metal, which is affected by a range of water quality parameters. Both geochemical modeling and analytical chemical speciation techniques have been used to predict or measure copper speciation in natural waters. Direct chemical measurement techniques include anodic stripping voltammetry and ion selective electrodes. While these techniques may detect or predict the different forms of copper, they do not provide direct data on adverse biological effects. Bioassays, instead, use living organisms as indicators of copper bioavailability in aquatic systems. Interactions of copper at the organism surface, subsequent copper uptake and adverse effects on individuals may ultimately lead to detectable effects at the population or community level.A multidisciplinary approach using some of these techniques to assess copper bioavailability in mine-impacted coastal waters in Australia and Chile will be discussed.
Funding for the research in Chile provided by ICA through a CIMM-PUC grant to JAC.

Incorporaciones

INCORPORACIONES I

EFECTO DE LA HERBIVORIA EN LA SOBREVIVENCIA FOLIAR DE NOTHOFAGUS ALPINA Y NOTHOFAGUS OBLIQUA S. Claros & I. Serey. Depto. de Cs. Ecológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

Durante la estación de crecimiento 1995-1996, Nothofagus alpina y N. obliqua presentaron diferencias en sus patrones de sobrevivencia foliar y en el número de hojas dañadas por insectos herbivoros. N. obliqua mostró mayor herbivoría y una menor sobrevivencia de sus hojas que N. alpina. Estos resultados sugirieron que la herbivoría podría dar cuenta de las diferencias en la sobrevivencia foliar de estas especies. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la herbivoría en la sobrevivencia foliar a nivel intra e interespecífico.

El estudio se realizó en Altos del Bio-Bio. Se marcaron 20 árboles de cada especie, en los cuales se dispusieron dos tratamientos; a) ramas con insecticida y b) ramas sin insecticida. En cada rama se resgistró la posición, herbivoría y tiempo de vida de sus hojas. Se construyeron curvas de sobrevivencia de las hojas las que fueron comparadas entre tratamientos y entre especies.

Los resultados a nivel intraespecifico indican que sólo N. obliqua disminuye su sobrevivencia foliar y N. alpina estaría compensando con una mayor sobrevivencia de sus hojas dañadas. A nivel interespecífico la herbivoría no sería el mecanismo que da cuenta de sus diferencias en la sobrevivencia foliar entre estas especies. Esta característica aparentemente es más conservativa y sólo es modulada por la herbivoría.
Proyecto CEE, CI1-CT93-0042. Beca PG/026/97, Universidad de Chile.

DISTRIBUCION GEOGRAFICA DE LA RIQUEZA DE MAMIFEROS Y MARIPOSAS EN CHILE: COVARIACION TAXONOMICA E HISTORIA. (The Geographic Distribution Of Mammal And Species Richness In Chile: Taxonomic Covariation And History). Samaniego, H & Marquet, PA Departamento de Ecología Pontificia Universidad Católica de Chile. Alameda 340, Santiago Chile

We analyze the geographic distribution of mammals and butterflies in Chile using 484 half degree quadrants. For both taxa, there is a strong bell-shaped latitudinal gradient in species richness with a peak at mid latitude (33°-42° S). The spatial covariation in richness of butterflies and mammals, which is apparent in a high correlation among them (Rs=0.646), suggests that richness gradients in both taxa share the same causal processes linked to present environmental gradients in the abiotic environment or due to a shared history of diversification, isolation, and dispersal. To test for the effect of the abiotic environment we looked at the correlation between richness and The Normalized Difference Vegetation Index (NDVI), mean daily precipitation, mean daily temperature, number of vegetation types,

and mean elevation across quadrants using univariate and multivariate analyses. We found that NDVI is the variable that explain most of the variability in species richness at the country level (67% for butterflies and 56% for mammals). However, when the analysis is performed within the three larger biomes present in Chile (desert, Mediterranean and temperate), different variables are found to explain richness variability. We suggest that historical processes associated to desertification and glaciation may have produced the actual patterns in species richnessdistribution and that productivity is the main environmental driver that "shapes" the latitudinal variation in species richness at geographic scale for these two taxa, despite having divergent phylogenetic histories and physiological requirements.

INCORPORACIONES II

PROTEINAS QUINASAS REGULADAS EXTRACELULARMENTE (ERKs) EN LA HIPERTROFIA DEL CARDIOMIOCITO INDUCIDA POR IGF-1 (ERKs on IGF-1-induced cardiac hypertrophy) González-Jara F., Ocaranza P., Lavandero S. Depto Bioquímica y Biología Molecular. Facultad Ciencias Químicas y Farmacéuticas. Universidad de Chile.. (Patrocinio: S Lavandero)

Este trabajo evaluó la participación de las ERKs en la hipertrofia cardíaca inducida por el factor de crecimiento análogo a la insulina tipo 1 (IGF-1) en cultivos de cardiomiocitos de rata, considerando cambios del área celular, transcripción del gen de la actina esquelética (SKA), expresión de la cadena pesada de la b-miosina (b-MHC) y reorganización miofibrilar.

Los resultados mostraron que el IGF-1 aumentó el área celular (2,5 veces), la expresión de SKA-LUX (4,5 veces) y los niveles de b-MHC (2,0 veces) e indujo reorganización del aparato contráctil del cardiomiocito. IGF-1 incrementó la actividad de ERK (8,6 veces) después de 5 min. pero estimuló modestamente las actividades de JNK y p38-MAPK (2,0 y 2,1 veces, respectivamente). La expresión de genes dominantes negativos para Ras, MEK, ERK redujo el incremento del área celular y levemente el aumento de la transcripción de SKA-LUX dependiente de IGF-1. El inhibidor específico de MEK (PD98059) inhibió completamente la expresión de b-MHC y la reorganización de las fibras de actina polimerizada pero sólo parcialmente la transcripción de SKA-LUX por IGF-1. Se concluye que las ERKs no son un componente crítico en la activación de la expresión del gen SKA en respuesta a IGF-1 pero sí en los procesos de síntesis de proteínas y cambios morfológicos.
FONDECYT 1980908.

PARTICIPACION DE LAS PROTEINAS KINASAS ERK EN EL MECANISMO ANTIAPOPTOTICO DEL IGF-1 EN CARDIOMIOCITOS EN CULTIVO (Role of ERK protein kinases in the IGF-1 antiapoptotic mechanism on cultured cardiac myocytes). Morales MP, Gálvez A, Lavandero S. Bioquímica y Biología Molecular, Fac Cs Químicas y Farmacéuticas, Universidad de Chile.

Existe gran interés en dilucidar los mecanismos antiapoptóticos del factor de crecimiento análogo a insulina tipo-1 (IGF-1) en el cardiomiocito. En el presente trabajo se evaluó la acción apoptótica del sorbitol, doxorrubicina, angiotensina II o privación de suero en cultivos de cardiomiocitos de rata, a través de la viabilidad celular por exclusión del azul de tripan, fragmentación del DNA tanto en geles de agarosa como por TUNEL y degradación de PARP por western blot. Comparativamente respecto a los otros estímulos, el estrés osmótico por sorbitol indujo un proceso apoptótico intenso, observándose además una prevención significativa por IGF-1 (100 nM por 24 h), ya que en su presencia aumentó la viabilidad celular (de 10±3 a 34%±5), disminuyó la fragmentación del DNA (de 322±24 a 133%±16), redujo el número de células apoptóticas (de 94±8 a 41%±8) y aumentó la cantidad de PARP (de 52±12 a 122%±15). Al usar sorbitol+IGF-1+PD098059 (inhibidor de MEK), el efecto protector del IGF-1 no se manifestó pues la viabilidad celular se mantuvo disminuida (5%±2) y hubo aumento de la fragmentación del DNA (336%±22) y del número de células apoptóticas (94%±4). Se concluye que las proteínas kinasas activadas extracelularmente (ERKs) participan en la prevención de la apoptosis mediada por IGF-1.
Fondecyt 1980908

TRATAMIENTO CRONICO CON COBRE DE CELULAS HepG2. ALTERACIONES EN EL BALANCE DE TIOLES. (Chronic Treatment with Copper in HepG2 Cells. Alterations of Thiols Balance) Aracena, P. Jiménez, I. Speisky, H. ICBM, Facultad de Medicina; Unidad de Toxicología Nutricional, INTA, Universidad de Chile.

El cobre es un micronutriente esencial y, al mismo tiempo, un potencial elemento tóxico. Se piensa que la citotoxicidad inducida por cobre se debe a su capacidad para descomponer peróxidos via reacciones de tipo Fenton/Haber-Weiss. En seres humanos, el cobre se acumula en el hígado mediante mecanismos intracelulares especializados para evitar la toxicidad asociada a dicha acumulación; bajo ciertas condiciones, esta acumulación conlleva a una hepatotoxicidad fulminante. Se postula que una de dichas condiciones sería el estrés oxidativo; por lo tanto, el tratamiento con peróxidos extracelulares provocaría una mayor citotoxicidad sobre células expuestas crónicamente a cobre en comparación a células controles.

La exposición crónica a cobre-histidina 100 mM sobre la línea de hepatoblastoma humano HepG2 produjo un aumento masivo del cobre intracelular y una dramática disminución en el contenido de GSH (5-10% del observado en los controles). Además, las células expuestas a cobre presentaron una susceptibilidad aumentada a la citotoxicidad inducida por la adición extracelular de ter-butilhidroperóxido. Debido a que los cambios en el balance intracelular de tioles no se ve acompañado de un aumento del contenido basal de especies radicalarias del oxígeno, se postula que esta susceptibilidad diferencial al peróxido se debería a la disminución de GSH, la cual podría explicarse por la formación de aductos Cu-GSH.

EXPRESSION OF MELANOCORTIN 1 RECEPTOR (MC1R), A MELANOMA-ASSOCIATED ANTIGEN, IN OCULAR MELANOMA TISSUES AND CELL LINES. López, M.+,Serrano+, A.,Escobar+, A.,Chhajlani#, V.,Kiessling*, R. and Salazar-Onfray+, F. +Program Immunology, ICBM, Faculty of Medicine, University of Chile. *Cancer Center Karolinska (CCK).

MC1R is a receptor expressed on melanomas and melanocytes. Subsequent studies demonstrated the presence of MC1R mRNA also in other normal tissues. We have demonstrated that peptides derived from MC1R can elicit peptide-specific CTL, which can recognize MHC class I matched melanoma lines. As the use of immunotherapy against MC1R antigens will depend on distinct expression of this receptor on malignant versus normal tissues, it is crucial to further assess its distribution. Uveal melanoma is the most common primary intra-ocular tumor in adults. This variant reside in a unique immune enviroment which make important to investigate their antigen expression.

We tested melanomas and non melanomic tumors using a mAb specific for MC1R. MC1R was detected in 17 of 21 of the tested melanoma cell lines but not (0/12) in other tumor cell lines. Immunohistochemistry revealed an strong expression of MC1R in all tested primary (n=10), metastatic (n=9) and uveal (n=4) melanomas, but also could be detected in several other normal tissues. Two ocular melanoma cell lines and two lines of melanocytes also expressed MC1R. The levels of expression was higher on the malignant cells than on the normal melanocytes. It remains to be seen if the over-expression of MC1R in melanoma is sufficiently high to allow a "therapeutic window" to be exploited in the immunotherapy of cancer. Fondecyt 1000888

EVALUACION EN MODELO MURINO DE LA RESPUESTA INMUNE HUMORAL Y CELULAR EN FORMULACIONES LIPOSOMALES. (Evaluation of the cellular and humoral immune response using a liposome formulation, in mice.) M. Naranjo A.1, Luzardo M.C.2, Lanio M.E.3, Alonso M.E.2 1Programa de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. 2Dpto. Inmunología, 3Dpto. Biomembranas, Facultad de Biología, Universidad de La Habana

Recientemente ha sido desarrollada una vacuna terapéutica dirigida contra el Factor de Crecimiento Epidérmico (EGF)7 que utiliza el sistema EGF/receptor de EGF (R-EGF), la cual se encuentra en ensayo clínico fase I. La estrategia de esta vacuna es inducir una respuesta inmune humoral con el objetivo de reclutar EGF e impedir su unión al receptor y por ende la estimulación del crecimiento tumoral. El EGF estimula autocrinamente el crecimiento de células tumorales que expresan el R-EGF. Este último se encuentra sobre expresado en membranas de diferentes tumores. Una respuesta inmune celular podría desencadenarse a través de células específicas previamente activadas, si algún epitopo del EGF se presentara por moléculas de MHC I en las células tumorales. Estudios clínicos en curso demuestran que la vacuna logra inducir una respuesta humoral significativa en un porcentaje de los individuos inmunizados. Los pacientes respondedores han logrado detener la progresión del tumor, lo cual se correlaciona con el título de anticuerpos alcanzado. Este trabajo tiene como objetivo evaluar la eficacia de la formulación EGF-liposoma en su capacidad para generar una respuesta inmune. Esta formulación generó respuestas humorales y celulares en un alto porcentaje de animales inmunizados.

INCORPORACIONES III

INTERACCION DE LA ACETILCOLINESTERASA ASIMETRICA CON HEPARINA. (Interaction of asymmetric acetylcholinesterase with heparin). Deprez, P. and Inestrosa, N.C. Centro de Biología Celular y Patología, Dpto. de Biología Celular y Molecular, P. Universidad Católica, Santiago, Chile.

La acetilcolinesterasa asimétrica se encuentra anclada a la lámina basal y localizada específicamente a nivel de la unión neuromuscular, donde hidroliza el neutrotransmisor acetilcolina. Esta forma de la enzima está compuesta por uno a tres tetrámeros de subunidades catalíticas asociados a un tallo de tipo colagenoso, ColQ, el cual es responsable del anclaje y de la lozalización de la enzima, al interactuar con proteoglicanes de heparán sulfato a través de dos dominios de unión a heparina presentes en la región colagenosa de ColQ. La realización de un modelo teórico de esta región de ColQ permitió guiar el estudio experimental de la interacción de ColQ con heparina, el cual fue abordado mediante el uso de péptidos sintéticos capaces de adquirir una conformación de triple-hélice colagenosa en solución, y mediante el uso de mutagénesis sitio-dirigida en la enzima completa. Los resultados obtenidos confirman que los dominios de unión a heparina son los únicos responsables de la enzima con heparina. También sugieren que esta interacción es dependiente de la conformación colagenosa, y en este contexto estructural la afinidad es modulada por la estabilidad local. Más aún, ambos dominios presentaron distinta afinidad por heparina, lo que podría tener importancia funcional.

PAPEL DE LOS CANALES DE CALCIO N y L EN EL FENOTIPO DEL RATON WLDS. (Role of N and L-type calcium channels in Wlds mouse phenotype). Benavides,E. y Alvarez, J. Unidad de Neurobiología Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile Santiago, Chile. Proyecto Foncecyt 2990077

Al seccionar o atricionar los axones se produce entrada de calcio al axoplasma. la principal ruta de entrada de calcio es mediada por la activación de canales de calcio voltaje-dependientes. la cepa de ratón wlds presenta una degeneración walleriana retardada en respuesta a la transección del nervio ciático.

En el presente trabajo estudiamos si, en esta cepa, existe alguna alteración en la entrada de calcio al citoplasma y su relación con los canales de calcio tipo l y n.

Cultivos de neuronas de hipocampo de ratones Wlds y controles (C-57/BL), se incubaron con Fluo-3, un colorante calcio-sensible, evaluándose los cambios de fluorescencia con microscopía confocal. Las células se incubaron con un antagonista de canal L, nifedipino 5mM y con un agonista, BAY K8644 1mM. También se incubaron con GVIA-w-conotoxina 2 nM, un antagonista de los canales de calcio tipo N. Se indujo depolarización con KCl 30 mM. Al inducir la depolarización con KCl 30 mM, las células controles aumentaron 38% su fluorescencia, mientras que las células Wlds apenas aumentaron 7%.Con BAYK 8644, los controles aumentaron su fluorescencia 135%, mientras que las células Wlds aumentaron 21% sobre la basal. Con nifedipino se observó una reducción de la respuesta en un 30% en los controles, sin variación en la cepa Wlds.(p<0.05, ANOVA). La conotoxina disminuyó la respuesta en las células controles (50%), mientras que no se modificó en la cepa Wlds. La estimulación con 17-b estradiol aumentó la entrada de calcio tanto en las células Wlds como en los controles (82%), efecto que no se modifica con el pretratamiento con EGTA, ni con agonistas ni antagonistas de los canales de calcio tipo N y L.

Estos resultados indican que el fenotipo de la cepa Wlds estaría relacionado con una disminución de los canales de calcio voltaje-dependientes tipo L y N o una alteración en la modulación de la cascada de segundos mensajeros que produce su activación.

CAMBIOS EN EL COMPORTAMIENTO MOTOR TRAS LA INYECCION INTRAVENTRICULAR DE 6-HIDROXIDOPAMINA EN RATAS: UN MODELO ANIMAL DE LA ENFERMEDAD DE PARKINSON (Motor behavioral changes after intracerebroventricular injection of 6-hydroxydopamine in the rat: an animal model of parkinson's disease). Abdala, P.1; Rodríguez, M.1; Barroso-Chinea, P.2; Obeso, J.3 y González-Hernández, T.2 1.-Departamento de Fisiología, 2.- Departamento de Anatomía, Facultad de Mmedicina, Universidad de la Laguna. 3.-Departamento de Neurología y Neurocirugía, Facultad de Medicina, Universidad de Navarra, España.

En este estudio analizamos diferentes parámetros del comportamiento motor en ratas tras la inyección intraventricular de 6-hidroxidopamina (50-500 mg). Los animales lesionados mostraron un persistente síndrome motor compuesto por hipocinesia, temblor mandibular y catalepsia (signo asociado a la hipertonia). La intensidad de los signos motores fue dosis-dependiente y recuperados parcialmente tras la administración de agonistas dopaminérgicos, exposición a la estimulación sensorial y estrés, tres procedimientos que reducen las disfunciones motoras en la enfermedad de Parkinson (EP). El estudio anatómico demostró una degeneración neuronal simétrica y bilateral de las neuronas dopaminérgicas mesencéfalicas, topográficamente similar a las descritas en la EP, mayor en la sustancia negra y menor en las áreas retrorubral y tegmental ventral. Esta similitud entre el síndrome motor, la topográfica degeneración neuronal en las ratas lesionadas y las características neuropatológicas y clínicas de la EP, indican que este estudio experimental constituye un adecuado modelo animal de la EP que puede ser usado para el ensayo de nuevos fármacos para disfunciones motoras específicas.

ACCION DELETEREA DE COBRE IONICO SOBRE ENZIMAS MICROSOMICAS DE BIOTRANSFORMACION DE XENOBIOTICOS (Deleterious effects of ionic copper on xenobiotic biotranforming microsomal enzymes) Marín-Catalán, R., Speisky1,2, H. y Letelier, M.E.2 INTA1, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas2. Universidad de Chile.

En presencia de reductores endógenos, el cobre iónico cataliza la formación de especies radicalarias capaces de inducir la modificación oxidativa de biomoléculas y de promover la muerte celular. En el presente estudio se evaluó el efecto del sistema Cu2+/ascorbato sobre proteínas y lípidos presentes en membranas microsómicas. Se encontró que el cobre no sólo promueve la oxidación de dichos sustratos (formación de lipoperóxidos y residuos carbonilos), sino que además, puede unirse a ligandos de proteínas microsómicas. Ambos fenómenos (oxidación y unión) fueron tiempo- y concentración-dependientes respecto al cobre y a las proteínas de membrana.

Por otra parte, la exposición de microsomas a cobre modificó el espectro del citocromo P450, tanto en presencia como en ausencia de ascorbato. Bajo ambas condiciones, se inhibió la O-desmetilación de p-nitroanisol (Cit-P450) y la conjugación con glutatión de 1-cloro-2,4-dinitrobenceno (GSH-transferasa), sin verse alterada la conjugación de p-nitrofenol (UDP-glucuroniltransferasa). La inhibición de las actividades referidas ocurrió independientemente de la presencia de ascorbato.

Sobre la base de los resultados obtenidos se propone que la toxicidad atribuida a cobre, residiría no sólo en su capacidad para inducir la oxidación de sustratos biológicos, sino además, en su capacidad para unirse a proteínas de membrana, alterando con ello la actividad de enzimas claves en la biotransformación de xenobióticos.

INCORPORACIONES IV

LA ACLIMATIZACION AMBIENTAL MODULA LA EXPRESION DEL FACTOR DE TRANSCRIPCION Pit-1 EN EL PEZ Cyprinus carpio. (Enviromental acclimatization modulates the expression of the transcription factor Pit-1 in the fish Cyprinus carpio) Kausel, G., Figueroa, J., *Molina, A., *Martial, J., **Vera, M.I. y **Krauskopf, M. Instituto de Bioquímica, Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile, Valdivia, *Universidad de Liege, Bélgica, **Universidad Nacional Andrés Bello, Santiago; (gkausel@uach.cl)

La adaptación reversible del ectotermo eurioico Cyprinus carpio (carpa) a los cambios ambientales estacionales se manifiesta por reprogramación de la expresión génica a nivel transcripcional y traduccional. Previamente demostramos el drástico efecto de acclimatización estacional en la expresión de prolactina (PRL) en pituitaria y por ello se postuló que Pit-1, constituye un factor de transcripción indispensable para la expresión de PRL.

En carpa identificamos dos genes de Pit-1 (ANº AF132287-U92542) con una organización genómica distinta a mamíferos. La expresión del factor de transcripción Pit-1 se evaluó en hipófisis de carpas aclimatizadas a invierno y verano. El Análisis cuantitativo utilizando RT-PCR reveló claramente un mayor número de transcritos del mRNA de Pit-1 detectado en pituitarias de carpas aclimatizadas a la estación cálida. Paralelamente, con una sonda de la región transactivadora (amino terminal) de Pit-1 se detectó un aumento significativo de Pit-1-mRNA en hipófisis de carpas acclimatizadas a verano. Esto está correlacionado con el aumento de mRNA de PRL, en forma espacial (Rostral Pars Distalis) y temporal (verano). En paralelo, se inmunodetectó Pit-1 en la región de la RPD, PPD y PI. Por lo tanto, la modulación estacional de la expresión de Pit-1 en carpa, sugiere que este factor de transcripción está involucrado en la regulación de la respuesta compensatoria durante aclimatización.
Fondecyt 2950042, 1940845, ICGEB GE/GLO/90/004

ESTUDIO DE LAS ADAPTACIONES MOLECULARES DE PROTEINAS A TEMPERATURAS EXTREMAS. (Study of the protein molecular adaptations to extreme temperatures) * Alvarez, M. y # Martial, J.A. *Laboratorio de Biología Celular y Molecular, Universidad Nacional Andrés Bello, Av. República 217, Santiago, Chile, y MIFAB; #Laboratorio de Biología Molecular e Ingeniería Genética, Universidad de Liège, Liège, Bélgica. Patrocinio: Dra. María Inés Vera, UNAB, Santiago, Chile

Uno de los desafíos actuales mas importantes en biología, es la comprensión de los mecanismos moleculares implicados en la adaptación de microorganismos que viven en condiciones ambientales extremas. En este contexto, hemos investigado los mecanismos moleculares que regulan la adaptación de proteínas a temperaturas extremas. El modelo elegido fue la enzima glicolítica triosa fosfato isomerasa (TIM) proveniente de un microorganismo termófilo (T.maritima) adaptado a altas temperaturas y de uno psicrófilo (V.marinus) adaptado a bajas temperaturas. Los genes que codifican para esta proteína en ambos microorganismos fueron clonados y expresados. Las proteínas recombinantes fueron purificadas y caracterizadas. Experimentos de mutagénesis sitio dirigida, así como la determinación de las estructuras tridimensionales de estas proteínas permitieron el análisis de sus mecanismos de adaptación a temperaturas extremas.

Los resultados obtenidos muestran que estos mecanismos de adaptación no pueden generalizarse, más aún parecen estar regulados de manera muy sutil y en un contexto tridimensional.

CLONAMIENTO POSICIONAL DEL LOCUS GSL-ELONG EN Arabidopsis thaliana (Positional cloning of the locus GSL-ELONG in Arabidopsis thaliana) Campos de Quiroz, H. A. Semillas Pioneer Chile Ltda. Profesor Milton Gallardo

Los glucosinolatos son metabolitos secundarios sintetizados por especies crucíferas (repollo, bróccoli). Al ser los tejidos de estas especies dañados mecánicamente, los glucosinolatos se hidrolizan por la enzima mirosinasa y originan metabolitos de amplia actividad biológica como resistencia a patógenos e insectos y propiedades anticarcinogénicas en mamíferos. La clonación de los genes participantes en su síntesis no ha sido posible en especies crucíferas debido a su gran tamaño y complejidad genómica. El organismo modelo vegetal, Arabidopsis thaliana, sintetiza glucosinolatos y presenta numerosas herramientas genómicas como genotecas BAC y YAC, mapas moleculares detallados y un proyecto de secuenciación genómica en curso. Mediante RFLPs el locus GSL-ELONG, participante en la elongación de glucosinolatos, fue mapeado al cromosoma 5. Este locus cosegrega con un QTL que explica 57% de la varianza fenotípica del carácter cuantitativo "cantidad total de glucosinolatos". Un mapa físico basado en vectores BAC, YAC y cósmidos fue construido, y su integración con el mapa genético delimitó el locus a un intervalo de 50 kb. El análisis de secuencia genómica identificó dos genes candidatos, uno de los cuales es homólogo a la enzima iso propil malato sintetasa de E. coli y posee el dominio conservado DTTLRDHEQ observado en enzimas condensadoras de grupos keto ácidos. Los alelos del gen generan glucosinolatos de distinto largo de cadena y contrastante actividad biológica.

ESTUDIO DE DOS GENES INVOLUCRADOS EN LA EMBRIOGENESIS TEMPRANA DEL MAIZ (Zea mays L.) (Characterization of two genes involved in early maize embryogenesis) López, E. L., Stiefel, V., Puigdomènech, P. Departamento de Genética Molecular, CID, CSIC, Barcelona, España.

En plantas superiores, la embriogénesis comprende tres etapas principales: temprana, caracterizada por la definición de los patrones del cuerpo; media, dada por crecimiento del embrión y acumulación de material de reserva; y tardía, caracterizada por desecación, dormancia y preparación para germinación. Su estudio, desde una perspectiva molecular, requiere conocer genes marcadores de etapas del desarrollo o de funciones fisiológicas normales pero específicas a eventos de desarrollo o estructuras embrionarias.

Mediante este enfoque, se ha logrado identificar un número de genes específicos de embriogénesis. En este trabajo, dos de ellos han sido caracterizados molecularmente y establecido su patrón de expresión en el desarrollo temprano del embrión de maíz. El primero, que corresponde a un gen para el enzima málico, se expresa específicamente en las células de la epidermis del primordio radicular de embriones en etapa temprana de desarrollo, y codifica para una proteína de localización en organelo, con función no asociada a fotosíntesis y que, por similitud evolutiva, puede ser clasificada como un enzima tipo C3. El segundo gen, denominado TM20, aislado desde mutantes lachrima de maíz, codifica para un nuevo tipo de proteína integral de membrana. Su expresión se detecta a las pocas horas después de la polinización haciéndose, posteriormente, mayoritaria en regiones de activa proliferación celular. Se postula, para esta proteína, una función celular asociada al transporte de hormonas.

Comunicaciones
Orales

LIMNOLOGIA

PROCESAMIENTO DE DETRITUS RIPARIANO POR MACROINVERTEBRADOS BENTONICOS EN UN ESTERO BOSCOSO DE CHILE CENTRAL (Riparian leaf litter processing by benthic acroinvertebrates in a woodland stream of central Chile) Valdovinos, C., Parra, O. Centro EULA, U. De Concepción, Casilla 160-C, Concepción, Chile. cvaldovi@udec.cl. Patrocinio: O. Parra.

La entrada de detritus foliar procedente de áreas riparianas, ha sido reconocido como un componente importante en la energética de ecosistemas fluviales y como fuente de alimento de macroinvertebrados acuáticos. En áreas riparianas de esteros boscosos de Chile central, los componentes nativos caducifolios están siendo artificialmente reemplazados a gran escala por coníferas exóticas, sugiriendo que este proceso tiene un importante impacto sobre las características energéticas de las comunidades fluviales. El objetivo de este estudio fue analizar el efecto de camadas de hojas de una especie nativa dominante (Nothofagus pumilio) y una especie exótica (Pinus radiata), en el procesamiento de detritus realizado por macroinvertebrados bentónicos, en una cuenca experimental de Chile central. Los resultados muestran que las tasas de procesamiento de los paquetes de hojas de la especie nativa son superiores a la exótica, sugiriendo que la sustitución de la flora nativa caducifolia por coníferas exóticas tiene un importante impacto sobre los componentes energéticos de los ecosistemas fluviales de Chile central (los coeficientes de pérdida [k] fueron .0072 para N. pumilio y .0027 para P. radiata). La abundancia y biomasa de fragmentadores por gramo de paquete de hojas explican las diferencias en las tasas de procesamiento de hojas, especialmente dos plecópteros Gripopterygidae, Limnoperla jaffueli y Antarctoperla michaelseni.
Financiamiento: FONDECYT (1000526)

EL IMPACTO DE LAS PLANTACIONES FORESTALES SOBRE EL RECURSO HIDRICO EN LA ZONA DE LOS ARENALES DE LA VIII REGION, CHILE. (The effect of plantation forest on water resources at the Arenales area, VIII Region, Chile) Huber, A. y Trecaman R. Instituto de Geociencias, Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile.

Por los signos de aridez que presenta la zona de los arenales de la VIII Región, se presume que la forestación de las mismas debe tener un mayor impacto sobre el recurso agua que en otros tipos de suelo. Para corroborar esta hipótesis se determinó la precipitación, la pérdida de agua por intercepción, la variación del contenido de agua del suelo y la cantidad de agua involucrada en la evapotranspiración y percolación de una plantación de Pinus radiata, ubicada en un suelo arenoso (Yumbel). Los resultados se compararon con los de una plantación con características semejantes ubicada en un suelo arcilloso (Collipulli). La precipitación anual fue de 1.261mm y 1.318mm para las dos localidades, respectivamente. De esta cantidad un 54,6% y 45,1% fueron utilizadas en la evapotranspiración y percolación por la plantación en los arenales y un 64,0% y 32,7% en el suelo arcilloso. La mayor percolación en los arenales se debió a que estos suelos poseen una menor capacidad de retención de agua. Las primeras precipitaciones de otoño saturaron rápidamente el suelo. Esta situación aumentó la cantidad de agua involucrada en la percolación y anticipó su inicio en comparación a la del suelo arcilloso.
Proyecto FONDECYT 1980991.

RELACIONES DE LAS CARACTERISTICAS FISICAS DEL HABITAT INFLUENCIADAS POR UN GRADIENTE DE CAUDALES, CON LA ESTRUCTURA DE COMUNIDADES PERIFITICAS EN UN RIO. (Relation of the physical characteristics of the habitat influenced by a gradient of flows, with the struture of periphytical comunities in the river). Muñoz, E & Parra, O. Centro Eula, Universidad de Concepción

Se estudió la influencia de un gradiente de caudales provocado por una central de paso, sobre la disponibilidad de hábitats en la parte superior del río Laja, la que se relacionó con la estructura de comunidades perifíticas. Se reconocieron tres biotopos que fueron diferenciados por la velocidad de la corriente y la profundidad. Se seleccionaron 6 transectos en un segmento de 18 km, con un control antes de la barrera de la central. Se determinaron 31 especies, encontrándose la mayor abundancia, riqueza específica y biomasa en el biotopo 1, de baja velocidad de la corriente (0-0,20 m/s) y baja profundidad (0,1-0,25 m). Las especies predominantes en el biotopo 1 fueron Fragilaria sp., Navicula sp.y Nitzschia sp.; para el biotopo 2 Cymbella affinis, Gomphoneis minuta, Cymbella minuta y Rhoicosphenia abbreviata y para el biotopo 3 Oscillatoria sp., Cocconeis placentula y Synedra sp. En cuanto al efecto a distancia del gradiente de caudales se obtuvo que las abundancias y la riqueza no presentaron diferencias significativas, no así la biomasa (Cl a) que fue significantemente diferente entre el control y las áreas de impacto directo y Quilleco.
Se agradece el apoyo del Centro Eula-Chile.

EDUCACION AMBIENTAL, BASURA Y ARTESANIA, UNA ALTERNATIVA PARA EL RECICLAJE (Environmental education, trash and workmanship, an alternative for recycle). Villarouco, F.M.O.1; Pimentel, M.C.B.,Dr2 1 - Docente del Universidad Federal de Pernambuco - Brasil, Doctoranda del Curso de Ciencias Ambientales - EULA/Chile E-mail: fvillarouco@hotmail.com, fvillaro@udec.cl 2 - Docente del Universidad Federal de Pernambuco - Brasil

Este trabajo describe una experiencia desarrollada en la Isla de Itamaracá-Pernambuco/Brasil situada en la Región Metropolitana de Recife, a 40 km de Recife, capital de Pernambuco, en el período de mayo hasta deciembre de 1999. Fueron realizados talleres de Educación ambiental y artesanía que consistían en la producción de artefactos artesanales a partir de basura no degradable que queda depositada en la playa, con esto se planteó la reducción de la degradacción ambiental del área costera a través de la creacción de una actividad productiva para las personas de baja renta. Como resultado se obtuvo la reducción de la basura en el área de orilla del mar, ocupación del horario no escolar de los niños, evitando que estos se queden en las calles, con la creacción adicional de un grupo de monitores en Educación Ambiental.
Se agradece al Centro EULA-Chile, Universidad de Concepción.

EFECTO DE LA CENTRAL HIDROELECTRICA RUCUE SOBRE EL DESARROLLO DE LA COMUNIDAD PERIFITICA. (effects of rucue hydroelectric on the development of periphytic community) González, J., Parra, O. Universidad de Concepción, Centro EULA- Chile Dr. Oscar Parra.

El río Laja, es un sistema que ha sido objeto de múltiples usos. (e.g. energía eléctrica, regadío, recreación entre otros). Para evaluar los efectos generados por una central hidroeléctrica de paso sobre la comunidad perifitica, se realizó un estudio de colonización en dos áreas del río de similares características: una zona control, antes de la barrera de la central y otra zona de impacto directo, después de la barrera. En las cuales se caracterizó tres biotopos: bolones enfangados, bolones someros, bolones profundos y se determinó el comportamiento temporal de la comunidad perifitica en 24 días de experimentación, en la época estival (enero 2000). Para lo que se colocó 20 bolones (rocas lavadas del mismo río) por biotopo, se retiró 3 bolones cada 5 días, raspando 1 cm2 por bolón para biomasa (método indirecto Cl a) y 2 seudoréplicas de 1 cm2 por bolón, para análisis taxonómico utilizando microscopia fotónica.

Los resultados de biomasa (Cl a) indican que no existen diferencias significativas (p < 0,38) para las dos áreas estudiadas, otros parámetros de la comunidad perifítica como diversidad, están en proceso de análisis.

ESTUDIOS DE COLONIZACION DE MACROINVERTEBRADOS BENTONICOS EN SUSTRATOS ARTIFICIALES: ESTERO NONGUEN, VIIII REGION, CHILE. (Colonization study of benthic macroinvertebrates on artificial substrates). 1Figueroa, R. 1Araya, E. 2Moyano, H. 2Ruíz, V y 1O. Parra. 1Centro EULA-Chile, Universidad de Concepción, 2Depto. De Zoología, Universidad de Concepción, Casilla 160-C, Concepción, Email: rfigueroa@udec.cl

Se estudió la colonización de la comunidad macrozoobentónica en substratos artificiales en las estacionales de otoño-invierno y primavera-verano, en un sistema fluvial de baja intervención antrópica: el Estero Nonguén. La selección de 5 estaciones localizadas secuencialmente desde el nacimiento del hasta 5 km. aguas abajo, permitió desarrollar las siguientes hipótesis: 1) substratos de bolones disponibles en zonas de potamón serán colonizados por taxa típicas de ritrón, 2) el tiempo que alcanza el equilibrio la comunidad, depende de la distancia respecto una fuente de origen (ritrón). Los resultados mostraron que en todas las estaciones y periodos de muestreo a) la comunidad bentónica respondió a la disponibilidad de substratos, b) las taxa que colonizaron los substratos en los fondos arenosos fueron típicas de ritrón (Ephemeroptera, Plecoptera, Trichoptera, Megaloptera, Coleoptera, mayoría de Diptera), c) presentaron el mismo patrón de colonización temporal con respecto al número de individuos, riqueza específica (sin diferencias significativas p> 0,05) e índices de diversidad (Shannon, Simpsom, Equidad, Riqueza acumulativa), d) las curvas de colonización, mostraron una tendencia estabilizar su número y su riqueza específica en el tiempo, aproximadamente a las dos semanas de exposición.
Se agradece a la Dirección Investigación (DIUC N°99.113.50-1) y al Centro EULA-Chile, de la Universidad Concepción.

NEUROBIOLOGIA

DESARROLLO NEONATAL DEL REFLEJO MONOSINAPTICO EN MEDULA ESPINAL AISLADA DE RATAS MUTANTES taiep. (Neonatal development of the monosynaptic reflex on isolated spinal cord of mutant taiep rats).Fuenzalida, M.1, Garrido,I.1, Bonansco,C.1,2, y Roncagliolo,M.1 Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias, Universidad de Valparaíso1 y Facultad de Ciencias, Universidad de Playa Ancha2, Valparaíso, Chile.

Para evaluar la transmisión sináptica durante etapas tempranas del desarrollo (P3-P12), del mutante mielínico taiep, se estudiaron las respuestas reflejas monosinápticas (RMS) y polisinápticas (RPS) en médulas aisladas registradas mediante electrodos de succión. Se determinó: curvas de intensidad-respuesta, latencias de RMS, sensibilidad a antagonistas glutamatérgicos (CNQX y APV), depresión por frecuencia y caída de RMS en condiciones de bajo Ca2+/ alto Mg2+. Las curvas de intensidad-respuesta demuestran una menor excitabilidad en taiep respecto a control. RMS disminuyó significativamente su latencia con la edad en preparaciones control, mientras que en taiep no se observaron cambios. En ambos grupos RMS presenta una mayor sensibilidad a CNQX que el componente RPS, pero las respuestas en taiep tienden a ser más resistentes a AMPA. Las curvas de depresión por frecuencia de RMS no mostraron diferencias entre mutantes y controles, alcanzando a 0.5 Hz un 53.1±14.9% y 54.9±22.9% de la amplitud máxima, respectivamente. La amplitud de RMS en condiciones de bajo Ca2+/alto Mg2+ en ratas control, decae un 50% a edades P<7, mientras que a P>7 decae un 75%. La aparición de estas diferencias, que coinciden con el inicio del proceso de mielinización y maduración de las sinápsis centrales, podrían reflejar alteraciones tempranas en la organización y dinámica sináptica en el mutante taiep. Proyecto Fondecyt 1991004, Conicyt-Chile.

EFECTO COMPARATIVO DE DESIPRAMINA SOBRE LA TRASMISION NOCICEPTIVA ESPINAL EN RATAS MONOARTRITICAS Y NORMALES. (Comparative effect of desipramine on spinal cord nociceptive transmission in monoarthritic and normal rats). Mondaca, M., Hernández, A. Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile.

Los antidepresivos tricíclicos, en particular los de espectro noradrenérgico, han demostrado alta eficacia analgésica en cuadros clínicos de dolor crónico especialmente de tipo neuropático. En el presente estudio se evaluó la efectividad de desipramina, un antidepresivo de espectro noradrenérgico, para inhibir la trasmisión nociceptiva espìnal en ratas monoartríticas y controles. La monoartritis experimental se indujo mediante inyección de coadyuvante de Freund completo en la articulación tibio-tarsiana de la rata. Seis semanas después, las ratas fueron anestesiadas con uretano 1.0 g/kg i.p y el efecto inhibidor de desipramina en la trasmisión nociceptiva espinal (1.25, 2.5, 5.0, 10.0 y 20.0 mg/kg i.p.) fue evaluado utilizando el reflejo C. Los resultados mostraron que desipramina inhibe en forma dosis-dependiente la trasmisión nociceptiva espinal, siendo su efecto significativamente mayor en las ratas monoartríticas en comparación con el grupo control. Estos resultados sugieren que los cambios adaptativos de los sistemas monoaminérgicos espinales que suceden en condiciones de dolor crónico favorecen la acción antinociceptiva de los antidepresivos de espectro noradrenérgico.
Proyecto DICYT 1999-2000.

PROPIEDADES ELECTRICAS DE LAS NEURONAS DISOCIADAS DEL GANGLIO PETROSO DE GATO. (Electrical properties of neurons dissociated from the cat petrosal ganglion). 2Varas, R., 2Iturriaga, R., 1Alcayaga, J. Laboratorios de Neurobiología, 1Facultad de Ciencias, Universidad de Chile y 2Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica.

Las neuronas del ganglio petroso (GP) inervan sensorialmente estructuras de la lengua, faringe, seno y cuerpo carotídeo. Existen dos poblaciones de neuronas en el GP, por la forma de su potencial de acción (PA), pero poco se sabe de las corrientes iónicas subyacentes.

Se disociaron GPs de gatos y se mantuvieron en cultivo por hasta 16 días. Se registraron las respuestas de las neuronas, en voltaje y corriente, con la técnica de "patch-clamp" en modalidad célula completa. La mayoría de las neuronas (29/42) presentaron PAs con inflexión en la fase de repolarización (tipo H). Estas neuronas presentaron corriente de entrada con componentes rápido y lento. Al reemplazar el Na+ extracelular (Na+e) por Cs+, el componente rápido desaparece, sin afectar el componente lento. La corriente de salida de estas células se inactiva parcialmente durante el pulso, y desaparece al reemplazar K+ por Cs+ en la pipeta. Las neuronas restantes (19/42) generaron PAs sin inflexión en la fase de repolarización (tipo F), con corriente de entrada de cinética rápida, que desaparecen al reemplazar el Na+e, y corrientes de salida sostenidas.

Nuestros resultados indican que las neuronas tipo H y F del GP son poblaciones que expresan corrientes en forma diferencial.
Financiamiento: FONDECYT 1990030; 1980965

EFECTOS DE ACTIVACIÓN DE RECEPTORES METABOTROPICOS GLUTAMATERGICOS (mGluR) SOBRE EL RECEPTOR DE GLICINA EN NEURONAS ESPINALES DE RATON. (Effects of Metabotropic Glutamatergic Receptor activation (mGluR) on Glycine Receptors in Mouse Spinal Neurons). Castillo, R., Roa, J.P., Aguayo, L.G. Laboratorio de Neurofisiología, Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción.

En este trabajo se investigó la relación funcional entre receptores glicinérgicos (R-gli) y glutamatérgicos metabotrópicos (mGluR) asociados a la activación de proteína kinasa C (PKC). Para esto utilizamos registros electrofisiológicos e inmunofluorescencia en neuronas espinales de 10-14 DIV. Las corrientes glicinérgicas espontáneas (mIPSC) y la activada por aplicación exógena de glicina (Igli) fueron estudiadas.

La Igli no fue alterada por ACPD (50 mM); sin embargo, este agonista modificó reversiblemente los mIPSC. Por ejemplo, el ACPD disminuyó la amplitud y frecuencia de los mIPSC y este efecto fue inhibido por MCPG (100 µM). La acción de ACPD ó DHPG 50 µM (agonista mGluR1) fue dependiente de la activación de proteínas G y PKC ya que fue inhibido después de incubar las células con toxina pertusis (500 ng/ml) ó calfostina C (100 nM). En línea con estos resultados funcionales, la aplicación de ACPD ó PMA 1 µM produjo translocación de PKC a la periferia de la neurona. Esta translocación fue antagonizada por RO-320432 1 µM y MCPG, inhibidores selectivos de PKC y mGluR, respectívamente.

Concluimos que la inhibición selectiva de mIPSC por mGluR involucra una regulación dependiente de proteínas G y PKC sobre R-gli, modificando así la eficacia sináptica inhibitoria. Financiado por Proyecto Fondecyt 1980106.

POZOS DE VESÍCULAS SIÁPTICAS Y VELOCIDADES DE MOVILIZACIÓN EN LA SINAPSIS NEUROMUSCULAR DE SHIBIRE UN MUTANTE TERMOSENSIBLE DE DROSOPHILA. (Pools of synaptic vesicles and their rates of mobilization.) *Maureira, C., +Kidokoro, Y. y Labarca, P. Centro de Estudios Científicos, Arturo Prat 514, Valdivia. *Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. + Gunma University School of Medicine, Japan.

La transmisión sináptica depende críticamente de la dinámica y disponibilidad de vesículas secretoras. La actividad sináptica de corta duración moviliza una poza de vesículas listas para ser liberadas (RRP); la actividad sináptica sostenida moviliza además una poza de vesículas de reserva (RP). La relación entre movilización de pozas de vesículas sinápticas y actividad eléctrica en el nervio; su modulación por mensajeros secundarios; así como el rol de estas pozas en fenómenos de plasticidad sináptica no han sido resueltos. A temperaturas no permisivas Shibire, un mutante de la Drosophila, cesa de reciclar las vesículas exocitadas; consecuentemente, la actividad eléctrica prolongada vacía de vesículas los terminales sinápticos. Utilizando shibire y combinando técnicas de electrofisiología y de imágenes de botones sinápticos establecimos en la sinapsis neuromuscular de la larva: el número total de vesículas sinápticas; las contribuciones relativas de los pozos de vesículas; y sus velocidades de movilización como función de la frecuencia de estimulación. Además, nuestros observaciones indican la presencia de una pequeña poza, de liberación muy rápida, que correspondería a vesículas "docked" and "primed" a los sitios de liberación.
Financiado por FONDECYT, HHMI y Cátedra Presidencial en Ciencias. CECS es un Instituto Científico Milenio.

RIBOSOMAS EN AXONES DE RATON. (Ribosomes in axons of mice) Court, F. y Alvarez, J. U. Neurobiología Molecular. Fac. Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica. Santiago.

El axoplasma contiene rRNA, mRNA, tRNA, elementos de una maquinaria para la síntesis de proteínas. Sin embargo, esta noción es negada porque en el axón no se han observado ribosomas. Estudiamos la presencia de ribosomas con técnicas morfológicas en axones intactos y aislados del ratón Wld (estos degeneran 3-4 semanas post lesión).

Los axones de nervio ciatico presentaban partículas de 19x23 nm, escasas en axones intactos tanto en la cepa silvestre como en Wld, pero abundantes en axones Wld aislados por 6 o más días. Las partículas estaban libres, en grupos, unidas a retículo endoplásmico, mitocondrias, membrana plasmática, o asociadas a citoesqueleto (microtubulos, neurofilamentos, microfilamentos). Las partículas se unían al citoesqueleto por un pedicelo de hasta 21 nm. Las partículas fueron marcadas con RNasa-oro coloidal aplicada en cortes. Las partículas también decoraban las láminas adaxonales de la mielina, que es parte de la célula de Schwann. En nervios aislados e inyectados con [3H]uridina para marcar RNA de neosínesis, la marca autoradiográfica colocalizaba con los campos de partículas.

Concluimos que el axón contiene ribosomas y que la sección del nervio los regula hacia arriba. Proponemos que estos ribosomas se originan en la célula de Schwann. Nuestra evidencia completa la base experimental para una síntesis de proteínas en el axón; por tanto, la biología de la fibra nerviosa deberá reformularse.
FONDECYT 1980973

"DESNUTRICION OCULTA" Y ASIMETRIA DE LAS RESPUESTAS TRANSCALLOSAS EVOCADAS EN LA CORTEZA VISUAL DE LA RATA (Hidden malnutrition and asymmetry of transcallosal evoked responses in the rat visual cortex). Pérez, H. y Espinoza, S. Laboratorio de Hormonas y Receptores. Area de Nutrición Humana y Clínica, INTA, Universidad de Chile.

Evidencias experimentales en ratas señalan que la restricción proteica (8% de caseína) a la dieta de la madre durante la preñez, calóricamente compensada con carbohidratos, genera en las crías al nacimiento pesos corporal y cerebral normales. Evaluamos en ratas alimentadas normalmente durante la gestación y la lactancia (G+L+), y malnutridas durante la gestación pero rehabilitadas durante la lactancia (G-L+), la diferencia interhemisférica de diferentes parámetros de las respuestas evocadas transcallosas (RETs) mediante la estimulación eléctrica de puntos homólogos contralaterales de la corteza visual. En animales anestesiados los experimentos se desarrollaron de acuerdo a la "NIH Guide for the Use of Laboratory Animals". Los resultados muestran que a los 48-52 días de edad, las ratas provenientes del grupo G-L+, respecto del grupo control (G+L+) presentan diferencias interhemisféricas significativamente menores en: amplitud, latencia N1, latencia P1-N1, fatigabilidad, y sumación temporal de las RETs. Los resultados sugieren que en la corteza visual de la rata, esta malnutrición proteica prenatal per se (desnutrición oculta), afecta la normal asimetría de las RETs, en especial su función sináptica, a pesar del período de rehabilitación nutricional durante la lactancia
Financiado por FONDECYT, proyecto Nº 1950253.

ESTUDIO DETALLADO DE LA PROYECCION VISUAL TECTO-ROTUNDAL EN LA PALOMA (Columba livia). (A detailed study of the tecto-rotundal pathway in the pigeon (Columba livia)). Marín,G., Henny,P., Sentis,E., Pohl, N. y Mpodozis, J. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. Casilla 653, Santiago, Chile.

La vía retino-tecto-fugal es la principal vía visual en vertebrados no mamíferos. Estaciones centrales de esta vía son el tectum óptico y el núcleo rotundus del tálamo (Rt). Hemos iniciado una investigación detallada de la proyección tecto-rotundal en la paloma, practicando microinyecciones pequeñas de trazadores neurales anterógrados (Phal, Biocytin) y retrógrados (DiI, Rodamina, True Blue). Los estudios anterógrados muestran que los axones tectales entran al Rt por su base ventral, y ramifican en varias colaterales ascendentes; cada colateral origina una arborización terminal discreta de forma elongada (aproximadamente 250 micrones, eje mayor), alrededor de las zonas glomerulares y dendritas principales de un grupo (locus) de células de Rt. Los estudios retrógrados muestran que cada locus de Rt recibe proyecciones de una subpoblación de células tectales distribuidas en toda la extensión de la lámina tectal de origen; además, al parecer, locus rotundales vecinos reciben proyecciones de subpoblaciones tectales distintas, interdigitadas entre sí. Estos resultados sugieren un tipo de organización topográfica "dominio hacia locus", que no ha sido descrita previamente en el sistema visual de vertebrados, y contribuyen a explicar las propiedades fisiológicas visuales de las células de Rt.
Financiado por Fondecyt 1990045.

MICROBIOLOGIA

EFECTO INHIBITORIO DE EXTRACTOS DE PLANTAS NATIVAS SOBRE LA REPLICACION DEL VIRUS DE LA NECROSIS PANCREATICA INFECCIOSA. (Inhibitory effect of native plants extracts on infectious pancreatic necrosis virus replication). Obreque,J., Jashés, M., Hueche, A., Zúñiga, G.E y A. M. Sandino. Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile.

El virus de la necrosis pancreática infecciosa(IPNV)es el causante de la enfermedad viral más seria que afecta a los salmones y truchas cultivados en Chile, provocando grandes pérdidas económicas. Por esto se requiere una terapia efectiva que permita controlar al virus. Actualmente, una de las alternativas prometedoras, especialmente en alevines, es el uso de compuestos antivirales, tanto de origen sintético como natural.En este trabajo se evaluó el efecto antiviral de extractos de plantas cultivadas in vivo e in vitro, mediante el ensayo de inhibición de la formación de placas y su efecto citótoxico, evaluado a través del efecto sobre la viabilidad celular. De un total aproximado de 40 extractos analizados, seis inhibieron en un 100% la replicación del virus IPN. Dos de ellos mostraron bajo o ningún grado de citotoxicidad en el rango inhibitorio. Resultados similares y reproducibles se obtuvieron al utilizar plantas cultivadas in vitro, lo que no ocurre con las plantas cultivadas in vivo, además el cultivo in vitro tiene la ventaja de que permitirá la producción continua de compuestos con actividad antiviral. Además se determinó que uno de estos extractos inhibe la síntesis de RNA viral y no afecta la síntesis de proteínas.
Financiado por Proyecto FONDEF D97I2034

COMPLEMENTACION FUNCIONAL ENTRE LOS TRANSPORTADORES ABC DE LA MICROCINA E492 Y LA COLICINA V: PARTICIPACION DE UN FACTOR ADICIONAL EN LA EXPORTACION DE AMBAS BACTERIOCINAS. (Functional complementation between microcin E492 and colicin V ABC-transporters: participation of an aditional factor in exportation of both bacteriocin). Castillo, J. A.* y Lagos, R. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

Klebsiella pneumoniae RYC492 produce un péptido de bajo peso molecular con actividad antibiótica denominado microcina E492 que actúa despolarizando la membrana citoplasmática de enterobacterias. La microcina E492 debe ser procesada y exportada hacia el medio extracelular para ejercer su acción bactericida, proceso en que participan proteínas exportadoras del tipo ABC. Se ha descrito que transportadores ABC altamente conservados pueden complementarse entre sí. El transportador ABC y la proteína accesoria de la microcina E492, codificados por los genes mceGH, presentan una identidad cercana al 90% con el transportador ABC de la colicina V (CvaB) y su proteína accesoria (CvaA). Sin embargo, trabajo previo de nuestro laboratorio sugiere que en el procesamiento y la exportación de la microcina E492 interviene un factor adicional (MceF) cuya función exacta se desconoce. En este trabajo se estudia la relación funcional que existe entre el sistema transportador de la microcina E492 y de la colicina V tratando de establecer el papel que juega MceF en este proceso. El análisis funcional realizado indica que al combinar los componentes de cada sistema, la colicina V puede emplear el transportador ABC (MceG) y la proteína accesoria (MceH) de la microcina E492 para su secreción únicamente cuando está presente la proteína MceF. Por el contrario, la microcina E492 no puede usar el transportador de la colicina V (cvaB) para alcanzar el medio extracelular y la proteína accesoria CvaA solo complementa parcialmente la falta de su homólogo mceH en la exportación de la microcina E492. Estos estudios indican que la complementación funcional no es recíproca aún cuando la similitud entre ambos sistemas es muy alta y que la exportación vía MceGH tanto de la microcina E492 como de la colicina V requiere de MceF.
Proyecto
FONDECYT 200018 y 1991017 *Becario DAAD.

CARACTERIZACION DE UNA REGION DEL GENOMA Y ESTUDIO DE LA FUNCIONALIDAD DE SUS PRODUCTOS EN LA OXIDACION DE HIERRO Y AZUFRE EN ACIDITHIOBACILLUS FERROOXIDANS. Levicán G.1, Guacucano M.1, Varela P.2, Jedlicki E.2 y Holmes D.1. 1 Lab de Bioinformática y Microbiol. Mol., Fac. de Química y Biología U. De Stgo. 2 ICBM, Facultad de Medicina , U. de Chile.

A.ferrooxidans es una bacteria acidofílica capaz de oxidar hierro y compuestos de azufre reducido. Hemos identificado una mutante espontánea con capacidad de oxidar tiosulfato, pero no hierro. Se determinó que, en la mutante, el gen resB es interrumpido por una secuencia de inserción. ResB está involucrada en la biogénesis de citocromos de tipo c. Se postula que la cepa mutante carecía de cierto(s) citocromo(s) de tipo c lo cual determinaba su fenotipo.

Se caracterizó la región del genoma asociada al gen resB. Contenidos en un operón están los genes cycA, nad1, petA, petB y petC, los cuales codifican para un citocromo c4, una deshidrogenasa, una proteína Fe-S (Rieske), un citocromo b y un citocromo c1 respectivamente. Río abajo están ubicados los genes resB, resC y un gen hipotético.

El citocromo c1, citocromo b y Rieske constituyen el complejo bc1, cuya función en A. ferrooxidans está asociada al flujo invertido de electrones conducentes a la generación de NAD(P)H. Utilizando técnicas espectrofotométricas y medición del consumo de O2 hemos determinado que el complejo bc1 también es expresado cuando las células oxidan tiosulfato, y participaría en el flujo directo de electrones que reducen el O2. Se ha identificado la presencia de una oxidasa terminal que se expresa durante la oxidación de tiosulfato. Se discutirá las implicancias de estos hallazgos en el modelo general de oxidación de hierro y azufre. Fondecyt 1980665.

ACTIVIDAD ANTIFUNGICA DE FLAVONOIDES Y DITERPENOS FRENTE A BOTRYTIS CINEREA. (Antifungal activity of flavonoids and diterpenoids on Botrytis cinerea) M. Cotoras, C. Folch, C. García, C. Lagos y L, Mendoza. Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile. Patrocinante: Dr. Hugo Cárdenas

Botrytis cinerea es un parásito facultativo que causa gran daño en las cosechas principalmente en las uvas. Tradicionalmente este hongo ha sido controlado por fungicidas del tipo de las dicarboximidas y benzimidazoles, los que han provocando una alta contaminación de suelos y aguas y un aumento de las cepas resistentes.

Un grupo de compuestos interesantes de estudiar lo constituyen los metabolitos secundarios aislados de plantas, entre los cuales se encuentran los terpenos, flavonoides, compuestos nitrogenados y alifáticos. En especial destacan los flavonoides y diterpenos constituyentes de los exudados resinosos, su importancia radica en que se encuentran en porcentajes altos en estas resinas, y son la primera barrera química a la que se enfrentan los fitopatógenos.

El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad fungitóxica contra B. cinerea de flavonoides y diterpenos naturales obtenidos del exudado resinoso de especies nativas del género Pseudognaphalium. Para medir el efecto de estos compuestos se determinó el porcentaje de inhibición del crecimiento radial del micelio. Entre los compuestos estudiados el ácido 3b-hidroxi-kaurenoico fue el que presentó la mayor actividad. Los únicos flavonoides activos fueron las flavonas con dos grupos hidroxilos y un grupo metoxilo en el anillo A.

Adicionalmente, se estudió el efecto de los diterpenos, ácidos 3b-hidroxi-kaurenoico y kaurenoico sobre la germinación de conidios de este hongo, encontrándose que sólo el primero produjo un retardo en la germinación.
Este trabajo fue financiado por la Universidad de Santiago de Chile y por el IFS

"EFECTO DE BACTERIAS EN EL CRECIMIENTO DEL DINOFLAGELADO TOXICO Alexandrium catenella EN CULTIVO" (Bacterial effect on Alexandrium catenella growth in culture) Uribe, P. y Espejo, R. . Laboratorio Toxinas Marinas ICBM Facultad de Medicina, Laboratorio Bioingeniería, INTA, Universidad de Chile

Los florecimientos del dinoflagelado Alexandrium catenella en Chile son los principales causantes de la acumulación de toxinas paralizantes o Saxitoxinas en mariscos. Desde el primer caso de intoxicación por esta toxina en Magallanes en 1972, se han registrado 348 casos con 26 fallecimientos. Los florecimientos de A. catenella y los cultivos obtenidos van acompañados de un gran número de bacterias cuyo efecto en su crecimiento o en la producción de toxinas es materia de controversia. Los resultados de los estudios publicados en este sentido son contradictorios o no permiten conclusiones inequívocas. En este trabajo mostramos la obtención de cultivos de A. catenella libres de bacterias y comparamos las propiedades de este dinoflagelado en ausencia y presencia de bacterias, incluyendo la producción de toxinas.

Normalmente, los cultivos clonales de A. catenella obtenidos de florecimientos en Chile, contienen entre 104 a 105 bacterias por dinoflagelado. Mediante tratamientos con antibióticos hemos obtenido cultivos con menos de una bacteria por dinoflagelado, determinado por cultivo, epifluorescencia y amplificación específica de espaciadores del rRNA por PCR. La ausencia de bacterias no cambia la rapidez de crecimiento pero aumenta la sobrevida en fase estacionaria. La toxicidad específica está siendo medida.
Proyecto Fondecyt 1990765

POLIMORFISMO DEL 16S rRNA EN BACTERIAS DEL GENERO VIBRIO (Distinct types of 16 rRNAs in bacteria of the genera Vibrio) Moreno C. y Espejo R.T., INTA, Universidad de Chile.

Uno de los genes más útiles para la identificación del género y de ciertas especies ha sido el 16S rDNA que permite además determinar relaciones filogenéticas. Generalmente es aceptado que los genes 16S rRNA son idénticos en organismos que contienen mas de un operón de genes ribosomales. Sin embargo, estudios recientes han demostrado la existencia 16S rRNA con diferencias en la secuencia nucleotídica en organismos con múltiples operones de RNA ribosomales. En este trabajo mostramos el polimorfismo de 16S rRNA en cepas tipo del genero vibrio y en aislados ambientales, por el ensayo de movilidad de heteroduplex (heteroduplex mobility assay, HMA). Los resultados sugieren que la existencia de genes 16S rRNA con secuencias diferentes es muy frecuente en especies del genero Vibrio. Sus diferencias pueden ser estimadas en alrededor del 3%, acorde con la migración electroforética relativa del heteroduplex en relación al homoduplex.

El polimorfismo observado podría deberse a una frecuente transferencia horizontal de genes entre bacterias de este género, incluidos aún genes ribosomales.
Proyecto Fondecyt: 1990765 y 200064

ANALISIS DE LA DIVERSIDAD BACTERIANA EN CHOLGA (AULACOMYA ATER) CONTAMINADA CON PSTs: POBLACION CULTIVABLE Y NO CULTIVABLE. (Analysis of the bacterial diversity in PST contaminated-mussels (Aulacomya ater): culturable and unculturable bacterial polulation).Vásquez, M1, Grüttner, C1., Moore, ERB2. 1Laboratorio de BioIngeniería, Universidad de Chile-INTA; 2Department of Microbiology, National Research Centre for Biotechnology, Braunschweig, Germany. Patrocinio: Romilio Espejo

Las toxinas paralizantes de mariscos (PST) de mayor peligro son las bloqueadoras del canal de sodio (SCB): saxitoxinas y tetrodotoxina. Si éstas toxinas están presentes en el plancton, pueden ser concentradas por moluscos filtradores provocando intoxicación o muerte en humanos. Se acepta que los principales productores de toxinas SCBs son los dinoflagelados, particularmente del género Alexandrium. Sin embargo, bacterias asociadas a dinoflagelados también pueden producir toxinas SCBs.

En este estudio se caracterizaron genética y fenotípicamente las bacterias cultivables obtenidas de una cholga (A. ater) contaminada con PSTs, proveniente de Magallanes al sur de Chile. El 77% de las bacterias cultivables fueron productoras de toxinas SCBs, por ensayo en células de neuroblastoma de ratón, y todas pertenecen al género Psychrobacter. Se analizó la diversidad bacteriana en cholga extrayendo el DNA total, amplificando el gen 16S rRNA, clonando y secuenciando los clones. La estimación de las relaciones filogenéticas con especies validamente publicadas indicó que las bacterias cultivables productoras de toxinas SCBs sólo corresponden a un pequeño porcentaje de la microflora total presente en la cholga, observándose una gran diversidad y alto número de especies aun no descritas.
(Proy. Cooperación BMBF/Conicyt CHL/98/009, Fondecyt 1990765 y IFS A/3057-1).

ANALISIS DE LA MICROFLORA BACTERIANA EN OSTRAS DEPURADAS. (Analysis of the bacterial microflora in depurated oysters). Romero J. y Espejo R.T. Laboratorio de Bioingeniería, INTA, Universidad de Chile.

La producción de ostras representa una importante actividad en la acuicultura chilena. Las ostras se consumen crudas lo que requiere asegurar su calidad microbiológica pues están expuestas tanto a patógenos de origen antropogénico como indígenas del agua de mar. El estudio de la microflora de la ostra es fundamental para comprender cómo las bacterias patógenas, se establecen en los bivalvos.

Los estudios de la microflora bacteriana en ostras se han limitado a la descripción de aquellas bacterias cultivables, sin embargo, éstas representan menos del 1% de las bacterias totales. Para estudiar la microflora bacteriana normal, las ostras fueron inicialmente depuradas para librarlas de bacterias aloctonas y posteriormente se analizaron por bacterias cultivables y totales por diferentes métodos.

Por medio de microscopía de epifluorescencia hemos determinado que las ostras depuradas contienen 1010 bacterias/g y que la depuración solo elimina alrededor de 107 bacterias/g. Por análisis del DNA extraído de la ostra depurada usando como marcador los espaciadores 16S-23S rDNA, hemos determinado que las bacterias que permanecen son diferentes a las liberadas por la depuración. Cultivos convencionales arrojan niveles de solo 105 UFC/gramo, que comprenderían bacterias poco abundantes en el total. Mediante cultivos en condiciones especiales hemos obtenido algunos aislados que podrían ser importantes componentes de la flora normal por la abundancia y frecuencia en que es encontrado el espaciador que contiene.
Financiamiento FONDECYT Nº 1990765 y 2000064

NEUROBIOLOGIA

EFECTO DUAL DEL OXIDO NITRICO (NO) EN EL CUERPO CAROTIDEO Y GANGLIO PETROSO. Dual effect of NO on the carotid body and petrosal ganglion). Iturriaga, R., Alcayaga, J., Labs. Neurobiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Católica de Chile y Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

Hemos contribuído a la proposición que el NO es un modulador inhibitorio de las respuestas del cuerpo carotídeo (CC) a hipoxia y otros estímulos (Brain Res 767: 384-387, 1997; Brain Res 799: 26-34, 1998; Brain Res 855: 282-286, 2000). En el CC, el NO actuaría a nivel vascular y sobre la excitabilidad de células quimioreceptoras y neuronas petrosas que las inervan. En el ganglio petroso (GP) aislado, encontramos que el nitroprusiato de sodio reduce los aumentos de frecuencia de descarga carotídea antidrómica (ƒc) inducida por acetilcolina, mientras que L-NAME potencia ƒc (Brain Res. 825: 194-198, 1999). Recientemente encontramos que niveles medios de NO(1-10 µM), producidos por SNAP y NOC-9, inhiben la respuesta hipóxica, pero producen excitación quimiosensorial en normoxia (J Appl Physiol 89: 1005-1012, 2000). Este efecto podría ser mediado por la inhibición reversible de la citocromo oxidasa por NO. Dado que el NaCN aumenta ƒc, estudiamos el efecto de niveles medios de NO aplicados al GP. Encontramos que SNAP aplicado a intervalos cortos inhibe ƒc, que es compatible con la inhibición que produce SNAP sobre corrientes de entrada y salida en neuronas petrosas en cultivo primario. Sin embargo, SNAP aumenta ƒc al ser aplicado a intervalos largos, indicando que las neuronas petrosas podrían ser excitadas por NO.
Financiado FONDECYT 1980965.

PRESENCIA DE ANHIDRASA CARBONICA EN NEURONAS SENSORIALES VISCERALES: EVIDENCIA HISTOQUIMICA. (Histochemical evidence of carbonic anhydrase in visceral sensory neurons). Retamal, M., Arroyo, J., Alcayaga, J. Laboratorio Neurobiología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

Las neuronas que expresan anhidrasa carbonica (AC) pueden regular el bicarbonato interno, proveniente de la hidratación del CO2, a través de intercambiadores iónicos. Esto determina cambios en el pH interno y el potencial de membrana que determinan las respuestas neuronales. Se estudió la presencia de AC en las neuronas sensoriales que inervan los quimiorreceptores arteriales, sensibles al CO2.

Se estudiaron dos ganglios sensitivos (petroso y nodoso) y el ganglio cervical superior (simpático), obtenidos de gatos adultos anestesiados con pentobarbital, tanto en ganglios completos como en cultivos celulares. Para el cultivo, se disociaron los ganglios y mantuvieron las células en medio F12 por 3-14 días. Los ganglios completos se fijaron con 2% paraformaldehido y 4% glutaraldehido, se procesaron y cortaron a 10 µm de espesor. En ambos casos las neuronas fueron teñidas según la técnica de Hansson.

En los cortes, ninguno de los ganglios evidenció la presencia de AC. Sin embargo, los cultivos muestraron una población de neuronas teñidas para AC. La densidad de la tinción fue mayor en los ganglios viscerales que en el ganglio simpático.

Nuestros resultados sugieren que, in toto, la AC esta ausente en los ganglios, o su actividad está bajo el nivel de detección de la técnica. Así mismo, pareciera existir inducción de la AC en neuronas en cultivos.
Financiamiento: FONDECYT 1990030

LA DOPAMINA INHIBE LAS RESPUESTAS EVOCADAS POR ATP EN EL GANGLIO PETROSO DE GATO IN VITRO. (Dopamine inhibitis ATP-induced responses in the cat petrosal ganglion in vitro). Cerpa, V., Alcayaga, J. Laboratorio Neurobiología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

Las fibras que proyectan por el nervio carotideo aumentan su frecuencia de descarga (ƒNC) por aplicación de acetilcolina (ACh) y cianuro al ganglio petroso in vitro, respuestas que son inhibidas por la aplicación previa de dopamina (DA). Recientemente hemos comunicado que el ATP también aumenta la ƒNC. Por este motivo, estudiamos los efectos de DA sobre las respuestas evocadas por ATP en el ganglio petroso.

El ganglio petroso, con su nervio carotideo, se extrajeron de gatos adultos anestesiados, y se superfundieron con solución Hanks-5mM HEPES a 38 ± 0,5 °C y pH 7,43. Se registró la frecuencia de potenciales de acción en el nervio carotideo (ƒNC). ATP (1-3000 µg) y DA (1-1000 µg) se aplicaron en bolo (10 µl) en la cercanía del ganglio.

La aplicación de ATP produjo un aumento dosis-dependiente de ƒNC. DA no tuvo efectos sobre la descarga basal, pero su aplicación previa (20-30 s) al ATP produjo una reducción dosis dependiente de sensibilidad, y un desplazamiento hacia la derecha de las curvas dosis-respuesta al ATP.

Nuestros resultados muestran que la DA presenta una acción inhibitoria sobre la descarga inducida por ATP. De esta manera, se sugiere que las sinapsis periféricas en las fibras aferentes pueden ser moduladas por la DA.
Financiamiento: FONDECYT 1990030

CORRIENTE INDUCIDA POR ATP EN NEURONAS EN CULTIVO DEL GANGLIO PETROSO DEL GATO. (ATP-induced current in cat petrosal ganglion cultured neurons). Alcayaga, C. Universidad de Chile, Laboratorio Neurobiología, Facultad de Ciencias y Programa Disciplinario de Fisiología y Biofísica, ICBM, Facultad de Medicina, (Patrocinio: J. Alcayaga).

Las fibras del nervio glosofaringeo son activadas por aplicación de ATP al ganglio petroso in vitro. Para dilucidar los mecanismos de esta activación, se estudiaron las respuestas eléctricas inducidas por ATP en neuronas individuales del ganglio petroso.

Los ganglios petrosos de gatos adultos se disociaron y cultivaron en medio F-12, con sueros bovino fetal y equino (10% c/u). Luego de 3-12 días en cultivo, se registraron las respuestas, en corriente y voltaje, de neuronas de 35-80 µm de diámetro, utilizando la técnica de "patch-clamp" en configuración célula completa. El medio externo se perfundió continuamente, y el ATP se aplicó por 10-30 s mediante perfusión por gravedad en la cercanía de la neurona.

La aplicación de ATP, en el rango de 0,1 a 20 µM, indujo una corriente de entrada, de magnitud dosis-dependiente, que se establece rápidamente (1-2 s) y que se desensibiliza durante el transcurso del pulso. Esta corriente produce una despolarización y la descarga de potenciales de acción en la neurona, cuya magnitud y frecuencia dependen de la concentración de ATP.

Nuestros resultados muestran que las neuronas del ganglio petroso responden al ATP con una corriente de entrada, responsable de la despolarización y la descarga de potenciales de acción.
Financiamiento: FONDECYT 1990030.

ASIMETRIAS EN EL TAMAÑO DE NRAchE EN AREAS FRONTALES ASOCIADAS AL LENGUAJE. (AchE-RN size asymmetries in the frontal language areas). García, R., Montiel, J., Cupello, P., Aboitiz, F. Programa de Morfología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

Aunque la especialización del hemisferio izquierdo para el lenguaje ha sido establecida hace más de un siglo, un tema que permanece abierto en el estudio de las variaciones cerebrales individuales es que pueden existir diferencias en el tamaño de las NRAchE (neuronas ricas en acetilcolinesterasa) en relación a la lateralidad hemisférica. Este aspecto ofrece indudable interés pues es conocida la lateralización funcional relacionada con el lenguaje, así como sus probables correlatos estructurales.

Se han descrito, en el área 45 de Brodmann, asimetrías interhemisféricas que comprometen a las neuronas piramidales más grandes del estrato 3 (Hayes y Lewis, 1995). Mediante estudios histoquímicos y análisis de imágenes, hemos observado que el tamaño de las NRAchE del estrato 3 es significativamente más grande en la Pars Triangularis del hemisferio izquierdo (732,91 µm2) que en la región homotópica contralateral (579,4 µm2). Esto puede relacionarse con la participación del área 45 izquierda de Brodmann en circuitos involucrados con las funciones motoras del habla. Este argumento refuerza las ideas de que tanto las NRAchE como la inervación colinérgica presentan variabilidad regional atribuible a modificaciones en el procesamiento de la información cortical.

ESTUDIOS FISIOLOGICOS Y COGNITIVOS EN EL SINDROME DE WILLIAMS. (Physiological and cognitive studies in Williams syndrome) López, J.1, Schröter, C.1, Rojas, J.P.1, Rosemberg, C.1, Mena, I.3, Carrasco, X.1, Castillo, S.2, Aboitiz, F.1. 1Programa de Morfología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. 2Hospital Clínico de la Universidad de Chile. 3Clínica Las Condes.

El síndrome de Williams (WMS) es causado por la pérdida de una copia del gen de la elastina y de genes adyacentes, situados en el brazo largo del cromosoma 7. Entre sus múltiples manifestaciones, WMS presenta un perfil cognitivo peculiar que lo hace un buen modelo para estudiar las relaciones entre genes, cerebro y cognición. En tres pacientes, analizamos aspectos de lateralizacion cerebral usando pruebas de escucha dicótica y taquistoscópicas, complementados con estudios electrofisiológicos de potenciales evocados (ERPs), con análisis de la morfología cerebral mediante imágenes de resonancia magnética (MRI) y con estudios de actividad cerebral usando imágenes por emisión de fotón único (SPECT). ERP reveló un N140 de gran amplitud y un P300 bajo respecto a controles. El potencial N140 se ha relacionado con el esfuerzo cognitivo vinculado a la tarea, mientras que el P300 se ha asociado al éxito relativo en la detección de estímulos. El análisis de pruebas taquitoscópicas reveló un desmedro en el rendimiento cuando los estimulos lateralizados eran presentados en el hemicampo izquierdo (hemisferio derecho). SPECT mostró hipoactivación frontal inferior derecha, e hiperactivación frontal superior derecha, lo cual es congruente con los déficits en el procesamiento del hemisferio derecho.

REGULACION DE LA FUNCION DE LA SUBUNIDAD A1 DEL RECEPTOR DE GLICINA POR PROTEINAS G. (Regulation of the a1 glycine receptor subunit by G proteins). Yévenes, G., Tapia, J.C., *Olate, J., Aguayo, L.G., Laboratorios de Neurofisiología y *Biología Molecular, Deptos. de Fisiología y *Biología Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción.

El receptor inhibidor de glicina (R-Gli) pertenece a la superfamilia de canales iónicos activados por ligando y es modulado por proteínas quinasas del tipo serina/treonina. Lo último permitiría sugerir que las proteínas G son también capaces de modular la función del receptor. Utilizando la técnica de patch clamp, estudiamos los efectos directos de proteínas G con GTP-g-S en la corriente activada por glicina. Para ello, se transfectaron células HEK-293 en forma transiente con la subunidad a1 humano o cotransfectadas con el receptor y la subunidad Gas humana. La expresión de la subunidad a1 generó respuestas a glicina estables en el tiempo, con sensibilidad a glicina (EC50=30±1 µM) y a estricnina (IC50=71±14 nM). La aplicación intracelular de 500 µM GTP-g-S potencio la corriente (217±30%), sugiriendo la participación de PKA. Sin embargo, la co-expresión del receptor con la subunidad Gas inhibió el efecto potenciador provocado por la adición de GTP-g-S. Lo anterior sugiere que el efecto potenciador del nucleótido de guanina no esta relacionado con eventos de fosforilación por PKA. Actualmente estamos utilizando otras subunidades Ga de proteínas G e inhibidores de proteínas quinasas para caracterizar el mecanismo intracelular de esta modulación.
Financiado por Proyectos Fondecyt 1980106 y 1000359.

BIOQUIMICA

ADN Y LA MAQUINA DE TURING (ADN and the Turing machine). Martínez E1., y Lizama C2.1 Facultad de Ingeniería.2 Facultad de Ciencias naturales de la Universidad de Atacama.

En 1935 Alan Turing concibió la maquina de Turing como modelo para definir un procedimiento efectivo o algoritmo. La maquina virtual de Turing almacena información en forma de secuencias de letras escritas sobre una cinta y manipula esa información mediante las instrucciones contenidas en una unidad de control finito.

La gran capacidad de la molécula de ADN de almacenar información en sus secuencias de nucleótidos y la dinámica de replicación donde participan diversas proteínas y enzimas que actúan juntas como una nanomaquina de reproducción, plantea la posibilidad de utilizar estas propiedades para la resolución de problemas matemáticos. Se presentan dos ejemplos de máquinas de Turing: MT-polimerasa y MT-ligasa que producen resultados similares a la acción de las enzimas ADN polimerasa y ligasa respectivamente.

Formalmente la maquina de Turing se denota por:
M = (Q,S,G,d,q0,B,F) donde:

Q es el conjunto finito de estados (q0 es el estado inicial y F es el conjunto de estados finales); S es el conjunto de símbolos de entrada; G es el conjunto de caracteres o símbolos que se pueden escribir sobre la cinta; B es un elemento de G (blanco), que significa no escribir sobre la cinta y d es la función que indica el símbolo que se escribirá sobre la cinta, el estado que tomará el cabezal de lectura, y finalmente, la dirección (derecha o izquierda) que procederá a leer el cabezal.
Formalmente, d : Q x G ® x G x (d,I)

Se entiende este trabajo como un soporte didáctico más para el área emergente que es la Computación Molecular.

SECUENCIAS PALINDROMICAS EN LAS PROTEINAS Díaz, C.1, Jedlicki, E.2, Holmes, D.1 (Palindromic sequences in proteins) 1Laboratorio de Bioinformática y Microbiología Molecular, Facultad de Química y Biología, USACH. 2Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

Hemos encontrado segmentos palindrómicos de diversa longitud y simetría en las secuencias de algunas proteínas asociadas con el flujo de electrones durante la oxidación de hierro en Acidithiobacillus ferrooxidans. La palindromía también se encuentra entre proteínas no pertenecientes a Acidithioba-cillus ferrooxidans, encontrándose casos que las correlacio-nan con un papel en la formación de dominios de interacción entre proteínas. Por ejemplo, la plastocianina de espinaca contiene un palíndrome de 67 aminoácidos (P16 a F82) que incluye dos zonas aniónicas equidistantes del aspártico central del palíndrome (D42 a E45 y E59 a D61). Esta región está involucrada en el acoplamiento a otros componentes transportadores de electrones, como el citocromo f y la subunidad psaF del fotosistema I.

También en plastocianina, otro segmento palindrómico (L5 a L12) constituye un parche hidrofóbico que es responsable de favorecer dichas interacciones.

De manera sorprendente, la subunidad psaF del fotosistema I de Chlamydomonas reinhardtii, une el (los) parches aniónicos de la plastocianina de espinaca a través de una serie de lisinas (K16 a K23) que constituyen el centro de uno de los palíndromes presentes en esta subunidad.

Se discutirá las implicaciones estructurales y bioquímicas de la palindromía en las proteínas y los modelos sobre el origen de este tipo de cadenas.
Proyecto Fondecyt 1980665

RELACION ESTRUCTURA-FUNCION DE LA SUBUNIDAD CATALITICA DE LA PROTEINAQUINASA CK2 DE XENOPUS LAEVIS (Structure-function relationship of catalytic subunit of Xenopus laevis protein kinase CK2). Jacob, G., Tapia, J. Connelly, C. y Allende, J.E. Programa de Biología Celular y Molecular, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

La proteínaquinasa CK2 participa en el control de la proliferación celular. Está formada por subunidades catalíticas (a o a') y reguladoras (b), constituyendo tetrámeros a2b2, aa'b2 y a'2b2. Un aspecto esencial es definir los rasgos estructurales que determinan la interacción entre sus subunidades, especialmente el papel del extremo carboxilo terminal de a. Se sabe que la CK2a de Zea mays, que carece de 60 aminoácidos en el extremo carboxilo comparada con otras CK2a, posee actividad semejante a la de la holoenzima humana y que, a su vez, CK2a' que es más corta que CK2a en alrededor de 43 residuos, es igualmente activa al formar una holoenzima. Hemos analizado el comportamiento de mutantes de a y de b obtenidas por mutagénesis sitio dirigida. Para este trabajo se construyeron 5 mutantes de deleción del extremo carboxilo de la CK2a (391 aminoácidos), diseñadas sobre la base de la estructura cristalina conocida de la proteína de Zea mays: a1-331, a1-327, a1-324, a1-322 y a1-314. Se encontró que el requerimiento estructural mínimo para obtener una enzima activa es desde el aminoácido 1 al 327 y se caracterizaron cinéticamente las mutantes a1-331 y a1-327. Además se presentan evidencias que indican que la deleción de más de 65 aminoácidos impide el correcto plegamiento de la proteína y su interacción con b.
(Apoyado por Fondecyt e ICGEB)

CARACTERIZACION ELECTROQUIMICA Y BIOQUIMICA DE UNA HIDROGENASA DE Thermococcus celer. (Electrochemical and biochemical caracterization of a hydrogenase from Thermococcus celer). Blamey, J.M.1, Chiong, M.1 and Smith, E.T.2. 1INUAL LTDA, General Ekdhal 159, Recoleta, Santiago, Chile. Email : jblamey@bioscience.cl 2Chemistry Department. Hamline University, MN, USA. Email : gsmith@gw.hamline.edu.

Thermococcus celer is a hyperthermophilic archeon that grows optimally at 98ºC. This kind of microorganism only use carbohydrates and aminoacids as carbon and nitrogen sources, and by a fermentative type of metabolism, H2 and CO2 are detectable products. These organisms also reduce elemental Sº to H2S.

Pyrococcus furiosus and Thermotoga maritima are the best studied organisms of this kind. However, metabolic pathways and enzymes are not well characterized. These classes of microorganisms are among the highest H2 producers so far described in nature. Then, an insight of the mechanism of how H2 is produced may be useful to understand their primary metabolism.

T. celer cells contain a single hydrogenase located in the cytoplasm which has been purified to apparent homogeneity. In vitro assays demonstrated that this enzyme is able to catalyze the oxidation as well as the evolution of H2. The hydrogenase is a very thermostable enzyme showing no loss of activity after incubation at 100ºC for 12 hrs. The optimum pH range for H2 oxidation was 8.0-8.6 and the optimum catalytic activity was above 95ºC. Oxygen and nitrite are inactivators of this enzyme. Iron and acid labile sulfide are part of its active center. Direct electrochemistry of T. celer hydrogenase, demonstrated that this enzyme has an Eº25º C = -474 mV.
This work was supported by grant FONDECYT Nº 1960171.

CARACTERIZACION BIOQUIMICA Y EFECTOS INHIBIDORES DE DINOFISISTOXINA-1, ACIDO OKADAICO Y MICROCISTINA L-R EN PROTEINA FOSFATASA 2A PURIFICADA DE MYTILUS CHILENSIS. (Biochemical characterization and inhibitory effects of dinophysistoxin-1, okadaic acid and microcystine L-R on protein phosphatase 2A purified from Mytilus chilenses). Rivas, M., Liberona, J. L. and Lagos, N. Laboratorio Bioquímica de Membrana, Departamento de Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Casilla 70005, Correo 7, Santiago - Chile.

Protein phosphatases are involved in many cellular processes. One of the most abundant and best studied members of this class is protein phosphatase type-2A (PP2A). In this study, PP2A was purified from the mussel Mytilus chilensis. Using both SDS-PAGE and size exclusion gel filtration under denatured conditions, it was confirmed that the PP2A fraction was essentially pure. The isolated enzyme is a heterodimer and the molecular estimated masses of the subunits are 62 and 28 kDa. The isolated PP2A fraction has a notably high p-NPP phosphatase activity, which is inhibited by NaCl. The hydrolytic p-NPP phosphatase activity is independent of the MgCl2 concentration.

The time courses of the inhibition of the PP2A activity of p-NPP hydrolysis by increasing concentrations of three phycotoxins that are specific inhibitors of PP2A are shown. Inhibitions caused by Okadaic acid, dinophysistoxin-1 (DTX1, 35-methylokadiac acid) and Microcystine L-R are dose-dependent with inhibition constants (Ki) of 1.68, 0.40 and 0.27 nM, respectively. Microcystine L-R, the most potent phycotoxin inhibitor of PP2A isolated from Mytilus chilensis with an IC50 = 0.25 ng/ml, showed the highest specific inhibition effect an the p-NPP hydrolisis. The calculated IC50 for DTX1 and OA was 0.75 ng/ml and 1.8 ng/ml, respectively.
Supported by Grant FONDECYT 1961122 and Fundación ANDES.

¿BAF57, UNA FAMILIA DE PROTEINAS ARQUITECTONICAS DE ADN CON DISTINTAS ESPECIFICIDADES?. (BAF57 a family of architectural DNA proteins with different specificities?) Battaglioli, E., Mandel, G. y Andrés, M.E.#. HHMI and Department of Neurobiology and Behavior, SUNY at Stony Brook, New York, USA. #Laboratorio de Farmacología-Bioquímica, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.

La proteína BAF57 pertenece al complejo remodelador de cromatina SWI/SNF y se ha propuesto como responsable de la unión de este complejo al ADN. En un ensayo de doble híbrido utilizando el corepresor CoREST como anzuelo, aislamos una variante de la proteína BAF57, a la que llamamos BAF57v. Esta proteína es de 363 aminoácidos y posee una región carboxilo terminal distinta a la BAF57. Además de BAF57v, otras 4 variantes fueron clonadas utilizando cADN de células PC12. Todas poseen en común la región amino-terminal donde se encuentra el dominio de unión a ADN y el dominio de interacción con el complejo SWI/SNF. El gen Baf57 está en el cromosoma 17 humano y cada una de las variantes aisladas se generaría por procesamiento alternativo.

El análisis funcional de BAF57 y BAF57v en el complejo REST/CoREST, muestra que ambas interaccionan con CoREST y REST in vivo. Sin embargo, sólo BAF57 reclutaría BRG1, al promotor del canal de sodio tipo II. BAF57v se encuentra también en immunoprecipitados del complejo Mi2, pero no immunoprecipitan el promotor del canal de sodio tipo II. Estos resultados permiten sugerir que las diferentes BAF57 podrían reclutar específicamente distintos complejos remodeladores de cromatina.
Financiado por FONDECYT # 1000722

LOCALIZACION DE ENZIMAS GLICOLITICAS Y GLUCONEOGENICAS EN RIÑON DE RATA. (Localization of glycolitics and gluconeogenics enzyme in rat kidney). Yañez, A.J., Brito, M., Droppelmann, C.A., Asenjo, J.L., Concha, I.I. y Slebe, J.C. Instituto de Bioquímica, Universidad Austral de Chile.

La organización y regulación de las vías metabólicas podría ocurrir in vivo a través de complejos multienzimáticos, interacciones específicas que permitirían que las reacciones metabólicas de una vía sean catalizadas en forma secuencial. La inmunolocalización de una enzima gluconeogénica fructosa-1,6-bisfosfatasa (FBPasa) y de Aldolasa B, en riñón de rata (Sáez et al, (1996); Sáez y Slebe (2000) J. Cell. Biochem. 63, 453-462; 78, 62-72) mostró que ambas enzimas se localizan en las células del túbulo contorneado proximal de la corteza. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la distribución y localización de las isoenzimas de tejido muscular: aldolasa A y piruvato quinasa en tejido renal. El análisis inmunohistológico en riñón reveló que ambas enzimas presentan una fuerte inmuno-tinción en el asa de Henle de la médula y en los túbulos distales de la corteza. Utilizando microscopía confocal se encontró que aldolasa A, tiene una localización subcelular preferentemente citosólica y perinuclear en células del túbulo distal y perinuclear y nuclear en el asa de Henle. Un análisis de estos resultados, en conjunto con los obtenidos anteriormente para FBPasa y Aldolasa B, nos permiten sugerir que la isoenzima B de Aldolasa participaría en la via gluconeogénica y que la isoenzima A, sería la que participaría en la vía glicolítica. Además, lo resultados apoyan la noción que la localización de las enzimas es importante en la regulación de la función metabólica. (Financiado por: FONDECYT 1981001 y DID-UACh).

UN MODELO CELULAR PARA MEDIR LA INHIBICION DE LA DESHIDROGENASA ALDEHIDICA-2 EN HEPATOMA DE RATA. (A cellular model for the measurement of ALDH-2 inhibition in rat hepatoma). Fuentes, N., Moncada, C., Sapag, A., Israel, Y. Laboratorio de Farmacoterapia Génica. Departamento Química Farmacológica y Toxicológica. Facultad Ciencias Químicas y Farmacéuticas. Universidad de Chile.

Una promisoria terapia del alcoholismo se lograría a través de la inhibición de la enzima aldehído deshidrogenasa mitocondrial usando (i) oligonucleótidos de antisentido, (ii) ribozimas o (iii) transfección de genes protectores. La ALDH-2 cataliza la conversión del acetaldehído a acetato. Cuando es inhibida, el acetaldehído acumulado produce un efecto disfórico que constituye el fundamento de la terapia de aversión por disulfiram.

Anteriormente, describimos un método usando 14C-etanol para medir la actividad de esta enzima. Aquí presentamos un nuevo método simple y sensible, que permite seleccionar por "screening" primario, los oligonucleótidos antisentido con mayor efecto inhibitorio y se basa en la medición del acetaldehído acumulado en el estado estacionario durante el metabolismo celular. El acetaldehído es derivatizado con dinitrofenilhidracina cuantificado mediante HPLC usando crotonaldehído como estándar interno.

Aquí mostramos que el acetaldehído producido en células H4IIEC3 de hepatoma de rata incubadas con etanol (i) 50 o (ii) 500 µM y en presencia cianamida 200 µM alcanzan niveles (i) cuatro y (ii) veinte veces superiores a los obtenidos en ausencia de este inhibidor.

Los valores observados son similares a los que se obtienen en individuos orientales ALDH(-) que beben alcohol. El método resulta altamente sensible y adecuado para cuantificar la inhibición de la ALDH2.
Fondecyt 1981047; Cátedra Presidente de la República 1997 Dr. Yedy Israel.

INMUNOLOGIA

ASOCIACION ENTRE POLIMORFISMO DEL PROMOTOR DEL FACTOR DE NECROSIS TUMORAL Y PERIODONTITIS ASOCIADA A DIABETES TIPO 1. (Association between polymorphism in the tumor necrosis factor promoter region and periodontitis associated to diabetes type 1). Aguirre, A1., Pavez, V2., Perez, C1., Molina, M.C1., Ferreira, A1., Aguillón, J.C1. Programa de Inmunología1, ICBM, Facultad de Medicina, Facultad de Odontología2, Universidad de Chile.

Existe una asociación entre la mayor producción de TNF y haplotipos en el promotor de éste, principalmente en la posición -308. Individuos haplotipo TNF1 (G/G) producirían menos TNF que individuos haplotipo TNF2 (G/A) frente a un mismo estímulo. Esto se ha relacionado al riesgo de desarrollar enfermedades en las que habría una sobreproducción de TNF, situación a demostrar en periodontitis asociada a diabetes tipo 1. Así, se seleccionaron 38 individuos, 16 de ellos diabéticos tipo 1, 9 con periodontitis establecida, y 7 con salud periodontal. El grupo control constó de 19 sujetos no diabéticos y sin periodontitis. Al aplicar la prueba exacta de Fisher no se encontró asociación significa entre los 3 grupos en estudio. Sin embargo, dentro de los individuos diabéticos, en aquellos con periodontitis se detectó la presencia del alelo TNF2 en un 22%, mientras el resto presentó en un 100% el alelo TNF1.

La producción de TNF y la actividad citotóxica, a cantidades equimolares de TNF, varía entre los individuos, no siendo significativas al comparar los grupos de riesgo con los controles.
Financiado por FONDECYT 1990936.

ESTUDIO DE LA ACTIVACION DEL FACTOR DE TRANSCRIPCION NF-kB "IN SITU" MEDIANTE INMUNOHISTOQUIMICA SOUTHWESTERN. (Study of the Nuclear Factor- kappa B (NF-kB) "in situ" activation by immunohistochemistry southwestern). *Barría, M., *Esquivel, P.,&Droguett, M.A., &Burgos, M.E. y &Mezzano, S. *Instituto de Inmunología , &Instituto de Medicina, Universidad Austral de Chile, Valdivia.

NF-kB es un factor de transcripción que juega un rol importante en la regulación de la expresión de genes de la respuesta inmune e inflamatoria, tales como citoquinas, moléculas de adhesión, moléculas de histocompatibilidad. El NF-kB es un heterodimero que consiste de dos proteínas, subunidad p65 y subunidad p50.

En el presente trabajo se estudió la expresión de NF-kB activado en biopsias renales humanas mediante el uso de la tecnica de inmunohistoquimica southwestern, en algunos pacientes se evaluó la expresión de mRNA a MCP-1 y RANTES, seguido de la determinación NF-kB. Por otra parte, se evaluó la expresión de expresión de NF-kB activado en tiroides de ratones con tiroiditis autoinmune.

Los resultados obtenidos en biopsias renales humanas indican un alto grado de activación NF-kB en pacientes con daño renal y proteinuria alta y se correlaciona con la expresión de citoquinas como MCP-1 y RANTES. Los resultados del estudio de tiroides de ratones con tiroiditis autoinmune se observa un alto grado de infiltración linfocitaria y la activación de NF-kB en estas células. Por lo tanto, podemos concluir

Que la técnica de inmunohistoquímica southwestern, permite determinar NF-kB "insitu" en forma eficiente y además nos permite correlacionarlo directamente con la expresión de genes de citoquinas.
Financia Proyectos: DID-UACH 200011 y Laboratorio Andrómaco S.A.

GENERACION DE LINFOCITOS T CITOTOXICOS ESPECIFICOS CONTRA ANTIGENOS ASOCIADOS A MELANOMA USANDO CELULAS DENDRITICAS. (Generation of Melanoma Associated Antigens-Specific CTL Using Dendritic Cells) Escobar A., López, M., Kurte, M., Salazar-Onfray F. Programa de Inmunología. ICBM. Facultad de Medicina. U de Chile. Independencia 1027. Santiago.

Los antígenos asociados a melanoma (MAA) reconocidos por linfocitos T citotóxicos (CTL) son epitopos peptídicos asociados a MHC, derivados de proteínas embrionarias u otras normales expresadas en los melanosomas y relacionadas a la síntesis de melanina en melanoma y melanocitos. Las células dendríticas (DC) son las células presentadoras de antígeno (APC) más eficientes en la inducción de una respuesta inmune celular. Se localizan en la mayoría de los tejidos, donde capturan y procesan antígenos, expresando moléculas coestimuladoras y migrando a los nódulos linfáticos donde activan CTL específicos. En este trabajo, evaluamos la capacidad de las DC, derivadas de PBMC de donantes normales tratados con GM-CSF e IL-4 y cargadas con péptidos HLA-A2 restringidos, de inducir CTL especificas contra MAA. Los péptidos utilizados fueron, MART-1, gp100(280), Tirosinasa, gp100(209), MC1R(244), MC1R(281), MC1R(291) y péptidos análogos a MC1R244 modificados para aumentar su afinidad para HLA-A2 (M1, M2, M3). Se evaluó el fenotipo de las DC utilizando marcadores de membrana y citometría de flujo. Las CTL generadas con los péptidos gp100(280), gp100(209), MC1R(244), MC1R(281), MC1R(291), M1, M2, M3 fueron capaces de reconocer células T2 cargadas exógenamente con péptidos relevantes. No se produjo reconocimiento de células T2 cargadas con péptidos irrelevantes. Además, no se observa mayormente actividad LAK, reflejada en el bajo reconocimiento de la línea celular K562. Estos resultados serían positivos para el desarrollo de una inmunoterapia contra el melanoma. Financiamiento FONDECYT 1000888.

EFECTO DE GLUCOSA EN LAS PROTEINAS DE LINFOCITOS DE PACIENTES DIABETICOS TIPO 2. (Effect of glucose on lymphocytes proteins obtained from type 2 diabetes mellitus patients). Rodríguez C., Fuentes Y., Pérez M*.,Silva V., Lamperti L., González M. Facultad de Farmacia. Universidad de Concepción. *Facultad de Medicina, Universidad Católica de la Santíssima Concepción.

Los linfocitos constituyen las primeras células que infiltran la placa ateromatosa. El objetivo de este trabajo es determinar el efecto de glucosa en las proteínas de linfocitos de sujetos control y de diabéticos tipo 2.

Los linfocitos fueron obtenidos en Histopaque, lavados y dejados en reposo. 5 x 105 células/ml fueron activadas con Fitohemaglutinina (PHA) 1 µg/ml en RPMI 1640 con glucosa 5 y 11 mM. Una alícuota de suspensión celular fue centrifugada a 400xg, el pellet celular fue lisado y sometido a electroforesis en PAGE -SDS. Otra alícuota fue centrifugada a 1500xg obteniendo pellet, que fue solubilizado, y sobrenadante que fue liofilizado y reconstituído. Ambas fracciones fueron sometidas a electroforesis en SDS- PAGE.

Los resultados muestran la presencia de una proteína de 28.000 de PM en linfocitos de diabéticos, la cual se detecta en linfocitos activados, de sujetos control. Esta proteína de 28.000 se observa en el pellet de los linfocitos, de diabéticos, activados con PHA en 5 mM glucosa, este efecto no se observa con 11 mM glucosa. Se discute la presencia de esta proteína en relación con la activación linfocitaria.
Financiado por DIU 99.072.020-1.0. Universidad de Concepción.

TRASPLANTABILIDAD DE CELULAS PROGENITORAS MESENQUIMATICAS HUMANAS. (Human mesenchymal progenitor cells transplantability). Allers, C. y Conget, P. Biología Celular, INTA, Universidad de Chile. Patrocinio: Minguell, J.

Desde la médula ósea (MO) de individuos adultos, es posible obtener y expandir células progenitoras mesenquimáticas (MPC). Estas células pueden diferenciarse a osteoblastos, condrocitos, tenocitos, adipocitos, células musculares, neurales y del estroma de MO. Con fines clínicos, las MPC podrían implantarse en el tejido afectado o infundirse sistémicamente. Para evaluar la trasplantabilidad (destinación y permanencia) de las MPC utilizamos un modelo de xenotrasplante en ratones inmunodeficientes. La destinación se evaluó post-infusión intravenosa de células (4-10 x 104/g animal) marcadas con HMPAO-Tc99m, obteniendo imágenes de cuerpo completo en g-cámara. La permanencia se evaluó en función de la presencia de DNA humano en los tejidos del receptor por PCR (sensibilidad 1/70.000). Las MPC infundidas circularon durante 3 h, pero una fracción mayoritaria fue retenida en el pulmón. A las 24 h, todavía se observó radiactividad en el pulmón y en el sitio de inyección, y débilmente en el esqueleto. Por lo tanto, sólo una fracción marginal de MPC es destinada a la MO, la mayoría es secuestrada en el pulmón. A los 3,5 meses post-infusión, se detectaron células humanas en los tejidos hematopoyéticos del ratón (MO y bazo). A los 10 meses, se encontraron en otros tejidos mesenquimáticos (fémur, oreja, cola, cuadriceps). En ningún animal, fue posible detectar células humanas en el cerebro, ni en las gonadas. Así, la fracción de células trasplantable, después de repoblar la MO, contribuiría a la mantención de la homeostasis de los tejidos mesenquimáticos durante el recambio fisiológico. FONDECYT 1000668

CLONING AND EXPRESSION OF THE INSULIN GENE IN THE KERATINOCYTE CELLS. Bernal, G., Urra, S., Zamorano, P., Atwater, I; Rojas, E. Laboratorio de Endocrinología Molecular, Programa de Morfología, ICBM, Fac. de Medicina, Universidad de Chile.

Type I or Insulin/dependent diabetes mellitus (IDDM), is a chronic autoimmune disease characterized by the progressive destruction of insulin-producing pancreatic b-cells. Diabetic patients have almost no endogenous hormone, and rely on exogenous insulin administration to control blood glucose levels. A new approach to the treatment of IDDM could be provided by gene therapy. Autologous cells, antigenically different from b-cells can be genetically engineered for the synthesis and release of insulin under physiological stimuli. One somatic cell type which is attractive for this purpose is the keratinocyte, because they are accesible from a simple skin biopsy specimen and can be propagated in culture, genetically modified, and autogously reimplanted.

We isolated mRNA from HIT-T15 cells, a pancreas tumoral cell line of hamster that express high quantities of insulin gene. Using specific oligonucleotides designed for the coding region of hamster insulin gene, a 400 bp product was obtained by RT-PCR, and then characterized by restriction analysis. The specific PCR product was cloned in the pGEM-T easy vector, and then subcloned in the pCI-neo mammalian expression vector. The transfection of the transgene in rat keratinocyte cells, using Lipofectamine®, was efficient and stable. The insulin gene expression studies are in progress and migth be an interesting approach to the gene therapy of the diabetes type I.
Financiated by the American Diabetes Association (ADA), USA.

EXPRESION DIFERENCIAL DE IL-8, IL-1b Y TNF-a EN MUCOSA ANTRAL DE NIÑOS INFECTADOS POR HELICOBACTER PYLORI (Differential expression of IL-8, IL-1b and TNF-a in antral mucosa of children infected with Helicobacter pylori). Godoy, A*. y Harris P.**. *Departamento de Genética Molecular y Microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas. **Departamento de Pediatría, Facultad de Medicina. Pontificia Universidad Católica de Chile. Socio Patrocinante:Dr.Alejandro Venegas E.

Helicobacter pylori (Hp), patógeno no invasor y colonizador de la mucosa antral, produce una respuesta inflamatoria inicial aguda seguida de una infección crónica que evoluciona hacia una gastritis superficial etiológicamente relacionada con ulceración gastroduodenal, adenocarcinoma gástrico y linfoma tipo MALT. Las citoquinas proinflamatorias como Interleuquinas(IL)-1b, IL-6, IL-8 y TNF-a, derivadas de macrófagos, son marcadores del grado de inflamación. Dado que la infección se adquiere tempranamente, el objetivo fue determinar los niveles de tales citoquinas en mucosa antral mediante ELISA con relación a la concentración de proteínas totales, corroborados a través de la presencia de mRNA provenientes de niños infectados con gastritis versus infectados con úlcera.

El 50% de los niños estaban infectados por Hp. Aquellos con gastritis presentan diferencias significativas con respecto a los controles en el nivel de IL-8, IL-1b y TNF-a (p<0,05). Los niños con úlcera duodenal, presentan niveles significativamente mayores de IL-8 e IL-1b que los niños con gastritis(p=0,01). Los mRNA de IL-8 e IL-1b detectados por RT-PCR, mostraron una tendencia similar a la encontrada para los niveles proteicos.

Estos hallazgos sugieren una alta actividad inflamatoria local que puede modular la persistencia de la inflamación crónica asociada a Hp.
Agradecimientos al proyecto FONDECYT #1000734

ECOLOGIA

EVOLUCION DE LA ENDOTERMIA: HEREDABILIDAD DE LA TEMPERATURA CORPORAL EN PHYLLOTIS DARWINI Y SU ROL COMO BLANCO DE LA SELECCION NATURAL. (Evolution of endothermy: heritability of body temperature in Phyllotis darwini and its role as target of natural selection) Nespolo, RF., LD Bacigalupe, F Bozinovic. Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile. Casilla 114-D, Santiago.

La endotermia, o la capacidad de mantener altas temperaturas corporales independientemente de las variaciones ambientales es de especial importancia en la evolución de los vertebrados. Un requisito fundamental para que exista respuesta evolutiva a la selección, es la existencia de varianza genética. Determinamos la proporción de la varianza fenotípica dada por varianza genética (H2) de la temperatura corporal en el roedor Phyllotis darwini. Se estimó H2 mediante medios hermanos y ANOVA anidado, que discrimina los componentes de varianza de hembras y machos. Se consideraron tres variantes de Tb: diurna (12 PM), nocturna (12AM) y luego de la exposición a 0ºC. Además, se estimó H2 en una serie de rasgos controles. Tanto para Tb diurna como nocturna, H2 fue significativamente distinta de cero, con valores estimados cercanos y superiores a 1, lo que sugiere una fuerte influencia de efectos no aditivos provenientes del componente de varianza de las hembras. Estos resultados permiten predecir una fuerte respuesta evolutiva a la selección natural si esta se presenta, permitiendo inferir que la temperatura corporal podría haber evolucionado como producto de la varianza genética en sí misma, sin necesidad de selección correlacionada.
Agradecimientos: FONDECYT 2000002 becas Conicyt(RFN) y DIPUC(LDB).

CONDUCTA Y FISIOLOGIA TERMICA DE TRES ESPECIES DE LIOLAEMUS DEL SALAR DE ATACAMA. (Behavior and thermal physiology of three Liolaemus species from the Atacama Salt-flat). Soto-Gamboa M., Labra A. y Bozinovic F. Depto. Ecología, Fac. Cs. Biológicas, Universidad Católica de Chile. Casilla 114-D. msoto@genes.bio.puc.cl

El ambiente térmico es el factor más determinante de la temperatura corporal (Tb) de lagartos, los cuales han desarrollado mecanismos conductuales (uso diferencial de substratos) y fisiológicos (ajustes de tasas de calentamiento (Tc) y enfriamiento (Te), y temperatura crítica mínima (Tcmin))para regular y mantener su Tb constante. El objetivo de este trabajo fue determinar la importancia de cada uno de los mecanismos de termoregulación en tres especies de Liolaemus, asociadas al Salar de Atacama: L. nigrovidris nigroroceus y L. constanzae ubicadas en los bordes del salar, y dos poblaciones de L. fabiani (Piular y Punta-Brava), ubicadas dentro del salar y asociadas a sistemas acuáticos. Se evaluó: patrones de actividad diarios, temperatura operativa (To), y las variables fisiológicas (Tc, Te, Tcmin y Tb). Liolaemus n. nigroroceus y L. constanzae presentaron un patrón de actividad diario bimodal, correlacionado con las restricciones térmicas ambientales. Liolaemus fabiani presentó una actividad unimodal, explicada por el uso diferencial de substratos (incluyendo agua como fuente de disipación de calor). Las características fisiológicas de L. n. nigroroceus y L. constanzae son similares, mientras que las poblaciones de L. fabiani presentan diferencias asociadas a To. Se discuten las implicancias de la variación en el uso de los distintos mecanismos termoregulatorios. FONDECYT 3990021 (AL)y 1980959 (FB).

EFECTO DE LA ACLIMATACION SALINA SOBRE LA FISIOLOGÍA OSMOREGULATORIA EN CINCLODES (PASERIFORMES: FURNARIDAE) (Saline acclimation effect on the osmoregulatory physiology in Cinclodes (Passerine: Furnaridae). Rivera, A. y Sabat, P. Departamento de Ciencias Ecológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

Estudios de fisiología osmoregulatoria realizados en aves del género Cinclodes, han revelado la existencia de diferencias interespecíficas relacionadas con la disponibilidad hídrica del hábitat. Cinclodes patagonicus y Cinclodes oustaleti, son aves que presentan migración estacional entre hábitat marinos y límnicos, por lo que se ven enfrentadas a una alta variación en la disponibilidad hídrica e ingesta de sales. En este trabajo se estudió el grado de plasticidad fenotípica de los caracteres osmoregulatorios y su relación con la variación poblacional observada.

Se aclimataron individuos de ambas especies a dos niveles de carga salina (800 y menos de 50 mM de NaCl) por 15 días. Sólo C. oustaleti presentó un aumento en la osmolaridad del plasma cuando fue sometido a una ingesta crónica de sales. La exposición aguda a soluciones hipertónicas tuvo como efecto un aumento sobre el hematocrito en ambas especies. Además, Cinclodes patagonicus aumentó significativamente su capacidad de concentración de orina cuando fue aclimatado a una alta carga salina. Aun cuando la morfología renal no presentó diferencias significativas entre tratamientos, ésta si presentó diferencias de acuerdo a la disponibilidad hídrica del hábitat de procedencia. Se discute el efecto de la temporalidad de los procesos de aclimatación sobre la plasticidad fisiológica en función de las características ecológicas en Cinclodes.

INFLUENCIA DEL RIESGO DE DEPREDACION SOBRE LA VIDA EN GRUPO DE OCTODON DEGUS. (Influence of predatory risk on group-living of Octodon degus). Ebensperger, L.A.& Wallem, P.K. Departamento de Ecología, Universidad Católica de Chile, Santiago, Chile.

Diversas especies de roedores son sociales de tal modo que dos o más adultos comparten un sistema de madrigueras y un territorio. Se ha propuesto que roedores en grupo son más eficientes para detectar depredadores comparado con individuos solitarios. Examinamos en terreno esta hipótesis para el caso del roedor Octodon degus (degú). Para ello, comparamos el tamaño de grupo de degús en parches abiertos (con alto riesgo) y bajo arbustos (con bajo riesgo), así como el tamaño de grupo de degús adultos y juveniles. Finalmente, determinamos experimentalmente la distancia de reacción de degús en grupos de diferente tamaño ante depredadores humanos simulados. Encontramos que el tamaño de grupo fue mayor cuando los degús se encontraban en parches abiertos comparado con degús en parches bajo arbustos. De igual modo, degús juveniles tendieron a formar grupos más numerosos comparado con individuos adultos. Degús en grupos de mayor tamaño detectaron la presencia de depredadores humanos a una mayor distancia comparado con degús en grupos más pequeños o solitarios. Estos resultados sugieren que un beneficio de la vida en grupo de Octodon degus es disminuir su riesgo de depredación.
Financiado por proyecto Fondecyt de Post-doctorado No. 3970028.

REQUERIMIENTOS PROTEICOS DEL PICAFLOR SEPHANOIDES SEPHANIODES. (Protein requirements in the hummingbird Sephanoides sephaniodes). López-Calleja M.V. y Fernández Ma. J. Departamento de Ecología, Universidad Católica de Chile, Santiago.

La mantención de un balance positivo de energía y nutrientes es crítico para la sobrevivencia y éxito reproductivo de los organismos. Cuando energía y nutrientes no se obtienen del mismo recurso, surge un compromiso asociado a su obtención que se refleja en la mantención de un balance total positivo. Los picaflores son especialistas en el consumo de néctar, alimento rico en energía y pobre en nutrientes. En consecuencia los picaflores usan como fuente proteica a los artrópodos para mantener el balance nutricional. Resulta relevante determinar los requerimientos mínimos proteicos (RMP) y los efectos conductuales, digestivos y fisiológicos producidos por deficiencias de nitrógeno a corto y mediano plazo. Para caracterizar los RMP, se formaron 4 grupos mantenidos por 10 días con dietas artificiales isocalóricas con diferentes concentraciones proteicas, determinando variación del peso y consumo, asimilación de materia seca, balance de nitrógeno y energía. Los individuos de los grupos extremos se sacrificaron para determinar características morfológicas. S. sephaniodes presenta desbalance proteico y perdida de peso con dietas que contienen un valor inferior a 1,5% de proteínas. El 80% de los individuos mantenidos sin proteínas pueden sobrevivir al menos por 10 dIas, aunque con desbalance de masas. Se detectan cambios en sistema digestivo y masa muscular. Se discute la importancia de bajos RMP y la importancia de la mantención del balance energético en estas aves.
Financiado Proyecto Fondecyt 3000047.

HABITOS ALIMENTARIOS DE Lagidium viscacia y Abrocoma cinerea (Food habits of Lagidium viscacia and Abrocoma cinerea) Cortés, A. y Miranda, E., Departamento de Biología, Universidad de La Serena.

Lagidium viscacia y Abrocoma cinerea, habitan en ambientes altoandinos, donde los recursos alimentarios son escasos. Dada su condición de sintopía, postulamos que estos roedores debieran seleccionar diferencialmente los recursos alimentarios a fin de evitar competencia por el nicho trófico. Para probar la hipótesis, evaluamos los hábitos alimentarios (invierno- verano). Los resultados indican: 1) L. viscacia presentó mayor amplitud de nicho trófico, consumiendo 10 ítemes (invierno) y 7 en verano (12 especies totales). El mayor consumo fue Stipa bomanii (invierno = 20,9%, verano = 30,1%). Otros ítemes consumidos (invierno) fueron Nicotiana longibracteata (12,1%) y Parastrephia quadrangularis (9,4%) y en verano, Festuca ortophylla (19,9%). A. cinerea consumió 4 ítemes en invierno y 5 en verano, Baccharis tola (invierno = 73,3%, verano = 33,7%), Lupinus oreophilus (invierno = 11,9%, verano = 24,0%), Adesmia horrida (invierno = 3,6%, verano = 22,5%) y P. quadrangularis (invierno = 0,4%, verano = 2,3%). 2) L. viscacia, en invierno seleccionó N. longibracteata, Calceolaria stellarifolia, P. quadrangularis y S. bomanii; en verano F. orthophylla, S. bomanii y escasamente C. stellarifolia. A. cinerea, en invierno seleccionó L. oreophilus y B. tola; en verano A. horrida y E. rupestris; mientras que P. quadrangularis, mostró rechazo. 3) Ambas especies mostraron escasa sobreposición dietaria.

En síntesis, estas especies son herbívoras, siendo L. viscacia, más generalista, pero ambas muestran escasa competencia por el nicho trófico.
Financiado: FONDECYT 1981122 y 5960017.

¿ES LA CONDUCTA ANTIDEPREDADOR AFECTADA POR EL RIESGO DE QUIEBRE ENERGÉTICO? EL CASO DE Acyrthosiphum pisum. (Is the antidepredator behaviour affected by risk of energetic breakdown?. the case of Acyrthosiphum pisum). C.A. Villagra & C.C. Ramírez. Laboratorio de Química Ecológica, Departamento de Ciencias ecológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

En la relación depredador-presa, las conductas antidepredador suelen reducir el éxito de depredación. Sin embargo, estas respuestas pueden verse afectadas por el estado fisiológico de la presa, esperándose que ante situaciones de estrés energético las conductas antidepredador pierdan importancia. Entre las respuestas antidepredadores en áfidos, las conductas de salto ("dropping") y de pateo ("kicking") se encuentran entre las más efectivas. En este trabajo se compara la respuesta antidepredación del áfido Acyrthosiphum pisum frente al parasitoide Aphidius ervi,. después de diferentes periodos de ayuno. Se emplearon parasitoides emergidos a partir de "momias" (áfidos portadores de parasitoide) recolectadas en campos de alfalfa del INIA-Santiago y áfidos provenientes de colonias mantenidas en laboratorio. Los áfidos ápteros adultos fueron sometidos a periodos de ayuno de 0, 24 y 48 horas antes de ser trasladados a su planta hospedera, Medicago sativa (alfalfa). Se filmaron las respuestas de los áfidos frente a los parasitoides. Al comparar las conductas de salto de los áfidos sometidos a ayuno con áfidos alimentados normalmente se encontró una mayor frecuencia de salto en estos últimos. Sin embargo, la respuesta de pateo ante el ataque del parasitoide no fue diferente entre los grupos. Estos resultados sugieren que existe un compromiso entre algunas conducta antidepredador y el estrés energético, en el cual los insectos priorizan la compensación energética.
Agradecimientos: Cátedra Presidencial en Ciencias a H.M. Niemeyer y Núcleo Milenio "Centro de Estudios Avanzados en Ecología y de Investigación en Biodiversidad" P099-103F ICM.

EFECTO DE LA TEMPERATURA EN EL MOVIMIENTO OPERCULAR Y NIVELES DE ACTIVIDAD DE Graus nigra (PISCES, ACTINOPTERYGII): POSIBLES CONSECUENCIAS EN LA DISTRIBUCION ESPACIAL (Effects of temperature on opercular movement and activity levels in Graus nigra (Pisces, Actinopterygii): Possible consequences on spatial distribution) Hernández, C.; P. Neill; J. Pulgar & F.P. Ojeda. Depto. de Ecología, P. Universidad Católica de Chile. Casilla 114-D.

La temperatura podría tener efectos importantes en la distribución de peces intermareales. En Chile para Graus nigra, una de las especies más abundantes, se señalan variaciones ontogéneticas en la ocupación de microhábitat térmicos. Con el objetivo de determinar si la temperatura ambiente es una de las posibles causas que explica el patrón de distribución observado en la naturaleza, nosotros comparamos dos respuestas conductuales número de movimientos operculares (como medida indirecta del consumo de oxígeno) y niveles de actividad en individuos de G. nigra durante un periodo de aumento de temperatura.

Se trabajó con 37 individuos (entre 11 y 21 cm de longitud total) de la localidad de Las Cruces mantenidos en condiciones de laboratorio. Los resultados muestran que a altas temperaturas los peces de mayor tamaño son menos activos y aumentan en menor grado la frecuencia opercular. Los individuos pequeños ocuparían un hábitat subóptimo, aunque estarían aclimatizados a vivir en altas fluctuaciones de temperatura. Se discuten las implicancias ecofisiológicas de los resultados y el papel de las interacciones biológicas como una hipótesis alternativa a los patrones de distribución observados
Proyecto FONDECYT 1990154 y FONDAP O Y BM3

BIOLOGIA CELULAR

TRANSPORTE DE GLUCOSA Y VITAMINA C EN CELULAS TUMORALES DE PLEXOS COROIDEOS HUMANOS. (Glucose and vitamin C uptake in human tumoral choroid plexus cells). García, MA., Millán, C., Nualart, F. Laboratorio de Neurobiología, Depto. de Histología y Embriología, Depto. Biología Molecular, Universidad de Concepción.

Los plexos coroideos se localizan en la región rostral de los ventrículos cerebrales formando la barrera sangre-líquido cefalorraquídeo (LCR). A través de la barrera se incorporan cantidades importantes de glucosa y vitamina C al cerebro, función que es realizada por transportadores de glucosa (GLUTs) y transportadores de vitamina C reducida/sodio (SVCT2), respectivamente. Las células de los plexos coroideos se transforman neoplásicamente dando origen a los tumores denominados papilomas de plexos coroideos, en los cuales se ha demostrado que las células mantienen la formación de barrera, sin embargo, no existen estudios de la expresión y localización de transportadores GLUT y SVCT2. Estudios in situ e in vitro de papilomas de plexos coroideos permitieron obtener los siguientes resultados: 1) Utilizando inmunocitoquímica e hibridización in situ se determinó que las células tumorales mantienen la expresión de la isoforma GLUT1, sin embargo, se observó pérdida de la localización diferencial de este transportador en la membrana basolateral de las células. La expresión de GLUT1 fue confirmada por estudios cinéticos de captación de glucosa y por RT-PCR. 2) Ensayos de incorporación de la forma reducida de la vitamina C, destinados a detectar la presencia del transportador SVCT2, permitieron demostrar que las células tumorales no captan la vitamina C reducida. 3) Considerando que los plexos coroideos almacenan intracelularmente la vitamina C, analizamos la captación de la forma oxidada de esta vitamina, el ácido dehidroascórbico (DHA), proceso que ocurre a través de GLUTs. Los datos cinéticos confirmaron la incorporación del DHA a través de GLUT1. 4) Finalmente se obtuvieron evidencias experimentales iniciales que explicarían la formación de DHA y su posterior captación, por las células tumorales, a través de un efecto "bystander".Proy. FONDECYT 1980130

INHIBICION DEL CATABOLISMO PEROXISOMAL DE EICOSANOIDES : ¿UN NUEVO MECANISMO DE ACTIVACION DE PPARa POR PROLIFERADORES PEROXISOMALES?. (Inhibition of the eicosanoids peroxisomal catabolism: A new mechanism for the PPAR a activation in response to peroxisomal proliferators?). Gatica A. , Bronfman M. Unidad de Bioquímica Celular y Genética, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile, Chile.

Los proliferadores peroxisomales (PPs) son un grupo de compuestos cancerígenos no genotóxicos que en roedores inducen hipolipidemia, proliferación peroxisomal y hepatocarcinogénesis. Entre los PPs se encuentran drogas hipolipidemiantes, pesticidas y herbicidas. Los efectos de los PPs dependen de la activación de un receptor nuclear denominado PPARa (peroxisomal proliferator activated receptor a), el cual regula el metabolismo lipídico en el hígado y participa en los procesos de proliferación y diferenciación de distintos tipos de células. El mecanismo de activación de PPARa en respuesta a PPs no esta claro, pues si bien todos los PPs activan al receptor no todos se unen a él. Recientemente se ha demostrado que la inhibición del catabolismo de activadores endógenos de PPARa tales como acidos grasos y eicosanoides puede inducir los mismos efectos de los PPs, lo que sugiere que estos compuestos podrían participar en la activación de PPARa en respuesta a PPs. En estudios anteriores hemos demostrado que los PPs son rapidamente metabolizados a PP-CoA y si bien estos compuestos no activan a PPARa, el efecto de ellos sobre el metabolismo de activadores endógenos del receptor no se conoce. En este estudio, analizamos el efecto de distintos PPs y PP-CoAs sobre las vías de catabolismo de activadores endógenos de PPARa y el efecto de inhibidores de las vías de biosíntesis de activadores endógenos de PPARa sobre la proliferación peroxisomal inducida por PPs en cultivos primarios de hepatocitos de rata. Los resultados obtenidos sugieren que los eicosanoides producidos por la vía de las lipoxigenasas participarían en la proliferación peroxisomal inducida por PPs y que la inhibición del catabolismo de estos activadores por PP-CoAs podría mediar la activación de PPARa.
Agradecimientos: Proyectos Fondecyt 2000072 (A.G.); FONDAP 13980001 y Milenio P99-007-F (M.B.)

INTERACCION DE THY-1 CON LA INTEGRINA aVb3 EN ASTROCITOS PROMUEVE FORMACION DE ADHESIONES FOCALES, ADHESION Y EXPANSION CELULAR (Thy-1 binding to aVb3 integrin on astrocytes promotes focal adhesion formation, cell attachment and spreading). L. Leyton#, P. Schneider*, A. F.G. Quest#* and C. Bron*. *The Institute of Biochemistry, University of Lausanne, Switzerland. Supported by the Swiss National Foundation. LL supported by FEBS(Europe), DID and Fundación Andes (Chile). #ICBM-Faculty of Medicine, University of Chile. Independencia 1027, Santiago. Phone/FAX: 738-2015. E-mail: lleyton@machi.med.uchile.cl

Thy-1 is an abundantly expressed glycoprotein in mammalian neurons. Despite such prevalence, the role of Thy-1 is still unclear, since a ligand has not been identified. We recently presented evidence showing that integrin b3 serves as a ligand/receptor for Thy-1. Astrocytes attached to and spread on plates coated with Thy-1-Fc fusion protein in the presence of Mn2+, but not with Ca2+/ Mg2+. Likewise, astrocyte attached to vitronectin, fibrinogen and denaturated collagen, but not fibronectin, in a Mn2+-dependent manner suggesting that Thy-1 binds to the integrin avb3. Additionally, incubation of astrocytes with Thy-1-Fc fusion proteins enhanced phosphorylation on tyrosine at the tip of stroos fibers, indicating that Thy-1/avb3 interaction triggers signaling events in astrocytes. Furthermore, Thy-1 induced recruitment of paxillin, vinculin and focal adhesion kinase (FAK) to focal contacts and tyrosine phosphorylation was increased in proteins such as p130Cas and FAK. In conclusion, Thy-1 binding to avb3 integrin on astrocytes triggers tyrosine phosphorylation of focal adhesion proteins in astrocytes, thereby promoting focal adhesion formation, cell attachment and spreading.

EFECTO DEL ACIDO RETINOICO Y DE TAMOXIFENO SOBRE LA COMUNICACION INTERCELULAR POR UNIONES EN HENDIDURA EN CELULAS DE ADENOCARCINOMA MAMARIO HUMANO. (Retinoic acid and tamoxifen effect on gap junctional intercellular communication in human adenocarcinoma mammary cells). Sáez, C.G.; Montoya, M.I.; Alvarez, M. Programa de Cáncer. Depto. Hematología-Oncología. P. Universidad Católica de Chile. Patrocinio: Monica Imarai.

Investigamos el efecto de la combinación de ácido retinoico y tamoxifeno (drogas quimiopreventivas) sobre la comunicación intercelular (CI) por uniones en hendidura (Uhs), en células de adenocarcinoma mamario humano (MCF-7), como un posible mecanismo que contribuiría con la reversión del fenotipo tumoral. Las células, previamente sincronizadas, se trataron con AR 10-6 M y tamoxifeno 1 µM y se analizaron, a intervalos de 2, 6, 9, 12, 24, 48-120 horas, para: CI por Uhs, mediante microinyección con Amarillo de Lucifer o "scrape loading"; inmuno-distribución subcelular de conexinas; proliferación celular por incorporación de Bromo-deoxy-uridina y muerte celular por apoptosis por tinción con Ioduro de propidio. El máximo aumento de la CI por Uhs (50% +/- 6%) se observó a las 9 horas de tratamiento, lo que se correlacionó con la redistribución conexina 26 y 43 hacia la membrana celular. Las drogas producen una disminución en la proliferación celular (a las 24 h) y un retardo en la muerte celular comparada con las controles. Los resultados obtenidos sugieren una correlación entre el aumento de CI por Uhs debido al tratamiento con AR y Tx y una importante alteración en la conducta celular de las células MCF-7. Fondecyt 1990120.

LOCALIZACION SUBCELULAR DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA PRODUCTORA DE ACIDO 10-HIDROXIESTEARICO EN HEPATOCITOS DE RATA. (Subcellular localization of the production of 10-hydroxystearic acid by enzymatic activity in rat hepatocytes). Meneses, A.M, Bronfman M. Unidad de Bioquímica Celular y Genética, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile.

La exposición de roedores a un grupo de compuestos cancerígenos no genotóxicos denominados proliferadores peroxisomales (como drogas hipolipidemiantes y herbicidas, entre otros) induce dos tipos de respuesta. La respuesta temprana involucra un desbalance en el metabolismo lipídico y la respuesta tardía corresponde al desarrollo de tumores hepáticos.

En estudios anteriores se observó que, el tratamiento durante 20 minutos de hepatocitos de rata con el proliferador peroxisomal ciprofibrato, causa la disminución en la concentración del ácido 10-hidroxiesteárico, ácido graso que ha sido descrito en bacterias y no en mamíferos.

Considerando que el ácido 10-hidroxiesteárico podría estar implicado en el mecanismo de acción de los proliferadores peroxisomales se realizó una reconstitución in vitro de su formación utilizando como sustrato el ácido oleico. Se utilizó fracción soluble y particulada provenientes de homogenizado de hepatocitos de rata conteniendo la actividad enzimática responsable de la formación de ácido 10-hidroxiesteárico. Se observó que la producción de dicho ácido graso ocurre en tiempos muy cortos (menos de 5 minutos).

Un análisis de fraccionamiento subcelular de hepatocitos de rata determinó que la actividad enzimática responsable de la producción del ácido graso en estudio se localiza principalmente en las fracciones S (enzimas y proteínas solubles) y P (microsomas y membrana plasmática). Su localizacióm subcelular y su especificidad de sustrato sugiere que podría tratarse de una lipoxigenasa.(Financiado por FONDECYT 1990155, FONDAP 13980001 y Milenio P99-007-F)

LA EDAD AFECTA LA EXPRESION Y TRANSLOCACION DEL FACTOR TRANSCRIPCIONAL NFkB DURANTE RESPUESTA DE FASE AGUDA HEPATICA. (Aging affects of the transcription factor NFkB expression and translocation during hepatic acute phase response). *Cornejo P., *Colombo A.*Instituto de Ciencias Biomédicas (ICBM), Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Santiago, Chile. Patrocinio: Dra. Virginia Fernández

La respuesta de fase aguda (APR) es un proceso fisiológico primario de defensa, que participa en la respuesta inflamatoria y favorece el restablecimiento de la homeostasis. En nuestro laboratorio, hemos evidenciado durante la senescencia una expresion diferencial de genes que regulan la APR como factores transcripcionales (FT). Uno de los principales FT implicado en ésta respuesta es NFkB, para determinar su participación en la alteración de la APR en la vejez, utilizamos ratas Brown Norway senescentes y jóvenes (29 y 4 meses) tratadas con LPS por tiempos cortos. Hemos analizado la expresión proteica y localización de NFkB (p65/p50) y de kIB (IkkBa e IkBb). El nivel nuclear de p50 se observa claramente disminuído, mientras que p65 muestra una leve disminución en las ratas viejas, comparado con ratas jóvenes. En el caso de IkB, ambas isoformas presentan un aumento basal en el citoplasma de animales viejos, lo que lleva a un retardo en la cinética de degradación de estas proteínas en el grupo senescente. El estado de fosforilación de IkBa presenta una disminución en las ratas viejas. Estas observaciones pueden explicar en parte, el descenso en la activación de NFkB durante la senescencia, lo que podría afectar la activación transcripcional de genes de fase aguda.
Agradecimientos: FEBA, Lankenau Institute for Medical Research.

REGIONALIZACION DEL CANAL MAXI-K EN CELULAS EPITELIALES POLARIZADAS. (Regionalization of the Maxi-K channel in polarized epithelial cells) Bravo-Zehnder M., Otero,C., Orio,P., Latorre R., Toro L. Depto. de Inmunología Clínica y Reumatología, Fac. de Medicina, P. Universidad Católica de Chile; CES; Departments of Anesthesiology, Physiology and Molecular and Medical Pharmacology and Brain Research Institute, University of California, USA.

Las células epiteliales cumplen funciones vectoriales de secreción y transporte y forman barreras entre compartimentos externos e internos del organismo. Expresan un fenotipo polarizado cuya característica principal es una superficie celular dividida en un dominio apical y otro basolateral, morfológica, bioquímica y funcionalmente distintos, separados por uniones estrechas.

El canal de potasio sensible a voltaje y a Calcio, Maxi-K se ha detectado electrofisiológicamente tanto en el polo apical como basolateral, dependiendo del epitelio analizado. En este trabajo estudiamos aspectos desconocidos de su segregación en células derivadas de epitelio renal. En células MDCK transfectadas se logró expresar la subunidad a del Maxi-K, hSlo, nativa y una variedad de mutantes. Las evidencias indican que posee información para segregarse apicalmente en estas células de manera independiente de N-glicosilación. El mecanismo podría involucrar una asociación con balsas lipídicas (rafts). Además, en su región carboxilo terminal parece contener información enmascarada para destinación basolateral. Es posible que esta señal sea funcional en otros tipos celulares. Financiado en parte por proyectos: (FONDECYT 1980974, FONDAP 13980001, y Cátedra Presidencial en Ciencias).

El METOTREXATO INHIBE LA ACTIVACION DE NFkB/Rel EN CELULAS JURKAT (Methotrexate inhibits NFkB/Rel activation in Jurkat cells). Díaz, L. y Metz, C. Dpto. Inmunología Clínica y Reumatología. Fac. Medicina, P. Universidad Católica de Chile.

Los factores de transcripción NFkB/Rel responden a las mismas señales extracelulares que gatillan la activación y proliferación de linfocitos T, regulando la expresión de numerosos genes involucrados en la respuesta inmune y en procesos inflamatorios. Normalmente se encuentran inactivos y retenidos en el citosol por su interacción con los inhibidores IkB que empantallan su señal de entrada al núcleo. Los estímulos que promueven la translocación de los factores NFkB/Rel al núcleo involucran fosforilación y subsecuente degradación de las proteínas IkB.

El Metotrexato (aminopterina) es una droga inmunosupresora y antiinflamatoria utilizada habitualmente en el tratamiento de la Artritis Reumatoidea. El mecanismo por el cual ejerce su actividad antiinflamatoria es desconocido. En este trabajo presentamos evidencias de que el Metotrexato es capaz de inhibir la degradación de IkB-a durante la activación en células Jurkat, una línea celular derivada de linfocitos T humanos. Además en ensayos de retardo en gel se observa un disminución en la entrada de NFkB/Rel al núcleo. Estos resultados constituyen la primera evidencia de que la acción antiinflamatoria del metotrexato podría involucrar una inhibición del sistema NFkB/Rel.
(Financiado en parte por Fondecyt #1981026 y FONDAP 13980001).

GENETICA

LOCALIZACION NUCLEAR DE DOMINIOS CROMOSOMICOS EN CELULAS SOMATICAS DE Mus domesticus 2n=40 (Nuclear localization of chromosomal domains in somatic cells from M. domesticus 2n=40). Cerda MC, Berríos S, Fernández-Donoso R. Genética Humana, ICBM, Facultad de Medicina, U. de Chile.

Se estudió la distribución de los cromosomas 5-10-16-X y de los telómeros en el espacio nuclear de células renales de machos Mus domesticus 2n=40, utilizando FISH para el "painting" diferencial de cromosomas y microscopía confocal para la detección nuclear de señales teloméricas. Los cromosomas estudiados ocupaban territorios discretos en el espacio nuclear, predominando las asociaciones entre cromosomas heterólogos que se organizaban en posiciones relativamente estables, en las distintas células procedentes de diferentes individuos. Las señales teloméricas se observaron en diferentes planos focales y distribuídas en la periferia nuclear, en agregados de dos o mas telómeros. El análisis conjunto de la distribución nuclear de cromosomas y telómeros, confirma nuestra proposición acerca de la disposición y orígen de las asociaciones entre comosomas, y de que los cromosomas homólogos estarían separados entre sí en la interfase celular (Biology of the Cell 91:11-65, 1999). No obstante lo anterior, nuestros datos no son concluyentes respecto de las proposiciones sobre la existencia de rondas de asociación, entre cromosomas de origen exclusivamente paterno o materno, configurando durante la interfase celular una separación física entre ambos genomas (Chromosoma 107: 330-338, 1998). No podemos excluir sin embargo, que tal patrón de distribución y asociaciones intercromosómicas se produzca en tipos celulares específicos.
EDID99/003, FONDECYT 1000/689.

APAREAMIENTO DE LOS CROMOSOMAS SEXUALES DE MARSUPIALES DURANTE LA PRIMERA PROFASE MEIOTICA. (Pairing of marsupial sex chromosomes during first meiotic prophase). J Page1, S Berríos1, R Fernández-Donoso1, JA Suja2 y JS Rufas2. 1 ICBM. Universidad de Chile. 2 Universidad Autónoma de Madrid. Patrocinio: R Fernández-D.

Los cromosomas sexuales de marsupiales tienen un comportamiento peculiar durante la profase meiótica. Los ejes de estos cromosomas se diferencian tardíamente respecto de los autosomas y su asociación no está mediada por la formación de un complejo sinaptonémico (CS) como ocurre en la región pseudoautosómica de los cromosomas sexuales de los mamíferos euterios, sino por una estructura exclusiva de marsupiales denominada placa densa (PD). Con el objetivo de caracterizar la secuencia de aproximación y apareamiento de los cromosomas sexuales, se realizó un estudio inmunocitológico en espermatocitos de los marsupiales Thylamys elegans y Dromiciops gliroides, utilizando anticuerpos contra las proteínas SCP1 y SCP3 del elemento central y lateral del CS respectivamente, y un anticuerpo contra fosfoproteínas (MPM-2). Los resultados muestran que la proteína SCP3 se localiza sobre los ejes de los cromosomas sexuales y la PD, y que éste u otros de sus componentes, están altamente fosforilados. La señal de estos anticuerpos va desapareciendo de los ejes de los cromosomas X e Y en la medida en que progresivamente aumenta en la PD. El anticuerpo contra SCP1 no produce marcaje sobre los ejes de cromosomas sexuales. Los datos apoyan la ausencia de CS y la existencia de interdependencia entre los componentes de la PD y los ejes cromosómicos.
FONDECYT #2000008; U. Chile PG/24/99; AECI; EDID 99/003.

DINAMICA DEL BIVALENTE XY EN ESPERMATOCITOS DE HETEROCIGOTOS ROBERTSONIANOS DE Mus domesticus. (Sex chromosomes dynamic in spermatocytes of Mus domesticus Robertsonian heterocygotes.). R Fernández-Donoso1, S Berríos1, J Page1, C Cerda1, C Redi2, JA Suja3 y J Sánchez-Rufas3. 1- ICBM Universidad de Chile; 2- Universidad de Pavía; 3- Universidad Autónoma de Madrid.

En el paquiteno de espermatocitos de Mus domesticus heterocigotos para cromosomas Robertsonianos (Rb), los sectores proximales no apareantes de los trivalentes que se forman, aparecen frecuentemente asociados al extremo proximal del cromosoma X del bivalente XY. Estas asociaciones heterólogas, alteran la funcionalidad genómica que regula el desarrollo normal de la meiosis, contribuyendo a la esterilidad o semi-esterilidad de los individuos portadores. No se conoce cual es él o los mecanismos que inducirían estas asociaciones. Sobre la base de observaciones de la dinámica del bivalente XY y de sus asociaciones con trivalentes y tetravalentes, en espermatocitos de Mus domesticus doble heterocigotos (11:16)(16:17)2n=38 y en híbridos F1 de M. domesticus x M. pochiavinus 2n=33 (por medio de microesparcidos para ME, inmunocitoquímica con anticuerpos CREST anticentrómero y anti SCP3, y FISH), hemos postulado que ellas surgirían tempranamente y en un estrecho espacio de la periferia del núcleo mediadas por la envoltura nuclear (bouquet), con la activa participación y competencia por apareamiento de regiones centroméricas heterólogas. La conjunción espacio-temporal de estos diversos factores, permitiría explicar también la variabilidad observada en el comportamiento de los extremos no apareantes de los trivalentes y del bivalente XY entre diferentes espermatocitos.
EDID 99/003; FONDECYT 1000/689 y 7000/689; AECI.-

ESTUDIO PRELIMINAR DE MUTACIONES EN LOS GENES BRCA1 Y BRCA2 EN 382 MUJERES CHILENAS SANAS CON ANTECEDENTES FAMILIARES DE CANCER DE MAMA (Preliminary study of BRCA1 and BRCA2 mutations in 382 chilean healthy women with family history of breast cancer) Ampuero, S1., Jara, L.2, Seccia L1 y Ojeda JM1. Prog. de Virología1 y Genética Humana2, ICBM, Fac. Medicina, Univ. de Chile.

El cáncer de mama presenta la tercera tasa de mortalidad. En Chile ha aumentado de 9.5 en 1985 a 12.8/100,000 mujeres en 1995. Un gran desafío de la investigación clínica actual es la identificación de modalidades de prevención para reducir la morbilidad y mortalidad de este cáncer, siendo la edad, factores hormonales e historia familiar (predisposición genética) los principales factores de riesgo. En los genes BRCA1 y BRCA2, considerados genes mayores de susceptibilidad en este cáncer, se han descrito 664 mutaciones asociadas a enfermedad, aunque sólo algunas se asocian con susceptibilidad. El objetivo de este trabajo es aplicar un programa de screening de vigilancia del cáncer a 382 mujeres sanas con 2 parientes afectados realizando mamografía anual durante 5 años y estudio genético. En la etapa inicial se han estudiado las mutaciones 185delAG (BRCA1), 6174delT (BRCA2) mediante PCR sitio específico y se encuentra en desarrollo la determinación de la mutación 5382insC. La frecuencia obtenida para 185delAG fue de 0,26% (1/382), mientras que, la mutación 6174delT no fue encontrada en este grupo de mujeres. La frecuencia de 185delAG resulta llamativa, pues ella no había sido detectada en estudios previos en mujeres chilenas con cáncer de mama.
Financiamiento: CONAC

ESTRUCTURA GENETICA DEL AFIDO SITOBION AVENAE (F.) USANDO MICROSATELITES. (Population genetic structure of the aphid Sitobion avenae (F.) using microsatellite markers). Figueroa, C.C.1, y Simon, J.C.2 y Niemeyer, H.M.1 1Laboratorio de Química Ecológica, Facultad de Ciencias, U. de Chile. 2Laboratoire de Zoologie, INRA, Le Rheu, Francia.

Los áfidos son insectos fitófagos ubicuos que pueden constituir plagas dada su alta tasa de reproducción, consecuencia de un ciclo vital que alterna reproducción sexual y partenogénesis. Una de las especies más estudiadas es Sitobion avenae, la que ha sido informada mostrando una fuerte y no aleatoria estructura basada en la planta hospedera. Dado que aparentemente los áfidos de los cereales en Chile se reproducen sólo por partenogénesis, produciendo normalmente linajes de individuos genéticamente idénticos (clones), estos representan un atractivo modelo de estudio genético-poblacional. Con el fin de estudiar la diversidad y estructura genética de las poblaciones de S. avenae en una gradiente latitudinal, se aplicaron marcadores moleculares del tipo microsatélites amplificados usando DNA de áfidos colectados sobre cultivos de cereales (trigo y avena) y sobre gramíneas silvestres (avenilla, cebadilla, pasto ovillo). Para investigar la existencia de una dinámica temporal, las colectas se realizaron en años consecutivos desde 1997 a 2000. Resultados preliminares usando seis loci de microsatélites, muestran una alta heterozigosidad y una baja diversidad genotípica. Ningún genotipo especializado fue detectado, mientras tres genotipos generalistas y mayoritarios, también comunes en Francia, fueron encontrados sin relación con su hospedero o zona geográfica. No se observaron diferencias en las frecuencias génicas ni genotípicas entre plantas hospederas. Estos resultados probablemente sean consecuencia de un evento fundacional reciente seguido de reproducción asexual. Diferencias en la composición de genotipos minoritarios entre años sucesivos fueron observadas, pero manteniéndose aquellos generalistas. La aparición/desaparición de genotipos es discutida en términos de las plantas hospederas.
Agradecimientos: Proyecto para estudiantes de doctorado Fondecyt 2000060 otorgado a C.C.F, Cátedra Presidencial en Ciencias a H.M.N, y Proyecto ECOS-CONICYT C96B04.

BUSQUEDA DEL LOCUS DE LA ACROMATOPSIA COMPLETA EN UNA POBLACION CON ALTA CONSANGUINIDAD (Search of the locus for Complete Achromatopsia in a population with high consanguinity), Santa María, L., Blanco, M., Alliende, M.A. y Rojas, C.V., Laboratorio de Biología Molecular y Citogenética, INTA, Universidad de Chile. (Patrocinio: Eliana Canelo)

La Acromatopsia Completa es una enfermedad autosómica recesiva caracterizada por ceguera total de colores, fotofobia, baja agudeza visual y ausencia de respuesta electroretinográfica de fotorreceptores conos. En distintas familias europeas se ha descrito ligamiento de la enfermedad con varias mutaciones puntuales en el gen CNGA3, que codifica la subunidad-a del canal catiónico activado por cGMP de conos. Asimismo, en una población del Pacífico Sur se determinó ligamiento con una mutación sin-sentido en el gen CNGB3, que codifica la subunidad-b del canal. En Chile existe una población aislada, con alta endogamia, que presenta una incidencia inusualmente alta (1/100) de la enfermedad. Mediante amplificación y secuenciación de los exones correspondientes de los genes CNGA3 y CNGB3, descartamos que alguna de las mutaciones descritas previamente esté presente en individuos afectados de esta población. Para investigar si estos individuos portan otras mutaciones en alguno de estos genes, realizamos estudios de ligamiento genético con marcadores polimórficos para los respectivos loci. No es posible descartar que en esta población la enfermedad sea causada por mutaciones en otros componentes de la cascada de fototransducción. Para resolver esto, investigamos el locus de la Acromatopsia Completa mediante mapeo de homocigosis en "pools" de DNA y ligamiento genético.
Proyecto DID2000

EL CARIOTIPO FUNDAMENTAL DE Rhodophiala Presl. Y LA LOCALIZACION DEL ORGANIZADOR NUCLEOLAR (The fundamental Karyotype of Rhodophiala Presl. and the position of nucleolar organizer region) Palma-Rojas C., J. Contreras y 1P. Jara - Seguel, Depto. de Biología, Universidad de La Serena.

Dentro de las Amaryllidaceae propias de Chile se aceptan como válidos, entre otros, los géneros Rhodophiala Presl. y Phycella Lindl. Con el objeto de aportar nuevos antecedentes que permitan mejorar la caracterización de estas entidades taxonómicas se describen y comparan los cariotipos de Rhodophiala phycelloides(R.ph.), Rhodophiala bagnoldi,(R.ba.) Rhodophiala advena(R.ad.) y Rhodophiala laeta(R.la). En R.ph. y R.ba. se determinó además la localización del organizador nucleolar. Los cromosomas se obtuvieron de meristemas radiculares pretratados con antimitótico y teñidos con Feulgen. En fotomicrografías los cromosomas se midieron y los valores de sus mediciones se presentan en un carioidiograma. Las zonas Ag-NOR+ se determinaron según Hizume(1980). R.ph., R.ba. y R.ad. comparten un mismo cariotipo 2n=18 con una constricción secundaria subtelomérica en el brazo largo del par 7. R.ph. y R.ba. presentan zonas Ag-NOR+ en el area de la contricción secundaria del par 7. R.la en cambio, posee un cariotipo 2n=16 distinto del compartido por las especies de Rhodophiala. Estos resultados permiten establecer que:

a) Rhodophiala Presl. se caracterizaría por presentar un cariotipo 2n=18, basicamente subtelocéntrico y el par 7 Ag-NOR+ y

b) Dado el conservantismo observado para el cariotipo de Rhodophiala, debería revisarse la posición taxonómica de Rhodophiala laeta ya que su cariotipo 2n=16 es más afín con el de varias especies de Phycella previamente descritas.
1Alumno Programa Magister en Ciencias Biológicas mención Ecología de Zonas Aridas, ULS.

ANALISIS DE ASOCIACION ENTRE LA FISURA LABIOPALATINA NO SINDROMICA (FLPNS) Y 3 MARCADORES LOCALIZADOS EN EL CROMOSOMA 4. (Asociation between nonsyndromic cleft lip/palate and 3 molecular markers located in chromosome 4) Paredes, M; Carreño, H; Sola, J; Suazo, J; Blanco, R. Laboratorio Génetica del desarrollo, Programa Genética Humana, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Patrocinio: Gladys Tapia

La FLPNS es una malformación congenita que afecta aproximadamente a 1/1000 nacidos vivos. El modo de herencia mas aceptado es el modelo oligogenico (varios genes mayores).

Se ha intentado ubicar a estos genes mayores con estudios de asociación y ligamiento, utilizando marcadores moleculares. Los genes mayores estarían en regiones cromosómicas llamadas "oro facial clefts" (OFC) localizados en los cromosomas 2,4,6,17 y 19.

Este trabajo analiza al gen candidato MSX1 (4p) y los microsatélites D4S192 y D4S175 (4q). Se obtuvo DNA de sangre periférica, amplificado por PCR, visualizado en geles de SDS-PAGE y teñidos con plata. El análisis estadístico fue ji-cuadrado-RV (razón de verosimilitud). Al comparar la frecuencia alelica de FLPNS versus controles, los resultados presentan diferencias significativas para el total de alelos de D4S192. Este análisis para MSX1 y D4S175 presentó resultados negativos. Se observaron diferencias significativas en los alelos 87 y 89 del microsatélite D4S192 y en los alelos 3 y 130 de los microsatélites MSX1 y D4S175 respectivamente.

Los resultados observados en D4S192 apoyan la presencia de un OFC alrededor de 4q25-q34. Por tanto, la expresión fenotípica de la FLPNS estaría involucrada con esta región cromosómica ubicada alrededor de D4S192. FONDECYT 1980708

NEUROCIENCIA

LA EXCITACION QUIMIOSENSORIAL CAROTIDEA INDUCIDA POR OXIDO NITRICO (NO) ES MEDIADA POR SU ACCION EN LA MITOCONDRIA. (Carotid chemosensory excitation induced by NO is mediated by its action on the mitochondria). Mosqueira, M., Iturriaga, R. Laboratorio de Neurobiología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.

En normoxia, los generadores de NO, NOC-9 y SNAP aumentan la frecuencia de descarga quimiosensorial (ƒx). Como el NO se une a grupos HEME, su efecto podría resultar del bloqueo reversible de la citocromo oxidasa aa3. Para probar esta hipotesis, estudiamos los efectos de un inhibidor (antimicina-A) y un desacoplador (FCCP) de la cadena transportadora de electrones y de un inhibidor de la fosforilación oxidativa (oligomicina) sobre los aumentos de ƒx inducidos por hipoxia, NaCN, nicotina y NO.

Perfundimos in vitro cuerpos carotídeos de gato con solución Tyrode (aire-CO2 5%, pH 7.40 a 38°C). La administración de oligomicina (25 µg), antimicina-A (10 µg) y la perfusión con FCCP (5 µM) redujeron en 70-80% los aumentos de ƒx inducidos por hipoxia, NaCN (10-100 µg) y SNAP (200-800 µg), y en 20-30% los incrementos de ƒx evocados por nicotina (10-100 µg). Durante el bloqueo del transporte de electrones a nivel del citocromo C con antimicina-A, la perfusión con el dador de electrones TMPD (17 mM en ascórbico 1 mM), restituyó las respuestas a la hipoxia, NaCN y SNAP.

Los resultados sugieren que el NO, al igual que el cianuro y la hipoxia, producirían excitación quimiosensorial actuando sobre la citocromo oxidasa aa3.
Financiamiento FONDECTY 1980965.

LA ACELERACION DEL TRANSPORTE OVULAR INDUCIDA POR EL ESTRADIOL REQUIERE ACTIVACION DE PROTEINA QUINASA A EN EL OVIDUCTO DE LA RATA. (Estradiol-induced ovum transport acceleration requires activation of protein kinase A in the rat oviduct). Orihuela PA, Parada A and Croxatto HB. Unidad de Reproducción y Desarrollo, Facultad de Ciencias Biológicas, PUC.

La administración de estradiol (E2) acelera el transporte de ovocitos por el oviducto de la rata. Este efecto no es genómico y requiere fosforilación de proteínas en el oviducto. Para establecer las vías de transducción de señales involucradas en esta acción del E2, determinamos el efecto de la administración local de inhibidores de proteínas quinasas sobre la aceleración del transporte ovular inducida por E2 en la rata.

Ratas en día 1 de ciclo fueron inyectadas s.c. con 1 µg de E2 y concomitantemente se inyectó por vía intrabursal los inhibidores selectivos de proteínas quinasas A (Rp-AMPC), C (staurosporina) o tirosinas quinasas (genisteína). Veinticuatro horas después se determinó el número y localización de los ovocitos en el tracto genital.

La administración local de Rp-AMPc bloqueó parcialmente el efecto del E2 sobre el transporte ovular pero staurosporina y genisteína no la bloquearon. Estos resultados muestran que la acción del E2 sobre el transporte ovular en la rata es mediada al menos por la activación de vías de transducción de señales de la proteína quinasa A en el oviducto.
FONDECYT 8980008 y 2990007, RF 98024 # 98, Cátedra presidencial H Croxatto y MIFAB

ACCION GENOMICA DE LA PROGESTERONA EN EL OVIDUCTO DE LA RATA. (Genomic action of Progesterone in the rat oviduct). Ríos M, Ojeda S, Carvajal AM and Croxatto HB. Unidad de Reproducción y Desarrollo, Facultad de Ciencias Biológicas, PUC.

La administración de progesterona (P4) a ratas en ciclo retarda el transporte ovular. Para establecer si esta acción de P4 es genómica, ratas en día 2 de ciclo fueron inyectadas con 5 mg de P4 o su vehículo y 4, 12 o 20 h después se sacaron los oviductos para incubarlos con 35S-metionina por 8 h. Luego, se precipitaron las proteínas con TCA para estimar la incorporación del precursor. Progesterona estimuló la incorporación de 35S-metionina 4 a 12 h pero la inhibió 12 a 20 h después del tratamiento. Otras ratas fueron tratadas con P4 o su vehículo en día 3 de ciclo y 3 h después del tratamiento se sacaron los oviductos y se extrajo el RNA total. Utilizando la técnica de la expresión diferencial se identificaron 52 bandas de cDNA reguladas diferencialmente por P4, 5 de las cuales fueron clonadas y sus secuencias comparadas en el banco de genes. El clon 5 presentó homología con la proteína ribosomal S6 mientras que los demás no son genes conocidos. Se concluye que P4 regula la expresión génica en el oviducto en condiciones en que retarda el transporte ovular en la rata.
FONDECYT 8980008 y 2990007, RF 98024 # 98 y Cátedra presidencial H Croxatto

PREPARACION AISLADA DE TUBULOS SEMINIFEROS PARA EL ESTUDIO "in situ" DE CELULAS ESPERMATOGENICAS (A Novel preparation of seminiferous tubules to study of spermatogenics cells "in situ") Jorquera, R*, Reyes, JG= , Labarca, P*. *Centro de Estudios Científicos, Valdivia, =Universidad Católica de Valparaíso, Valparaíso.

En los túbulos seminíferos (TS), bajo el control de las células de Sértoli (SC), ocurre la diferenciación de las células espermatogénicas (CE)[1], estableciéndose uniones gap y manteniendo puentes celulares entre CE. Hemos desarrollado una preparación que mantiene las conexiones celulares en los TS que hace posible investigar "in situ" las propiedades electrofisiológicas de las CE y, usando colorantes, cambios en Ca2+in y pHin. La preparación de TS se obtuvo de ratas prepuberales, bajo lupa con epiiluminación fría. Los testículos fueron decapsulados, cortados en rebanadas y fijados a una cámara, con perfusión de medio Krebs-Henseleit suplementado, burbujeado con 95%O2/5%CO2 a 4ºC. Luego, con microtijera se corto la superficie de cada TS. Usando videomicroscopía, con un microscopio con epifluorescencia, contraste de fase y objetivos de inmersión en agua, identificamos las células peritubulares, SC, germinales y CE de acuerdo a la morfología celular y nuclear, por contraste de fase y marcando el núcleo con Hoescht 33342 2µM[2] respectivamente. Usando Lucifer Yellow 50µM observamos la presencia de conexiones entre CE. Los controles con yoduro de propidio mostraron una baja incorporación del colorante, indicando una alta viabilidad celular.
[1]Jegou, B (1993) International Rev.Cytol., 147:25-96.
[2]Reyes, JG (1997) Biol. Cell, 89:1-10.
Financiamiento: HHMI, Cátedra Presidencial.
CECS es un Instituto Científico Milenio.

LA PERMEABILIDAD DE LAS UNIONES EN HENDIDURA FORMADAS IN VITRO ENTRE CELULAS DENDRITICAS MANIFIESTA CAMBIOS EN LA SELECTIVIDAD POR CARGA (The permeability of gap junctions expressed in vitro by dendritic cells show changes in charge selectivity). Corvalán LA, Stockinger B y Saéz JC. Laboratorio de Fisiología, Pontifica Universidad Católica de Chile.

Las células dendríticas (CDs) son células especializadas del sistema inmune esenciales en la respuesta mediada por linfocitos T (LT). Estudios ultrastructurales han demostrado en entre LT y CDs, la presencia de uniones "tipo" uniones en hendidura (UH), lo que sugiere que las CDs expresan conexinas (Cxs), subunidades proteicas de las UH. Las UH comunican el citoplasma de células adyacentes y son permeables a moléculas pequeñas. En este trabajo se caracterizó la formación de UH en células TsDC, derivadas de CDs de médula ósea de ratón. En células incubadas a 39ºC por 48 a 96 h en medio condicionado por células RBE4 (derivada del endotelio de la microcirculación de cerebro de rata) se indujo (30-60%) el índice de acoplamiento a amarillo de Lucifer (-2) pero no a bromuro de etidio (+1) mientras que a las 72 h sólo se observó un 30% de acoplamiento bromuro de etidio. No se observó permeabilidad a ioduro de propidio (+1). El acoplamiento fue inhibido por octanol. La inducción de acoplamiento se asoció a la translocación de la Cx43 y disminución de la reactividad de NLDC-145. Estos datos sugieren que la formación de UH en CDs esta relacionada con cambios fenotípicos y funcionales de estas células.

EXPRESION DE MOLECULAS DE ADHESION, INFILTRACION LEUCOCITARIA Y ACTIVACION DE LAS CELULAS DE KÜPFFER EN RATAS SOMETIDAS A SHOCK POR TORNIQUETE (Adhesion molecule expression, leukocyte infiltration, and Küpffer cell activation in rats subjected to tourniquet shock). Vega VL, Mardones L y Ward PH. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad de Concepción.

El síndrome de shock se caracteriza por la generación de estados hipotensivos que resultan en el desarrollo de la falla orgánica múltiple (FOM). En nuestro laboratorio hemos estandarizado un modelo de shock en ratas que consiste en la generación de isquemia-reperfusión en las extremidades posteriores, lo que resulta en un daño local que se hace extensivo hacia otros órganos. Resultados previos demostraron la participación de las células de Küpffer (KC) en la generación del estrés oxidativo hepático en ratas sometidas a shock por torniquete.

El objetivo de este trabajo fue evaluar la participación de las KC en la infiltración leucocitaria y en la expresión de moléculas de adhesión (P-selectina, ICAM-1, VCAM-1 y Mac-1) en el hígado. Nuestros resultados muestran que la activación de las KC durante la reperfusión resulta en un incremento en la expresión de moléculas de adhesión y en la actividad de MPO en hígado. El pretratamiento con GdCl3 (10mg/kg de peso iv), sustancia que destruye las KC, previene las alteraciones señaladas e incrementa la sobrevida de los animales sometidos a shock por torniquete. Estos resultados nos permiten concluir que las KC activas promueven la infiltración del hígado por las células inflamatorias circulantes.
Proyecto DI 99.33.92-1 Universidad de Concepción.

EL BLOQUEO DE LAS UNIONES COMUNICANTES (GJ) REDUCE LA PRODUCCION DE OXIDO NITRICO (NO) INDUCIDA POR FLUJO EN VASOS DE RESISTENCIA. (Gap junction blockade reduces flow-induced NO production in resistance vessels). Figueroa, X.F., Callejas, C., Boric, M.P. Dept. Ciencias Fisiológicas, Facultad Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile.

La comunicación celular mediada por uniones comunicantes (GJ) permite el funcionamiento coordinado de la pared vascular, pero no se sabe si participa en la producción de NO endotelial inducida por flujo.

Se usó la red arterial mesentérica de rata, aislada y perfundida con buffer control (vehículo: DMSO 1:2000, n=4) o con 75µM ácido glicerriténico (Glic., n=4), bloqueador de las GJ. Se registró la presión de perfusión y se midió la liberación de NO por quimioluminiscencia (pmol/min) a distintos flujos. Además, se estudió la relajación inducida por 0.01-10µM acetilcolina en mesenterios contraídos con 10µM noradrenalina.

Al subir el flujo de 2 a 5mL/min, la producción de NO aumentó desde 269±26 a 517±64 (fase transitoria, primer minuto) estabilizándose en 350±43 (fase sostenida). En presencia de Glic, no hubo fase transitoria y la producción de NO fue menor (172±33 a 2mL/min y 226±30 a 5mL/min).

Glic no afectó la constricción inducida por noradrenalina ni la relajación inducida por acetilcolina, indicando que el bloqueo de GJ afecta específicamente la respuesta al flujo.

Estos resultados sugieren que algunas células endoteliales detectan los cambios de flujo y que la comunicación mediante GJ permite una respuesta coordinada de toda la superficie endotelial.
FONDECYT 2990079 y 8990008

DETECCION DIRECTA, EN TIEMPO REAL, DE LA PRODUCCION DE OXIDO NITRICO (NO) EN ARTERIAS DE RESISTENCIA AISLADAS. (Real time direct detection of nitric oxide production in isolated resistance arteries). Figueroa, X.F.1, Damon, D.N.2, Duling, B.R.2. 2University of Virginia, Charlottesville, USA, 1P. Universidad Católica de Chile.

El NO es considerado el principal vasodilatador dependiente de endotelio, pero el estudio de su producción en pequeñas arterias de resistencia está limitado por su corta vida media y baja concentración.

En este trabajo, medimos la producción de NO en arterias de mesenterio de rata usando el indicador fluorescente para NO 4,5-diaminofluoresceina-diacetato(DAF/DA).

Arterias de 243±7µm (n=27) se aislaron y canularon por ambos extremos con micropipetas conectadas a reservorios independientes, manteniendo la presión intraluminal en 60mmHg. Se evaluó el efecto del flujo inducido mediante gradientes de 2_16cmH2O y de acetilcolina, sobre el diámetro del vaso (% del máximo) y la producción de NO detectada por la fluorescencia de 20µM-DAF/DA. La señal fluorescente se calibró con 10µM SNAP, donador de NO.

Acetilcolina (0.1-10µM) indujo vasodilatación dosis-dependiente (13.5±4.6% a 64.5±6.6%). La respuesta al flujo fue rápida (5-10seg) alcanzando el mismo grado de vasodilatación, pero con sensibilidad variable. Estos estímulos indujeron una señal de NO de curso temporal similar y magnitud proporcional a la dilatación. El bloqueo de la NO sintasa (100µM L-nitro-arginina), abolió la señal de NO y redujo la dilatación.

Estos resultados indican que es posible detectar directamente la producción de NO en pequeñas arterias de resistencia con el indicador fluorescente para NO DAF/DA.
FONDECYT 2990079.

ECOLOGIA MARINA

MICROZOOPLANCTON DEL SISTEMA ESTUARINO DEL RIO GOIANA-PERNAMBUCO-BRASIL.(Zooplankton of the estuarine system of the river Goiana-Pernambuco-Brazil) Moura, M.1; Neumann-Leitão2, S.; Silva, A.2 y Gusmão, L.2 1-Departamento de Oceanografia da Universidade Federal de Pernambuco, Doctorando del Curso de Ciencias ambientales, Centro-EULA-CHILE Email: mmoura@udec.cl 2- Departamento de Oceanografia da Universidade Federal de Pernambuco

La comunidad microzooplanctónica del complejo estuarino del río Goiana-Pernambuco-Brasil, fue estudiada entre mayo/1997 y enero/1999, se seleccionaron 5 estaciones. Los muestreos fueron realizados en período de marea baja y pleamar durante el día. Para la recolección se utilizó red de plancton de 65 µm, arrastradas superficialmiente por 3 minutos. Las muestras fueron preservadas en formol neutro (4%). Paralelamente, se obtuvieron datos climatológicos e hidrológicos. Se observó la predominancia de especies marinas eurialinas representadas por 53 taxa. Los grupos predominantes fueron Copepoda, Rotifera y Protozoa. Dentro de los copepodos predominaron Oithona hebes, Paracalanus crassirostris, Acartia lilljeborgi y Euterpina acutifrons. El meroplancton estuvo constituido por veligeras de Gastropodos y Bivalvos, nauplios de Cirrypedia y zoea del Brachyura, predominando en este ambiente en determinadas épocas del año. Las mayores densidades fueron obtenidas en periodo de pleamar, la cantidad de organismos varió entre 2.233 y 129.291 org*m-3. Además, se observó un aumento significativo de la densidad del zooplancton desde 1997 a 1999, la diversidad específica media fue baja (~2 bits*ind-1). El análisis de agrupamiento permitió observar una comunidad eurialina única. La estructura zooplanctónica de este sistema indica que el área está en proceso de eutroficación.
Se agradece al Centro EULA-Chile, Universidad de Concepción.

EPISODIO DE MORTALIDAD MASIVA EN EL MAR LIGURE (N-W MEDITERRANEO) VERANO 1999. (mass-mortality episode of gorgonians in the ligurian sea (n-w mediterranean sea), summer 1999) Bava, S1. Cerrano, C1. Herrera, F2. Franci, G1. Schiaparelli, S1. 1DIPTERIS, Universitá di Genova, Europa 26, 16132 Genova, Italy. E-mail: sbava@udec.cl , 2Centro EULA-CHILE

En la época estival (1999), una extensa mortalidad de Gorgonacea (Paramuricea clavata, Eunicella singularis, E. cavolini) y otros organismos bentónicos, fue observada en el Mar Ligure desde el archipiélago Toscano a Marsella. Datos cuantitativos de la isla de Tino y el Promontorio de Portofino indicaron que el porcentaje de gorgonidos afectados estuvo entre 60-100%, en una población que presentaba una densidad de 9-27,8 colonias*m-2, y se sugiere que millones de estos organismos murieron en la costa Ligure. Este episodio coincide con un aumento repentino de la temperatura (2-4 °C) hasta la profundidad de 50 metros. Análisis de laboratorio indican que las colonias estresadas por el aumento de temperatura, fueron atacadas por microorganismos patógenos oportunistas, protozoarios y hongos (Trichoderma). Sucesivamente los "esqueletos" descubiertos de "cenenchima" fueron colonizados por algas filamentosas e hidroides. La escasez de datos históricos sobre fenómenos parecidos, o sobre la estructura de la población de Gorgonidos en esta área, hacen difícil determinar si el aparente aumento de la frecuencia de los acontecimientos de mortalidad en las pasadas décadas son debidas a un cambio ambiental o si sólo es un reflejo del aumento de las investigaciones.
Se agradece al Centro EULA-Chile, Universidad de Concepción.

DEMOGRAFIA DE POBLACIONES DE CRUSTACEOS DECÁPODOS SUBMAREALES EN CHILE CENTRAL: INTERACCION ENTRE PROCESOS DENSO-DEPENDENTES E INDEPENDIENTES A DISTINTAS ESCALAS ESPACIALES (Demography of decapod crustacean populations in central Chile: interaction between density-dependent and independent processes at different spatial scales). A. Palma, S. Juárez, C. Orrego & F. P. Ojeda. Depto. Ecología, P. Universidad Católica de Chile. Alameda 340, Santiago.

En muestreos realizados en el submareal somero de Chile central se caracterizó la comunidad de crustáceos decápodos, encontrándose una diversidad de hasta 17 especies. Todas estas especies se caracterizan por presentar una fase larval dispersiva y de estadíos juveniles que reclutan en zonas costeras. El problema principal que se investigó fue la relación existente entre los patrones de diversidad y abundancia a distintas escalas espaciales. Los sitios, que fueron visitados periódicamente, se caracterizan por su exposición variable a corrientes y vientos predominantes en la zona, clasificándoselos en expuestos y protegidos. Las escalas examinadas fueron: entre sitios (ubicados a kilómetros-cientos de metros entre si), dentro de sitios (expuesto vs. protegido separados por cientos de metros) y entre tipos de sustratos al interior de sitios (separados por metros). Los tipos de sustratos analizados corresponden a: rocosos (bolones sobre conchela), algas (principalmente Glossophora kunthii) y conchuela sola. Todas las muestras fueron obtenidas mediante una bomba succionadora de fondo. Además, se realizaron experimentso in situ para evaluar el potencial de depredación al que están expuestos los individuos recientemente asentados. Nuestros resultados muestran que tanto la composición específica como su abundancia es variable a las distintas escalas examinadas. Asi, el patrón poblacional resultante correspondería a la interacción entre procesos denso-dependientes y denso-independientes. Estos resultados apuntan hacia una visión más detallada (mesoescala) de la dinámica de poblaciones marinas abiertas que pretende explicar los patrones poblacionales, no necesariamente invocando procesos que solo explicarían los patrones más generales propuestos por eventos a gran escala.
Financiado por Proyecto Fondecyt #3990032.

ESTRUCTURA DE ENSAMBLES DE PECES INTERMAREALES EN POZAS ARTIFICIALES: EFECTO DE LA HETEROGENEIDAD ESPACIAL. (The structure of intertidal fish assemblages in artificial tidepools: effect of spatial heterogeneity). Lobos V., A Angel, P. Quijada & F. P. Ojeda. Depto. de Ecología, Fac. de Cs. Biológicas, P. U. Católica de Chile. Santiago.

Se ha demostrado que la heterogeneidad espacial puede influenciar la estructura de las comunidades, modificando la diversidad, la distribución y la abundancia de organismos dominantes. Sin embargo, son escasos los estudios que determinen el efecto de dicho factor sobre los ensambles de peces intermareales. El presente trabajo evalúa la importancia relativa de la heterogeneidad espacial como factor determinante de la estructura de los ensambles de peces en pozas artificiales. El estudio se llevó a cabo a partir de septiembre de 1999 en dos localidades de la costa central de Chile: Las Cruces y Salinas. Se aplicó un diseño factorial con 24 pozas colocadas en el intermareal medio-bajo, en los cuales se distribuyeron aleatoriamente 4 niveles de heterogeneidad. Los resultados señalan que Gobiesox marmoratus, Helcogrammoides chilensis y Auchenionchus microcirrhis fueron las especies más abundantes. La composición y la riqueza de especies presentaron variaciones asociadas tanto a la heterogeneidad espacial como al tiempo. Además se observó una variabilidad estacional en la estructura de talla para las especies más abundantes. Se discuten estos resultados en función de la historia de vida de cada especie, su relación con la preferencia de hábitat y sus posibles interacciones tróficas, de modo de lograr un mejor entendimiento de la dinámica de los ensambles de peces intermareales.
(Financió FONDECYT 1990154)

DISTRIBUCION ESPACIAL DE LAS LARVAS PREMETAMORFICAS DE CONCHOLEPAS CONCHOLEPAS (GASTROPODA: MURICIDAE) EN LA ZONA CENTRAL DE CHILE: EFECTO DE FACTORES FISICOS. (Spatial distribution of premetamorphic larvae of concholepas concholepas (gastropoda: muricidae) in the central zone of Chile: effect of physical factors)). E. Poulin, A. Palma, G. Leiva, E. Hernández. P. Martínez, S. Navarrete, J. C. Castilla. Depto. Ecología, P. Universidad Católica de Chile. Alameda 340, Santiago.

Concholepas concholepas ha sido uno de los invertebrados marinos más estudiados en Chile durante las dos últimas décadas, debido a la importancia económica de este recurso para la pesquería artesanal chilena. Sin embargo, a pesar del avance en el conocimiento biológico y ecológico sobre esta especie, existen pocas investigaciones que señalen la importancia que tiene la fase larval planctónica en la estructura y dinámica de las poblaciones adultas. Se realizaron seguimiento mensual de la distribución espacial de larvas premetamórficas de C. concholepas entre Julio de 1999 y Julio del 2000 mediante muestreos paralelos a la línea de costa frente a la estación costera de investigaciones marinas de Las Cruces (V Región). Al mismo tiempo, se realizaron muestreos del asentamiento en la zona intermareal utilizando colectores artificiales. Durante este período se registraron variaciones locales en la temperatura del agua y de la intensidad y dirección del viento. Se detectaron marcadas fluctuaciones espaciales y temporales en la distribución de las larvas premetamórficas de C. concholepas en la capa superficial de la columna de agua, las que están asociadas a la dirección e intensidad del viento. La abundancia de larvas fue máxima entre los meses de agosto y octubre, lo que se relaciona estrechamente con los máximos valores de asentamiento registrados entre los meses de septiembre y noviembre. También se observaron drásticas diferencias en la presencia de larvas entre muestreos diurnos y nocturnos. Nuestra evidencia sugiere la existencia de un mecanismo mediante el cual las larvas competentes de esta especie estarían siendo retenidas en areas cercanas a la costa durante eventos de surgencia.
Financiado por proyectos: Italia (CICS-Eula Genova-PUCCH), FONDAP O & BM N°3, FONDECYT N° 3990032.

COMPARACION INTERHEMISFERICA DE PATRONES DE DIVERSIDAD A TRAVES DE QUIEBRES BIOGEOGRAFICOS: LA IMPORTANCIA DE TIPOS DE DESARROLLO EN LA DISTRIBUCION DE INVERTEBRADOS MARINOS (Interhemispheric comparison of diversity patterns through biogeographic pointbreaks: the importance of mode of development in the distribution of marine invertebrates) 1Oyarzun, F , 2Fernandez, M y 3Eckert, G.1, 2 Pontificia Universidad Católica de Chile- 3University of Alaska

Los invertebrados marinos poseen diversas estrategias reproductivas, cuyos patrones de diversidad no se encuentran distribuídos homogéneamente a través del globo. Aunque se ha sugerido que los modos de desarrollo deberían afectar los rangos geográficos de distribución, las tasas de extinción y especiación, y por ende la diversidad, no se han realizado hasta el presente estudios que permitan evaluar el real efecto del potencial de dispersión sobre los patrones de diversidad y rangos de distribución de las especies. En este trabajo se exploraron dos bases de datos correspondientes al Pacifico suroriental y nororiental, y se compararon distintas características de las estrategias reproductivas de las diferentes especies, y la relación entre éstas, diversidad, quiebres biogeográficos y gradientes latitudinales. El hemisferio sur presenta especies con tamaños corporales decrecientes al sur del quiebre biogeogáfico de los 40°S y rangos restringidos de distribución; aspecto que se ha relacionado con especies incubadoras. En el hemisferio norte, los rangos de distribución no varían significativamente a ambos lados de los quiebres. En ambos hemisferios los rangos de distribución son en general mas pequeños que el máximo potencial de dispersión de la especie en cada región biogeográfica. Finalmente otros aspectos de la dispersión y desarrollo de especies que traspasan o se detienen en quiebres biogeográficos son discutidos y relacionados con patrones de circulación, temperatura, salinidad y complejidad de la costa.

FACTORES QUE DETERMINAN EL PATRON DE ACTIVIDAD MOTRIZ DE PECES INTERMAREALES. (Factors that determine the motor activity patterns of intertidal fishes) Briones1 C., Cáceres2 C. W. & Ojeda1 F. P. 1Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile, Santiago. 2Facultad de Ciencias, Universidad Católica de la Ssma.Concepción, Concepción.

Numerosos estudios establecen que ciertos organismos presentan adaptaciones a ciclos medio ambientales, tales como día/noche y mareal. Las diferentes respuestas asociadas al estímulo de la interacción de aquellos dos ciclos son las que determinan los distintos patrones de movimiento. En particular, los individuos que habitan la zona intermareal muestran patrones de actividad rítmica sincronizada con los ciclos maréales. En este contexto, los peces intermareales están expuestos a cambios (con frecuencia temporal y espacial) que dependen de la naturaleza del ciclo, y que responden a las necesidades fisiológicas de los individuos. En el presente estudio se evaluaron los factores que modulan y determinan el patrón de actividad rítmica y su persistencia en dos especies de peces intermareales: Auchenionchus microcirrhis y Calliclinus geniguttatus. determinándose el efecto de la intensidad luminosa, la periodicidad de la alimentación y la presión hidrostática en individuos mantenidos en condiciones constantes de laboratorio. Los resultados establecen que los peces poseen un ritmo mareal, y uno circadiano. La periodicidad de la alimentación resultó ser un potente sincronizador de la actividad de los peces en relación a la disponibilidad del alimento,(Cyclograpsus cinereus), Se concluye que los peces intermareales Auchenionchus microcirrhis y Calliclinus geniguttatus presentan distintos ritmos de actividad de acuerdo a un reloj biológico residual.
Financió FONDECYT 1990154

TIEMPO DE PERMANENCIA Y CRECIMIENTO DE CUATRO ESPECIES DE PECES INTERMAREALES EN LA COSTA CENTRAL DE CHILE. (Residence time and growth of four intertidal fish species of the central Chilean coast) Quijada P., A. Angel, V. Lobos & F.P. Ojeda. Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile, Santiago.

Los peces intermareales utilizan las pozas durante distintos estadíos de su vida, clasificándose como residentes y transitorios según su tiempo de permanencia en dicha zona. En este estudio determinamos los tiempos de residencia y crecimiento de las 4 especies más abundantes presentes en las costas de Chile central, Scartichthys viridis, Auchenionchus microcirrhis, Graus nigra y Girella laevifrons,. Se estudiaron 10 pozas del intermareal rocoso en las localidades de Las Cruces, El Tabo e Isla Negra, mediante muestreos bimensuales desde febrero de 1997 a agosto de 2000. En cada una de ellas se recolectaron la totalidad de los peces los cuales fueron medidos, pesados y marcados siendo posteriormente devueltos a su poza original. El marcaje se efectuó mediante la introducción de dispositivos electromagnéticos (PIG TAG) en la cavidad corporal. Nuestros resultados señalan que: S. viridis es la que permanece mayor tiempo en las pozas, y especies que se las tenía considerada con bajos tiempos de residencias presentaron valores superiores a los esperados. Similarmente, el crecimiento de S. viridis es mayor en comparación con las especies restantes siendo G. nigra y G. laevifrons las que muestran las más bajas tasas de crecimiento. Se discuten los resultados en función de la historia de vida de estas, la dinámica del ensamble y el carácter residente y transitorio descrito para peces intermareales.
(Financió FONDAP·O&BM 3 y FONDECYT 1990154)

BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR

YOR114W ES UN SUPRESOR DE LA SENSIBILIDAD A ACIDOS ORGANICOS DEBILES EN MUTANTES DE LEVADURA QUE CARECEN DEL TRANSPORTADOR PDR12. (YOR114w is a suppressor of the weak organic acid sensitivity of yeast cells that lack the Pdr12 transporter). Ortiz, C. y Piper, P.W. Facultad de Ciencias Naturales, Universidad de Atacama y Department of Biochemistry and Molecular Biology, University College London.

Una cepa mutante de Saccharomyces cerevisiae sensible a ácidos débiles Dpdr12, fue transformada con una librería genómica de la levadura contaminante de alimentos Zygosaccharomyces bailii, y seleccionada por recuperación de la resistencia a ácido sórbico. Las colonias seleccionadas en 1 mM de ácido sórbico pH4.5 presentaban un fragmento de DNA de Z. bailii altamente homólogo con YOR114w, una ORF de Saccharomyces cerevisiae de función desconocida. La sobreexpresión del gen silvestre YOR114w en Dpdr12, una mutante de S. cerevisiae sensible a ácidos débiles, recuperó parcialmente el fenotipo sensible, mientras que la expresión de Yor114w marcado para inmuno-detección reveló que la proteína está fuertemente asociada a la fracción de la membrana plasmática. La pérdida de YOR114w en S. cerevisiae afectó parcialmente la resistencia a ácidos débiles, aunque la cepa doble mutante Dyor114w, Dpdr12 es más sensible a ácido sórbico que la mutante simple Dpdr12. Yor114w presenta homología con proteínas descritas como canales de calcio en animales. La acción de Yor114w podría estar relacionada con calcio ya que niveles altos del catión suprimen la sensibilidad a ácidos débiles tanto en la cepa Dpdr12 como en la doble mutante Dyor114w, Dpdr12.

CLONAMIENTO MOLECULAR DEL RECEPTOR V2b PRESENTE EN EL SISTEMA NERVIOSOS CENTRAL. (Molecular cloning of the V2b receptor present in the central nervous system). Sarmiento, J., Navarro, J. Troncoso, S. y Gonzalez, C.B., J. Instituto de Fisiología Universidad Austral de Chile, Valdivia y Department of Physiology and Biophysics, University of Texas Medical Branch, Galveston, Texas.

Vasopresina se encuentra ampliamente distribuida en el sistema nervioso central y juega un importante rol en procesos de aprendizaje y memoria. Mediante RT-PCR hemos detectado en hipocampo, septum lateral y cerebelo un fragmento de aproximadamente 1,2 Kb del receptor V2 de AVP. El clonamiento y secuenciación mostró que corresponde a una isoforma del receptor que se genera por empalme alternativo, a un sitio aceptor 76 pb río abajo en el tercer exón produciéndose un cambio en el marco de lectura. La nueva isoforma difiere en el extremo C-terminal de la forma renal del V2 y es, a su vez, 31 áá más corta, generándose un nuevo segmento de transmembrana y un segmento intracelular carboxiterminal. Anticuerpos específicos para el receptor V2 mostraron por inmunocitoquímica que esta isoforma se encuentra localizada en las células de Purkinje del cerebelo, hipocampo, preferentemente en las zonas CA1 y CA2, en neuronas de la corteza occipital y en neuronas del septum lateral. Células COS-7 fueron establemente transfectadas con el cDNA para la isoforma de V2 mostrando unión especifica de vasopresina marcada. En este trabajo describimos por primera vez que el receptor V2 de vasopresina que se encuentra en cerebro es una isoforma del receptor V2 renal y la denominamos V2b.
(Financiado por Fondecyt 8980002)

CARACTERIZACION DEL FACTOR DE TRANSCRIPCION TFIIB DE S. pombe . Evelyn Tamayo y Edio Maldonado. Programa de Biología Celular y Molecular, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

El proceso de transcripción de mRNA requiere de la RNA pol II y de un conjunto de factores accesorios los cuales se denominan factores basales de transcripción. El reconocimiento del promotor comienza con la unión del factor TBP a la caja TATA. Posteriormente se une el factor TFIIB el cual sirve de puente para la unión del complejo RNA pol II-TFIIF. Por último se unen al complejo los factores TFIIE y TFIIH para formar un complejo de preiniciación de la transcripción.

En este trabajo describimos el clonamiento y expresión del factor TFIIB de S. pombe. Este factor fue clonado a partir de la información de los bancos de datos. Usando esta información se diseñaron primers para amplificar, mediante PCR, el gen que codifica para TFIIB. Los productos obtenidos fueron clonados en un vector de expresión de E. coli. La proteína fue inducida y purificada mediante cromatografía de afinidad. Los ensayos funcionales efectuados con la proteína nos indica que es capaz de formar un complejo con TBP unido a la caja TATA. Por otro lado, la comparación de la secuencia de aminoácidos del factor TFIIB de humano con el factor TFIIB de S. pombe reveló que existe una alta homología. Todo esto nos permite concluir que hemos clonado el homologo del factor TFIIB de S. pombe.
Financiado por proyecto Fondecyt 1981069

CLONAMIENTO Y CARACTERIZACION DE LOS GENES DE LA PROTEINAS DE ESTRES TERMICO HSP60 Y HSP70 DE PISCIRICKETTSIA SALMONIS. (Cloning and characterization of the heat shok proteins hsp60 and hsp70 of Piscirickettsia salmonis). Miquel, A., Soza, C., Schmitting, F., Müller, I., Burzio, L.O. y Valenzuela, P., Fundación Ciencia para la Vida e Instituto Milenio MIFAB, Avenida Marathon 1943, Santiago.

Las proteínas de estrés térmico hsp60 y hsp70 constituyen antígenos que confieren protección para varios patógenos como Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Helicobacter pylori y Yersinia enterocolitica, entre otros. Ratones inmunizados con estas proteínas producen una respuesta humoral y T citotóxica que confieren al animal protección contra estos patógenos.

Con el objeto de desarrollar una vacuna experimental para salmones contra la infección con P. salmonis hemos clonado y secuenciado los genes de la hsp60 y 70 de esta bacteria. En base a dendrogramas del RNA ribosomal 16S se establecieron alineamientos de las proteínas de estrés térmico de varias proteínas. De esta forma se localizaron las regiones mas conservadas de estas proteínas y se diseñaron partidores para el gen de estas proteínas de P. salmonis. Los productos de amplificación por PCR se ligaron al vector pGEM-T y con los plasmidios recombinantes se transformaron células HB101. La secuencia de estos clones mostraron que tenemos alrededor del 85% del gen de hsp60 y cercano al 100% del gen de hsp70. La homología de estas proteínas es alrededor del 75% con sus similares de Legionella, Coxiella y Nitrosomonas, entre otras. La distribución de hidrofilicidad en estas proteínas es muy semejante, mostrando la existencia de determinantes antigénicos fuertes en las mismas regiones.

AISLAMIENTO DE SECUENCIAS GENICAS QUE CODIFICAN PARA EL RECEPTOR DE PROLACTINA DE CARPA (Isolation of carp prolactin receptor gene sequences) San Martín, R., Cáceres, P., Azócar, R., Krauskopf, M. Laboratorio de Biología Celular y Molecular, Universidad Nacional Andrés Bello y MIFAB. República 237, Santiago, CHILE.

El pez Cyprinus carpio, teleósteo euritermal, es capaz de compensar fisiológicamente las variaciones estacionales de su habitat en las que temperatura y fotoperíodo tienen particular relevancia. A nivel molecular, hemos atribuido un rol transductor de la hipófisis a las señales ambientales, donde la hormona prolactina pareciera ser el principal mediador de la respuesta adaptativa sistémica del pez. Durante la aclimatización de la carpa, tanto el contenido de prolactina como su transcripción decrece notoriamente durante la estación fría. Asimismo, en carpas aclimatadas, fotoperiódos cortos y temperaturas invernales deprimen marcadamente la expresión de prolactina. El efecto de prolactina en los diversos tejidos debe ser mediado por receptores de membrana específicos. Consecuentemente, hemos, aislado secuencias parciales del cDNA del receptor de prolactina de carpa. La secuencia proteica que puede derivarse está conservada respecto a la secuencia descrita en mamíferos, particularmente elementos tales como las cisteínas del dominio extracelular, el motivo WS y el box 1. Además, se sugiere la existencia de isoformas del receptor que varían en su dominio intracelular.
Grants DI-UNAB 60-A/99 y MIFAB

LA INHIBICION DE LA POLI(ADP-RIBOSILACION) ALTERA LOS PRIMEROS ESTADOS DE SEGMENTACION EMBRIONARIA EN ERIZO DE MAR. (Inhibition of poly(ADP-ribosylation) alters cleavage stages of development in sea urchins) Oliver M.I., *Genevière A.M., Gutierrez J.L., Toledo L., Puchi M., Imschenetzky M. Departamento de Biología Molecular, Universidad de Concepción, Chile. *Laboratoire Arago, Université Pierre et Marie Curie, Banyuls sur mer, Francia.

Con el fin de analizar el requerimiento de poli(ADP-ribosilación) de proteínas nucleares durante los estados de segmentación embrionaria, se incubaron embriones de erizos de mar en 20 mM de 3 aminobenzamida (3-ABA), un inhibidor de la poli(ADP-ribosa)polimerasa (PARP). Se monitoreó la replicación de ADN por incorporación de 3H- timidina in vivo y complementariamente se detectó citológicamente por incorporación de bromodeoxiuridina (BUdR). La segmentación embrionaria fue seguida por microscopía, comprobándose la división nuclear por tinción con Hoechst 33258. Los resultados obtenidos indican que la inhibición de PARP altera la velocidad de replicación de ADN e inhibe la citoquinesis durante las etapas iniciales de segmentación. Adicionalmente, se comparó la localización intracelular de tubulina en embriones normales con aquellos incubados en 3-ABA. Los resultados obtenidos indican que la inmunolocalización de tubulina no se ve alteradas al inhibir la poli(ADP-ribosilación). Por lo tanto, la inhibición de la citoquinesis detectada obedece a una causa diferente. Se concluye que la correcta poli(ADP-ribosilación) de proteínas nucleares es fundamental para el éxito de las primeras segmentaciones embrionarias pues se desacoplan los ciclos replicativos y de división celular al inhibir PARP.Financiado por Proyectos FONDECYT : 2990067 y 1980141.

EXPRESION Y SECRECION DE APOLIPOPROTEINA A-I EN LA EPIDERMIS DE Cyprinus carpio. (Expression and secretion of apolipoprotein A-I in the epidermis of Cyprinus carpio). Concha, M.I., Oyarzún, C. y Villanueva, J. Instituto de Bioquímica, Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile.

La piel de los peces presenta adaptaciones tales como las escamas y una abundante secreción de mucus que protegen a este epitelio. El mucus ejerce una función vital en la defensa primaria de los peces frente a patógenos. Dicha función sería mediada por diferentes proteínas y péptidos.

En estudios preliminares detectamos apo A-I, la principal apolipoproteína constituyente de la lipoproteína HDL, en la piel de C. carpio. Entre las funciones menos estudiadas de HDL y/o apo A-I, se destacan su actividad antioxidante, antimicrobiana y su posible papel en regeneración de tejidos. Ya que estas proteínas podrían cumplir un papel defensivo en la piel de C. carpio, analizamos la expresión de apo A-I en la epidermis y su presencia en el mucus. Por análisis de Northern se detectó un transcrito del tamaño esperado y por inmunohistoquímica, abundante apo A-I en el citosol de las células del estrato germinativo de la epidermis. En estratos superiores su localización fue preferentemente intercelular. Adicionalmente, por análisis de Western se demostró que en el mucus esta apolipoproteína está constituyendo partículas de HDL de menor tamaño a las predominantes en el plasma. Estos resultados sugieren que la proteína es sintetizada en la epidermis y luego es secretada al mucus donde podría ejercer una función defensiva.
Proyecto DID-UACH S-200005

SECUENCIACION PARCIAL Y OBTENCION DE ANTICUERPOS CONTRA UNA CISTEIN-PROTEASA INVOLUCRADA EN LA REMODELACION DEL PRONUCLEO MASCULINO EN ERIZOS DE MAR. (Partial sequence and antibodies against a cystein-protease involved in male pronuclei remodeling in sea urchins). Morin, V., Concha, C., Puchi, M., Montecino M., Imschenetzky, M. Departamento de Biología Molecular, Universidad de Concepción.

En nuestro laboratorio se ha identificado una cistein-proteasa (SpH-Proteasa) que hemos postulado participa en la formación del pronúcleo masculino. Esta enzima es activada tempranamente post-inseminación y degrada selectivamente las histonas espermáticas (SpH) dejando las histonas de tipo materno (CS) intactas.

Se informa la purificación a homogeneidad de SpH-proteasa, la determinación de su secuencia aminoacídica parcial y la obtención de anticuerpos policlonales dirigidos contra esta proteína. Se secuenció su extremo N-terminal obteniendo la información siguiente: TPGNLQIPDTVDWRD. Esta información fue analizada en la base de datos SWISS-PROT, comprobando que es consistente con cistein-proteasas de otros orígenes. En base a esta secuencia se construyó un péptido sintético que fue conjugado con hemocianina (KLH)con el fin de obtener anticuerpos policlonales en conejos. Se utilizaron los anticuerpos obtenidos para monitorear las distintas etapas de purificación de la cisteín-proteasa por Western blot, observándose que estos anticuerpos reconocen específicamente la SpH-proteasa y no presentan reacción cruzada con otras proteínas de óvulos o cigotos de erizos de mar. Paralelamente se comprobó que estos anticuerpos bloquean la actividad de SpH-proteasa in vitro. Consecuentemente, los anticuerpos obtenidos constituyen una herramienta valiosa que nos permitirá confirmar in vivo la función postulada para SpH-proteasa en la remodelación del pronúcleo masculino.
Fondecyt 1980141 y 2990038

FISIOLOGIA CELULAR

EFECTOS EN LA ACTIVIDAD DE UNA ENZIMA LIPOLITICA DEBIDOS A LA INDUCCION PEPTIDICA DE DOMINIOS DE MEMBRANA (Modulation of one lipolytic enzymatic activity by peptide driven domains in the membrane). Salinas, D. y Rojas, E. ICBM, Facultad de Medicina de la Universidad de Chile.

El modelo de membrana del mosaico fluido ha sido ampliamente superado por un modelo de membrana que incluye ordenamientos fosfolipídicos de un orden de magnitud que se extiende desde nanómetros a micrones. Estos ordenamientos son denominados dominios y pueden resultar de la interacción entre los mismos fosfolípidos o de la interacción entre fosfolípidos y proteínas o péptidos, como ocurre con algunos péptidos básicos con afinidad por fosfolípidos negativos. Hasta donde sabemos, se han desarrollado modelos cinéticos para enzimas lipolíticas en interfases homogéneas, pero sin considerar la presencia de dominios que impliquen una redistribución de la enzima y su sustrato. Aquí desarrollamos una generalización de la conocida Teoría Cinética de Dilución de Superficie a casos en los cuales en una misma interfase lipídica coexisten una fase de dominio y una fase de no dominio. También estudiamos el cambio en la velocidad de la enzima debido al efecto competitivo de un péptido inductor de dominios y al reordenamiento lipídico (efecto de redistribución).

Entender cómo el reordenamiento y las interacciones lipídicas afectan la actividad de enzimas lipolíticas, puede ayudarnos a interpretar resultados que evidencian la interacción de péptidos básicos con fosfolípidos acídicos, alterando la actividad de enzimas importantes en las vías de señalamiento lipídico. Tal es el caso del péptido b-amiloide, involucrado en la enfermedad de Alzheimer, y su efecto sobre la PLC.
Este trabajo ha sido financiado por el proyecto FONDECYT No 2990111.

CLONAMIENTO Y EXPRESION DEL RECEPTOR V1 DE LISINA VASOPRESINA (LVP) DE CERDO. (Cloning and expression of pig vasopressin V1a receptor). Reyes, C., Jipoulou, F., Navarro, J., González, C. Instituto de Fisiología Universidad Austral de Chile y Department of Physiology and Biophysics, University of Texas Medical Branch, Galveston, Texas.

LVP es la hormona natural en especies suiformes. A fin de caracterizar el receptor V1 de LVP de cerdo se aisló el cDNA que codifica para el receptor V1a de LVP. Para ello se empleó como templado una genoteca de cDNA de hígado de cerdo, obteniéndose como producto de amplificación un fragmento de DNA de 1.3 kb. El análisis de la secuencia mostró un alto grado de identidad respecto del receptor V1a AVP de rata (98.6%) y un menor grado de identidad con el receptor V1a AVP humano (82.3%). Además los receptores V1a presentan un 45%-50% de identidad con los receptores V1b y V2 de otras especies. Este fragmento de 1.3 kb fue introducido en el vector pcDNA3, para realizar transfecciones pasajeras en células COS-1 y estables en células RAT-1. La selección de las celulas RAT-1 establemente transfectadas realizó mediante geneticina. La detección del nivel de transcrito del cDNA V1a de cerdo en las colonias seleccionadas, se realizó mediante RT-PCR cualitativo. En las células COS-1 se obtuvo expresión pasajera del receptor V1 de cerdo, la que fue determinada mediante ensayos de unión con 3H-AVP, obteniéndose una Kd de alrededor de 4 nM, con una unión máxima de 3.8 x 10-11 M correspondiente a aproximadamente 76000 sitios de unión por célula.
Financiado por Fondecyt 8980002 y DIUACH.

EL SODIO COMO AGENTE PRO-NECROTICO Y ANTI-APOPTOTICO EN CELULAS HEPATICAS EN CULTIVO (Sodium as a pro-necrotic and anti-apoptotic agent in cultured liver cells). Hermosilla, T., Castro, J., 1Catalán, M., 1Stutzin, A. y Barros, L.F. Centro de Estudios Científicos, Arturo Prat 514, Valdivia, Chile. 1ICBM, Facultad de Medicina, U. de Chile.

Resultados recientes de nuestro grupo mostraron que la activación oxidativa del canal catiónico no-selectivo (NSCC) sensible a fenamatos es necesaria para el aumento de volumen, el alza descontrolada de Ca2+ citosólico y la muerte necrótica de células hepáticas Clone 91 . En el presente trabajo se investigó el papel del Na+ extracelular, permeante fisiológico principal del NSCC, en la muerte celular. Para ello se expusieron las células al dador de superóxido menadiona (100 µM) en la presencia de 140 mM Na+, NMDG+, K+ o Cs+, lo cual indujo mortalidades de 87 ± 3%, 4 ± 2%, 21 ± 4% y 4 ± 1%, respectivamente. Ya que el K+ y el Cs+ permean eficientemente a través del canal, mientras el NMDG+ es no-permeante1, es posible que el efecto pro-necrótico del Na+ no sea de naturaleza osmótica. En una segunda serie de experimentos se estudio el papel del Na+ en la muerte celular apoptótica estimada como externalización de fosfatidilserina. Según este criterio, la deprivación de suero por 4 h indujo apoptosis en células Clone 9 en alto NMDG+ pero no en alto Na+, K+ o Cs+. Este efecto protector de los cationes permeantes fue dependiente de dosis siendo evidente ya a 28 mM (112 mM NMDG+). En el caso de la apoptosis inducida por radicales libres el Na+ también demostró un papel protector, efecto que también fue evidente a 28 mM. En conclusión, en células Clone 9 tanto la necrosis y la apoptosis dependen del Na+ extracelular, pero en forma contraria. La primera es facilitada y la segunda es inhibida. Los posibles mecanismos detrás de estos hallazgos serán discutidos.
Financiado por Fondecyts 1990782 y 1980718. Se agradece la ayuda del Depto. de Posgrado y Postítulo. U. de Chile (Beca PG/026/99 a T.H.). CECS es un Instituto Científico Milenio.
1Non-selective cation channels as effectors of free radical-induced rat liver cell necrosis. L. F. Barros, A. Stutzin, A. Calixto, M. Catalán, J.Castro, C. Hetz and T. Hermosilla. (submitted to Hepatology, 2000)

INHIBICION DE LA ENZIMA CONVERTIDORA DE ANGIOTENSINA I AUMENTA LA EXPRESION DE CICLOOXIGENASA-2 RENAL (Inhibition of angiotensin I converting enzyme increase renal cyclooxygenase-2 expression), Rodríguez, J, Céspedes, C, Vio, CP. Departamento de Fisiología, Pontificia Universidad Católica de Chile.

La ciclooxigenasa-2 (Cox-2) renal se expresa exclusivamente en el asa ascendente de Henle(TAL). Durante la activación de los sistemas renina-angiotensina y calicreína-cinina (hipoperfusión renal, depleción de sodio) se produce un aumento en la expresión de Cox-2 renal. Con la hipótesis que estas hormonas vasoactivas(angiotensina, bradicinina) regulan la expresión de Cox-2, se trataron ratas Sprague-Dawley por 7 días con un inhibidor de la ECA (Ramipril, 10mg/kg/día), un bloqueador del receptor AT1 de Angiotensina II (Losartan, 40mg/kg/día) y Ramipril más el bloquedor del receptor de Bradicinina B2 (HOE-140, 500µg/kg/día). Por medio de inmunohistoquímica, se confirmó la expresión de ciclooxigenasa-2 renal en el segmento TAL y se observó un aumento significativo (4 veces con respecto al grupo control) en los tres grupos experimentales, sin diferencias significativas entre ellos. Estos resultados permiten postular que la angiotensina II actúa vía receptor AT1 como un inhibidor de la expresión renal de ciclooxigenasa-2, además la bradicinina no participaría en el incremento de la enzima, sin embargo, el menor efecto de Losartan comparado con Ramipril, sugiere la participación de otras hormonas del sistema renina-angiotensina.
Financiado por Fondecyt 1980951

MODULACION DE LA EXPRESION DE LOS TRANSPORTADORES hENT1 (es), CAT-1 Y CAT-2B POR ALTA D-GLUCOSA EN ENDOTELIO FETAL HUMANO. (Modulation of the expression of hENT1 (es), CAT-1 and CAT-2B transporters by elevated D-glucose in human fetal endothelium). Flores, C., Aguayo, C., Arancibia, Y., Parodi, J., Guijarro, M.V.*, Pearson, J.D., Mann, G.E. & Sobrevia, L. Lab. de Fisiología Celular y Molecular (CMPL), Fac. de Ciencias Biológicas, U. de Concepción, Casilla 160-C, Concepción, Chile. *U. San Pablo-CEU, Madrid, España, King's College, U. of London, Inglaterra.

Hiperglicemia induce anormalidades en la regulación del tono vascular asociadas con alteraciones en la señalización celular que regula el transporte de adenosina, L-arginina y la producción de óxido nítrico (NO) endotelial. Niveles altos de D-glucosa extracelular aumentan el transporte de L-arginina (vía CAT-1) y la síntesis de NO, y disminuyen el transporte de adenosina (vía hENT1) en endotelio de vena umbilical humana (HUVEC). Este estudio pretende determinar el efecto de D-glucosa sobre la expresión del RNA mensajero para los transportadores hENT1, CAT-1 y CAT-2B en HUVEC. Alta D-glucosa (25 mM, 24 hrs) disminuye los niveles de mRNA para hENT1, CAT-1 y CAT-2B. Por el contrario, mRNA para la sintasa de NO endotelial (eNOS) se encuentra aumentado. Estudios paralelos demuestran que hiperglicemia disminuye el transporte de adenosina, pero aumenta el transporte de L-arginina, la síntesis de NO y los niveles de proteína para eNOS en HUVEC. Así, la disminución en el transporte de adenosina podría deberse a una menor transcripción del mRNA para hENT1. Por el contrario, el aumento en el transporte de L-arginina inducido por hiperglicemia puede deberse a un aumento en la actividad del sistema CAT-1.
Financiado por FONDECYT 1000354 & 7000354 (Chile) y The Wellcome Trust (Inglaterra). C.A. beca doctorado MECESUP, C.F. y J.P. beca docente Magister Universidad de Concepción, M.V.G. Beca Intercampus doctorado (España).

CGRP AUMENTA LA EXPRESION DE LAS FORMAS MOLECULARES DE ACETILCOLINESTERASA MEDIANTE UN MECANISMO QUE NO DEPENDE DE LA REGION PROMOTORA DEL GEN DE LA SUBUNIDAD CATALITICA. (CGRP increases the expression of the molecular forms of the acetylcholinesterase by a mechanism independend of the promoter activation) Aldunate, R., Merabachvili, G e Inestrosa, N.C. Centro de Regulación Celular y Patología, Departamento de Biología Celular y Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, PUC, Santiago.

CGRP es un neuropéptido presente en la unión neuromuscular, en trabajos anteriores se ha reportado que es capaz de regular la expresión de la acetilcolinesterasa (AChE) en sistemas de cultivo primario de miotubos de rata. El efecto de este neuropéptido se caracteriza por inducir la expresión de la enzima tanto a nivel de proteína de las diferentes formas moleculares como a niveles de su mRNA. El análisis de Northern blot y RT-PCR semicuantitarivo determinó que CGRP induce los niveles de mRNA que codifican para la subunidad catalítica de la enzima, y también es capaz de aumentar el mRNA del tallo colageneso, este último específico de la forma asimétrica de la enzima. Con el objetivo de determinar si CGRP tenia un efecto directo sobre la región promotora de la subunidad catalítica de AChE, se utilizaron líneas celulares transfectadas establemente con construciones que comprenden la región promotora fusionada a un gen reportador, los resultados indican que el tratamiento con CGRP a pesar de modificar significativamente la expresión de AChE endógena de éstas células, no altera la expresión del reportador. Esto sugiere que el mecanismo de regulación de CGRP sobre AChE no actúa sobre su región promotora sino que posiblemente sobre la estabilidad de su mRNA. Financiado por FONDECYT Nº 2980048 (R.A.), Catedra Presidencial y FONDAP Biomedicina Nº 13980001 (N.C.I.).

CARACTERIZACION DE UNA CONDUCTANCIA DE K+ ACTIVADA EN LA REGULACION DEL VOLUMEN CELULAR. (Characterisation of a K+ conductance activated during cell volume regulation). Niemeyer, M.I. & Sepúlveda F.V. Centro de Estudios Científicos (CECS), Valdivia e ICBM, Facultad de Medicina, Santiago, Chile.

La disminución regulada del volumen celular (RVD) tras un estrés hipotónico ocurre por pérdida de K+, Cl- y osmolitos orgánicos intracelulares, y agua. Una conductancia de K+ en células de Ehrlich se activa tras un estímulo hipotónico en ausencia de Ca2+ intracelular, muestra una secuencia de permeabilidades K+ > Rb+ > NH4+ @ Na+ @ Li+ @ Cs+ y es bloqueada por clofilio. Este es también inhibitorio de la RVD. La corriente es independiente de potencial, resistente a un número de inhibidores y sensible al pH extracelular. Estas características son similares a las de una familia de canales de tipo background con dos secuencias de poro en tándem. Dentro de estos tres miembros son sensibles a pH extracelular (TASK-1, 2 y 3). Clonamos TASK-2 de riñón de ratón por PCR con partidores derivados de ESTs murinos y demostrado su presencia en células de Ehrlich. La expresión de mTASK-2 en células HEK-293 generó corrientes de K+ de tipo background, con dependencia de pH externo, inhibición por clofilio, y selectividad iónica similares a lo descrito para células de Ehrlich. mTASK-2 es, por lo tanto, un buen candidato para participar en el fenómeno de RVD.
Niemeyer, M.I. et al. (2000) J. Physiol. 524: 757-767.
Apoyo de Fondecyt 1980718. CECS es un Instituto Milenio.

CLONAMIENTO Y EXPRESION DEL CANAL ClC-5 DE EPITELIO INTESTINAL DE COBAYO (Cloning and expression of ClC-5 channel from guinea pig intestinal epithelia). Cornejo, I. y Cid L.P. Centro de Estudios Científicos CECS, ICBM Programa de Patología, Facultad de Madicina, Universidad de Chile. Patrocinio: Francisco V. Sepúlveda.

ClC-5 es un miembro de la familia ClC de canales de cloruro cuyo gen se localiza en el cromosoma X y que al estar mutado causa pérdida renal de proteínas de bajo peso molecular y calcio (enfermedad de Dent) por mecanismos aún en investigación. Sub-celularmente ClC-5 se ubica en los endosomas co-localizando con la H+-ATPasa vacuolar. Aunque el riñón es el órgano de mayor expresión de ClC-5 éste se encuentra en otros tejidos. Dado el papel del intestino delgado en la absorción de péptidos y calcio estudiamos su expresión en este tejido. Mediante clonamiento basado en homología, se obtuvo el cDNA que codifica para este canal desde epitelio duodenal de cobayo (gpClC-5). El marco de lectura genera una proteína de 746 aminoácidos que presenta un 96% de identidad aminoacídica con las secuencias de humano y rata. El RNA mensajero fue pesquisado en duodeno, yeyuno e íleon por RT-PCR, Northern blot e Hibridación in situ. El tamaño del transcrito es de aproximadamente 9,5 Kb y se distribuye amplia y homogéneamente en las células que conforman el revestimiento epitelial de las tres porciones del intestino delgado. Finalmente, se estudiaron las corrientes generadas por la expresión del gpClC-5 recombinante en células HEK mediante patch clamp.
Fondecyt 1990939
CECS es un Instituto Milenio.

ECOLOGIA

COMUNIDADES DE AVES EN BOSQUES SUCESIONALES DE LA ISLA DE CHILOE (Bird communities in successional forests in Chiloé Island, southern Chile). Díaz, I & J. J. Armesto. Fundación Senda Darwin y Laboratorio de Sistemática y Ecología Vegetal, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, casilla 653 Santiago.

Estamos analizando los requerimientos de hábitats de las aves y la relación entre la diversidad de aves y la estructura del bosque en dos bosques sucesionales tardíos, dos bosques sucesionales de edad media y dos bosques sucesionales tempranos en las cercanías de la Estación Biológica Senda Darwin, Chiloé, desde octubre de 1999. En estos bosques hemos censado y determinado que sustratos usan las aves en estos bosques. Los bosques sucesionales tardíos y tempranos presentan mayor riqueza de especies, pero difieren en su composición. Algunas aves como los Rhinocryptidae estarían asociados a una densa cobertura de sotobosque y troncos caídos, mientras que la Torcaza (Columba araucana) y el Comesebo (Phygarrichas albogularis) habitan fundamentalmente en los troncos y copas de árboles emergentes en bosques sucesionales tardíos. Especies propias de matorrales como el Chercán (Troglodytes aedon) habitan en bosques en estados sucesionales tempranos.

La presencia y abundancia de aves dependería de la presencia de elementos estructurales como troncos caídos, copas emergentes y un sotobosque desarrollado en estos bosques. Desde un punto de vista de conservación, es importante mantener estos elementos estructurales para mantener la diversidad de aves del bosque.
Financiado por Cátedra Presidencial en Ciencias Dr. J. J. Armesto.

¿ES LA CONCENTRACION DE SCHINUS POLYGAMUS (CAV.) CABR. (ANACARDIACEAE) LA CONDICION QUE LO HACE MAS CONSPICUO PARA SUS HERBIVOROS? (Is the concentration of Shinus polygamus (Cav.) Cabr. (Anacardiaceae) the condition which makes it conspicuous to herbivores?) Caballero, P.P.1& H. Lorini2 1Laboratorio de Química Ecológica, Departamento de Ciencias Ecológicas Universidad de Chile, P.O. Box 653, Santiago, Chile. E-mail: paulac@abulafia.ciencias.uchile.cl 2Universidad Mayor de San Andrés, La Paz, Bolivia.

La hipótesis de concentración de recursos plantea que la concentración o dispersión de recursos influye directamente en las poblaciones de insectos herbívoros que los utilizan. Los consumidores de plantas tienden a concentrarse en lugares donde el recurso es abundante y fácil de encontrar. En este estudio se trabajó con Schinus polygamus, un arbusto que presenta un alto nivel de ataque por insectos herbívoros, tanto defoliadores como agalladores. Un análisis de regresión múltiple mostró que no hubo relación entre defoliación y variables asociadas a concentración de recursos (distancia, tamaño, cobertura y número de arbustos vecinos), mientras que hubo correlación significativa entre número de agallas y las mismas variables. Los resultados sugieren que la concentración de recursos puede influir en el nivel de ataque por insectos agalladores, mientras que no lo hace para insectos defoliadores Esta diferencia se discute en relación a la diferente biología de las especies involucradas tales como tamaño, conducta de búsqueda de hospederos o capacidad de vuelo. Diferencias en el grado de especialización también podrían explicar las diferencias entre el ataque de insectos agalladores y defoliadores.
Agradecimientos: MISTRA/IFS, curso interacción planta-insecto 1999.

EFECTOS DEL ARBUSTO RASTRERO Empetrum rubrum Vahl ex Willd. SOBRE EL RECLUTAMIENTO Y SOBREVIVENCIA DE PLANTULAS DE Nothofagus antarctica (G.Forster) Oersted. (Effects of prostrate shrub Empetrum rubrum Vahl ex Willd. on recruitment and survival of Nothofagus antarctica (G.Forster) Oersted seedlings). Henríquez, J.M. Instituto de la Patagonia, Universidad de Magallanes (Patrocinante: Lusk, C.)

El arbusto rastrero Empetrum rubrum ha sido documentado como dominante en los primeros estados sucesionales en valles recientemente deglaciados. Se ha observado la presencia plántulas de Nothofagus antarctica (ñirre) bajo la cubierta del arbusto. El presente estudio evalúa los posibles efectos del arbusto sobre el reclutamiento y sobrevivencia de las plántulas de ñirre.

En sitios sucesionales tempranos del Glaciar Nueva Zelandia, Tierra del Fuego, se delimitó una parcela de 10x10m en donde se sortearon 20 cuadrantes de 1m2 cubiertos con murtilla y 20 sin cobertura del arbusto, procediéndose luego a contar la presencia de plántulas de ñirre. Se determinó que el reclutamiento es mayor en los cuadrantes cubiertos con murtilla que en aquellos sin la presencia del arbusto (p< .05).

Se realizó un experimento de manipulación para evaluar la sobrevivencia de las plántulas de ñirre. Se marcaron un total de 60 plántulas germinadas naturalmente bajo la cubierta de Empetrum rubrum. A 30 de ellas se les eliminó la cubierta (10cm de radio) y a las restantes se le mantuvo la condición. Se evaluó la sobrevivencia al año siguiente, encontrándose diferencias significativas (p< .05) entre ambas condiciones. La sobrevivencia de las plántulas que mantuvieron la cubierta arbustiva fue mayor.

Los resultados avalan la hipótesis que Empetrum rubrum favorecería el reclutamiento y sobrevivencia de las plántulas de Nothofagus antarctica en sitios sucesionales tempranos.
Proyecto Fondecyt 2000134.
Dirección Actual: Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Casilla 160-C.

DEPOSITACION ATMOSFERICA E INTERACCIONES DEL DOSEL Y SUELO EN UN BOSQUE DE Nothofagus EN EL SUR DE CHILE (Atmospheric deposition and canopy-soil interactions in a Nothofagus forest in southern Chile). 1Oyarzún C.E., 2Godoy R., 3Gerding V. & 3Rosales L. Institutos de Geociencias1, Botánica2 & Silvicultura3, Universidad Austral de Chile, Valdivia, Chile (Patrocinio: R. Godoy).

Las características químicas de la precipitación incidente pueden ser considerablemente alteradas después de atravesar el dosel de los bosques. El agua que alcanza el piso del bosque puede ser enriquecida o empobrecida en ciertos iones dependiendo de la naturaleza del dosel.

La química de las precipitaciones, precipitación directa, escurrimiento fustal, solución del suelo y escorrentía fueron estudiadas durante el período mayo 1999-abril 2000, en un bosque de Nothofagus betuloides en una microcuenca experimental, Parque Nacional Puyehue,(41º S, 72º O, 920 m s.n.m.).

La precipitación fue de 7111 mm·año-1. La depositación de nitrógeno inorgánico (NO3-N + NH4-N) fue de 3,6 kg·ha-1·año-1 y las salidas vía escorrentía correspondieron a 0,9 kg·ha-1 ·año-1. En cambio, las salidas de los cationes (K+, Na+, Ca2+ y Mg2+) fueron significativamente mayores que las entradas via precipitaciones. Los valores mensuales de intercambio neto del dosel, precipitación neta menos depositación humeda, mostraron valores positivos para los cationes y nitrato especialmente en los meses de invierno, indicando fijación y/o enriquecimiento del dosel. Los factores de enriquecimiento y/o empobrecimiento del nitrógeno inorgánico en el dosel del bosque, fueron correlacionados con la presencia de líquenes epífitos de los géneros Peltigera, Pseudocyphellaria y Sticta.
Proyecto Fondecyt 1990694.

ACTIVIDAD BIOLOGICA EN SUELOS DE BOSQUE DE Nothofagus betuloides, ANTILLANCA, PARQUE NACIONAL PUYEHUE (Biological activity in soils of Nothofagus betuloides forest, Antillanca, Puyehue National Park). Godoy,R.1, Zamorano,J.P.1, Leiva,S.2, Alvear,M3. 1Inst. Botánica, 2Inst. Microbiología, Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile, Valdivia. 3Depto. Ciencias Químicas, Universidad de La Frontera, Temuco.

El ciclaje interno de nutrientes en el bosque y la productividad son sustentados principalmente por la descomposición de materia orgánica. Así, la medición de la actividad microbiana constituye un excelente bioindicador de la fertilidad del suelo y ciclaje de nutrientes en el ecosistema.

Como parte de investigaciones sobre procesos biogeoquímicos en bosques de N.betuloides ubicados en Antillanca, P.N.Puyehue (41°S, 72°O, 900 m.s.n.m) se estudio la variación temporal (mayo 1999-julio 2000) de parámetros indicadores de actividad microbiana edáfica y su relación con procesos de descomposición de hojarasca. Se analizaron respiración actual y potencial, contenido de N-biomásico y actividades enzimáticas (deshidrogenasa, fosfatasa).

Todos los parámetros presentaron sus mayores valores en el otoño-invierno del 2000. La respiración actual del suelo varió entre 71,97 y 140,68 mgCO2·m-2·h-1 , con el máximo en julio de 2000. La respiración potencial alcanzó su máximo en mayo de 2000 (1,16 mgCO2·g·24 h-1). El N-biomásico aumentó desde 63,1 (mayo 1999) a 475 µgN·g-1 (julio 2000). La actividad deshidrogenasa fluctuó entre 93,43 y 490,09 µgTFF·g-1·24 h-1 (julio 1999 y julio 2000, respectivamente). La actividad de fosfatasa fue alta y presentó su máximo valor en julio de 2000 (5484 µgPNF·g-1). Los resultados se discuten en relación a variables microclimáticas y aporte cuali-cuantitativo de hojarasca al suelo.
Proyecto Fondecyt 1990694

ESTABLECIMIENTO DE PLANTULAS SOBRE MATERIAL LEÑOSO EN DESCOMPOSICION EN BOSQUES SUCESIONALES DE CHILOE, CHILE (Woody seedling colonization of decaying logs in early forest succession in Chiloé, Chile). Papic, C. & J. J. Armesto. Fundación Senda Darwin y Laboratorio de Sistemática y Ecología Vegetal, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

Analizamos el patrón de establecimiento de especies leñosas sobre troncos en descomposición en un bosque en fase sucesional temprana (<20 años) en la Isla de Chiloé (41º 50' S) postulando que el establecimiento y sobrevivencia de plántulas arbóreas es mayor sobre material leñoso, asociada a mejores condiciones de humedad. Estimamos la cobertura de especies arbóreas por tipo de substrato (detritus leñoso, musgos, y hierbas) encontrando una correlación positiva entre el número de plantas arbóreas colonizadoras y el porcentaje del suelo cubierto por detritus leñoso. Más del 70% de las plantas arbóreas estaban asociadas a cúmulos de material leñoso elevados por sobre el promedio del nivel del suelo. El porcentaje de sobrevivencia de plántulas arbóreas transplantadas fue mayor sobre material leñoso en descomposición que en el suelo. Los substratos leñosos en estados avanzados de descomposición presentaban menores fluctuaciones diarias en sus contenidos de humedad y una menor tasa de desecación en períodos sin lluvia que el suelo desnudo. Los arbustos no mostraron asociación con substratos elevados, por lo que serían más tolerantes al anegamiento y desecación del suelo que los árboles. El detritus leñoso en bosques perturbados favorecería la colonización de especies arbóreas, previniendo la monopolización del substrato por especies arbustivas y reduciendo los efectos negativos del anegamiento sobre la colonización en los bosques de Chiloé.
Financiado por Proyecto Fondecyt 1990946 y por INCO-DC, Unión Europea.

EFECTO DEL AGUA Y EL NITROGENO SOBRE LA ABUNDANCIA Y ESTRUCTURA DE LA COMUNIDAD MICROBIANA EN SUELOS ARIDOS DE LA IV REGION DE CHILE (Effect of water and nitrogen on abundance and structure of microbial community in arid soil of IV Región, Chile). Aguilera, L.E., Gutiérrez, P.L., Meserve, J.R., Cea, A. y Araya M. Facultad de Ciencias, Departamento de Biología, Universidad de La Serena, Chile.

En el Parque Nacional Fray Jorge se está monitoreando desde el año 1997 las fluctuaciones de microorganismos del suelo. Se ha encontrado que la cantidad de bacterias y hongos varían temporal y espacialmente, y que las fluctuaciones numéricas de éstos se relacionan con la cantidad de nutrientes y agua del suelo. En el presente estudio se evaluó el efecto de adiciones controladas de nitrógeno y agua sobre la abundancia y estructura de la comunidad microbiana de suelos rizósfericos de Porlieria chilensis (Guayacán). Durante abril del 2000, en el Parque Fray Jorge se colectó suelos rizosféricos de P. chilensis los que fueron dispuestos en recipientes de plástico. Los tratamientos consistieron en adición de nitrógeno, agua, nitrógeno-agua y control. Durante el tiempo que duró el experimento se cuantificó el número de bacterias aeróbicas mesófilas heterotróficas y hongos filamentosos y levaduriformes. Adicionalmente, al término del estudio se cosechó la estrata herbácea y se cuantificó su composición y biomasa seca. El nitrógeno y el agua incrementaron la cantidad de los microorganismos estudiados, modificaron su abundancia específica y se relacionaron positivamente con la biomasa vegetal.
Financiamiento: Proyecto Fondecyt Nº 1000041

TAMAÑO DE SEMILLAS Y GRANIVORIA EN Cryptocarya alba (LAURACEAE) ¿SELECCION FRECUENCIA-DEPENDIENTE?. (Seed size and granivory in Cryptocarya alba (Lauraceae): frequency-dependent selection?. Celis, J. L. & Bustamante, R.O. Departamento de Ecología, Fac. de Ciencias, U. de Chile, Casilla 653, Santiago. jcelisdi@icaro.dic.uchile.cl, rbustama@abello.dic.uchile.cl.

El tamaño de la semilla afecta la probabilidad de ser consumida por granívoros. Semillas grandes serían preferentemente consumidas respecto de semillas más pequeñas. Sin embargo, la frecuencia relativa de las diferentes clases de tamaños de semillas, podría modificar estas respuestas selectivas. Así, los granívoros podrían preferir a las clases de tamaños más frecuentes más que semillas de tamaño grande. Pusimos a prueba esta predicción, realizando un experimento de campo con semillas de Cryptocarya alba (Lauraceae), en el Parque Nacional La Campana (V Región).

Se dispusieron semillas pequeñas (0.01 - 0.61 gr, percentil 15% inferior) y grandes (1.61 - 2.8 gr, percentil 15% superior) a una densidad constante (50 semillas/m2), considerando una oferta de cinco proporciones de semillas grandes: 0.1, 0.25, 0.5, 0.75 y 0.9. Al cabo de 7 y 15 días, se evalúo la proporción de semillas remanentes grandes y pequeñas.

Los resultados indican que en todos los tratamientos, las semillas grandes son preferentemente consumidas aún cuando su abundancia relativa sea baja. Estos resultados sugieren que los granívoros

estarían actuando como fuerzas selectivas en contra de las semillas grandes (selección frecuencia dependencia anti-apostática), favoreciéndose así la adecuación biológica de las semillas de menor tamaño.
Financiado por FONDECYT 1980750

BIOLOGIA CELULAR

ARABIDOPSIS COMO MODELO PARA ESTUDIAR MOVIMIENTO DE CLOROPLASTOS Y MITOCONDRIAS EN RESPUESTA A SEÑALES DEL MEDIO AMBIENTE Y DEL DESARROLLO. (Arabidopsis, a model system to study chloroplast and mitochondria movement in response to environmental and developmental stimuli). Mercado, A.*, Morales, A., Sánchez, C., Muñoz, P. Laboratorio de Dra. Lee Meisel*, Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, Las Palmeras 3425, Ñuñoa. Patrocinio: Dr. Osvaldo Alvarez

El cultivo de plantas transgénicas está revolucionando la industria agrícola. Pero existe preocupación, ya que los transgenes podrían escapar al ambiente a través de la dispersión en el polen. Para evitar este problema, se ha propuesto transformar el genoma de los plastidios en vez del nuclear.

Se ha demostrado, en numerosos organismos, que el citoesqueleto juega un papel activo en la localización subcelular de cloroplastos y mitocondrias. Sin embargo, se conoce poco acerca de los mecanismos que controlan la herencia de estos organelos, de su interacción con el citoesqueleto y de la manera en que se regula su movimiento.

Nuestro laboratorio utilizará Arabidopsis como un sistema modelo para estudiar los mecanismos que regulan la herencia y movimiento subcelular de cloroplastos y mitocondrias en respuesta a señales medioambientales y de desarrollo. Específicamente, estamos implementando dos sistemas experimentales que permitirán la visualización del movimiento de estos organelos in vivo e in vitro. Además, realizaremos estudios bioquímicos para identificar las proteínas asociadas a la regulación de este movimiento y su relación con el citoesqueleto.
(Financiamiento: Fondecyt #1000812)

IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION DE UNA PROTEINA ASOCIADA A LA RED TRANS-GOLGI MEDIANTE AUTOANTICUERPOS. (Identification and characterization of a trans-Golgi network protein by autoantibodies). Mella, R., Mardones, G., y González A. Dpto. de Inmunología Clínica y Reumatología. Fac. Medicina. Depto. Biología Celular y Molecular, Fac. Ciencias Biológicas, y FONDAP, P. Universidad Católica de Chile y MIFAB.

Las proteínas asociadas a membranas de la red Trans-Golgi (TGN) tienen gran interés por la función central de este organelo en la ruta exocítica. En este trabajo encontramos un suero autoinmune que reconoce un componente en el aparato de Golgi altamente conservado. Experimentos de colocalización con marcadores tales como b-COP, a-Manosidasa II y TGN38 y tratamiento con Brefeldina A (BFA) y Nocodazol sugieren que el autoantígeno se distribuye preferentemente en la red Trans-Golgi (TGN). El suero autoinmune reconoce en membranas y citosol una proteína de 350 kDa que al parecer forma parte de un complejo estabilizado por puentes disúlfuro, y que se asocia a Golgi como otras proteínas periféricas a juzgar por la capacidad de ser extraída con carbonato de sodio y fuerza iónica. Además, en membranas el anticuerpo reacciona con otras proteínas. Finalmente, el tratamiento de células en cultivo con cloroquina, monensina o cloruro de amonio induce cambios en la distribución del autoantígeno hacia un compartimento endosomal, sugiriendo que es parte de la maquinaria de transporte vesicular.
(FONDECYT # 2990027, 1980974, FONDAP 19380001, y Cátedra Presidencial en Ciencias).

EXPRESION DE REST EN NEURONAS ESPINALES PRIMARIAS DE Xenopus laevis. (REST expresion in Xenopus laevis primary spinal neurons) Olguín, P. y Kukuljan, M. ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Patrocinio: Dr. Benjamín Suárez Isla .

El factor silenciador de la transcripción RE1 (REST) reprime diversos genes neuronales específicos en líneas celulares no neuronales. Otros trabajos describen su expresión en tejidos no neuronales y durante la embriogénesis temprana de vertebrados en células indiferenciadas progenitoras de neuronas. En nuestro laboratorio hemos detectado a través de hibridación in situ la coexpresión del mRNA de REST y de algunos de sus genes blanco en el tubo neural de Xenopus laevis. Nuestro objetivo fue determinar si REST se expresa en neuronas primarias del tubo neural y si esta se relaciona con su estado de diferenciación morfológica y características electrofisiológicas. Como modelo de estudio utilizamos cultivos primarios de tubo neural de Xenopus laevis, caracterizamos las corrientes iónicas de neuronas en distintos estadios de diferenciación morfológica mediante patch clamp, y posteriormente detectamos la presencia del mRNA de REST mediante RT-PCR de célula única. Nuestros resultados indican que el mensajero de REST se expresa tanto en neuronas primarias "jóvenes" como en neuronas "adultas", lo que podria indicar funciones no descritas previamente para este factor.

LA PROTEINA DE TRANSMEMBRANA NRS ES ESCENCIAL PARA EL DESARROLLO DE LA CELULA VITELINA EN PEZ CEBRA. (The transmembrane protein NRS is essential for yolk cell development in zebrafish). Young, R.M. y Allende, M.L. Departamento de Biología y Millennium Nucleus in Developmental Biology, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. Casilla 653, Santiago.

Mediante mutagenesis insercional con vectores retrovirales en pez cebra, hemos identificado un mutante letal recesivo. El fenotipo consiste en la aparición de un material opaco en la extensión de la célula vitelina en el segundo día post fertilización (dpf), que luego se extiende a todo el vitelo. Al 4to dpf, los embriones mueren producto de una necrosis masiva. El gen mutado se identificó usando PCR inverso y exon trapping. La inserción mutagénica ocurrió a 4 kb 5' del inicio del marco de lectura del gen que llamamos not realy started (nrs) y cuya secuencia deducida indica que es una proteína de membrana que presenta alta homología a genes que confieren resistencia a tetraciclina en bacterias y a transportadores de azúcares. Rastreos en bases de datos indican que también existen genes homólogos en Arabidopsis, ratón y humano. Análisis del mRNA de nrs mediante RT-PCR muestra que es un gen materno que se expresa hasta estadíos adultos y que está ausente en mutantes homocigotos nrs. Mediante hibridación in situ observamos que el mRNA de nrs se expresa en la región donde se ubican los nucleos sinciciales del vitelo. En base a estos resultados proponemos que nrs es un transportador involucrado en el paso de nutrientes desde el vitelo hacia el embrión.
Financiado por FONDECYT 3970014 y 1000879 e Iniciativa Científica Milenio #P99-137-F; R. Y. es becario CONICYT.

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD PROLIFERATIVA Y METABOLICA Mesocestoides corti, DURANTE SU DIFERENCIACION POST-LARVAL. (Determination of the proliferative and metabolic activity of M. corti, during the post-larval differentiation).Espinoza, I.; Ferrer, S; Galindo, M. y Galanti, N.. Lab. de Biol. Molecular, Prog. de Biol. Celular y Molecular, I.C.B.M., Facultad de Medicina, Universidad. de Chile

M.corti, es un representante del phylum platelminto, presenta una forma de reproducción asexuada por yemación no descrita en otros Cestodos. En su ciclo de vida participan diferentes hospederos que albergan su forma larval o adulta. Sin embargo, no existe mucha información sobre la diferenciación y desarrollo de este organismo. En nuestro laboratorio, interesados en estudiar estos procesos, implementamos un sistema de cultivo in vitro que permite inducir el desarrollo de M. corti hasta el estado adulto.

Con el fin de conocer la actividad proliferativa y metabólica de M. corti durante su diferenciación post-larval, se realizó por un lado, la incorporación y cuantificación de timidina-H3 en el ADN y un análisis autorradiográfico en cortes histológicos y por otro lado, se determinó el consumo de oxígeno y se cuantificó la incorporación de leucina-H3 en la síntesis de proteínas. Los datos disponibles muestran una disminución de la actividad proliferativa del parásito al 5º día post-tratamiento con tripsina, coincidente con el día en que se produce la segmentación.

Estos resultados sugieren que ambos procesos están al menos, temporalmente desacoplados durante el desarrollo del parásito. Este análisis, nos ha permitido identificar territorios celulares en M. corti que están en activa proliferación y que pueden participar en la ulterior diferenciación del mismo.
Financiado por Proyectos: Andes-Antorcha-Vitae, SAREC, DID I013/2 y DID-Enlace

GENES INDUCIDOS POR ACLIMATACION AL FRIO EN TRIGO DE INVIERNO Y DESCHAMPSIA ANTARCTICA. (Genes induced by cold acclimation in winter Wheat and Deschampsia antarctica). Garcés1, M., Gidekel1,M. ,Cuba1 M., Alberdi2, M., Bravo3 L.A, Corcuera3 L.J. y Gutiérrez1, A. 1Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular Vegetal, Instituto Agroindustria, Universidad de La Frontera, Temuco; 2Instituto de Botánica, Universidad Austral de Chile, Valdivia; 3Departamento de Botánica. Universidad de Concepción, Concepción.

Las plantas aumentan su tolerancia al congelamiento cuando son expuestas a baja temperatura, expresando genes que les permiten sobrevivir al invierno. Deschampsia antarctica Desv. es la única gramínea que ha colonizado en forma natural la Antártica y posee una gran tolerancia al congelamiento(TL50~-27°C). El trigo invernal Triticum aestivum L.cv Norstar posee una TL50 de -19ºC. En este trabajo se estudia la inducción de genes por frío en estas dos especies tolerantes.

Se obtuvieron genes heterólogos inducidos por aclimatación al frío usando cDNAs diferenciales de D. antarctica como sondas en una biblioteca de expresión en el fago Lambda zap de T. aestivum. Se aislaron 9 clonas diferenciales con alta homología a proteínas involucradas en la aclimatación al frío. De éstas, 4 proteínas actúan en la aclimatación al frío(WCOR719, WCOR413, ELIP, LEA), 3 en la fotosíntesis (Rubisco, Rubisco activasa, plastocianina) y 2 en transducción de señales(mio-inositol 1-fosfato sintasa, proteína cinasa rica en leucina). Mediante análisis tipo northern se analizó su expresión bajo condiciones de aclimatación al frío en D. antarctica
FONDECYT 1000610

EL TRANSPORTE ACTIVO DE CALCIO EN EL APARATO DE GOLGI DE CELULAS DE ARVEJA ES INHIBIDO POR TAPSIGARGINA (Active calcium uptake in the Golgi apparatus of pea cells is inhibited by thapsigargin). *Ordenes V.,#Wolff D.,#Orellana A.*Universidad de Concepción. #Departamento de Biología,Facultad de Ciencias,Universidad de Chile.

Se ha demostrado que la vacuola y el retículo endoplásmico son grandes reservorios intracelulares de calcio de la célula vegetal. Estudios previos de nuestro laboratorio, sugieren que el aparato de Golgi(AG) también posee mecanismos de acumulación de este ion.

Realizando fraccionamiento subcelular de tejido etiolado de arveja en gradientes de sacarosa, se obtuvo fracciones enriquecidas en membranas de distintos organelos. En estas fracciones se determinó la distribución subcelular del transporte activo de calcio midiendo el flujo de 45Ca2+. La actividad máxima de transporte fue detectada en una de las fracciones, ésta colocalizó con el marcador de AG y con el de vacuola.

Para demostrar que el transporte de calcio corresponde al AG, se separaron las membranas de la fracción en un gradiente de sacarosa y se comparó la distribución de los marcadores de organelos con el transporte activo de calcio en todo el gradiente.

Los resultados indican que el transporte colocaliza sólo con el marcador de AG. La caracterización de este transporte sugiere que se trata de una bomba de calcio parecida a las tipo SERCA de mamíferos,ya que es inhibida por tapsigargina (1 µM), presenta alta especificidad por ATP, no es estimulado por calmodulina y su Km es 22 nM.
AGRADECIMIENTOS: FONDECYT 1000675

CARACTERIZACION DE DOS PUTATIVAS BOMBAS DE CALCIO IDENTIFICADAS MEDIANTE EL PROYECTO GENOMICO DE ARABIDOPSIS (characterization of two plasma membrane calcium ATPases in Arabidopsis thaliana, CAC1 and CAC2). Meisel, L., Bruno, C., Urbina, D. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, Las Palmeras 3425, Ñuñoa. Patrocina: Dra. Liliana Cardemil

Como las plantas no son capaces de moverse en respuesta a estímulos externos, su capacidad de percibir las condiciones ambientales es vital. Evidencias recientes sugieren que Ca2+ juega un papel clave en la transducción de estímulos externos a nivel celular. Se han detectado fluctuaciones en las concentraciones de Ca2+ citosólico en respuesta a factores de stress tales como sequía, salinidad, daño físico e infección por patógenos. Estas fluctuaciones en concentraciones de Ca2+ pueden estimular numerosas cascadas de transducción de señales a través de la regulación de actividades enzimáticas, activación/inactivación de canales iónicos, alteración de la expresión génica y cambios en el citoesqueleto.

El incremento en el nivel de Ca2+ citosólico ocurre mediante la activación de canales específicos para Ca2+, ubicados en la membrana plasmática o en endomembranas. Este incremento es transciente y se recupera el nivel basal cuando se activan bombas de Ca2+ en la membrana plasmática o membranas internas. En nuestro laboratorio estamos estudiando dos Ca2+-ATPasas putativas que han sido identificadas a través del proyecto genómico de Arabidopsis. En este trabajo presentamos la caracterización de estas bombas de calcio y su posible participación en procesos de transducción de señales en plantas.
(Financiamiento: U. de Chile, DID Proyectos de Iniciacion #I010-98/2)

FISIOLOGIA

EXPRESION DE ACUAPORINA-2 EN EL COLON DE RATA: EFECTO DE LA RESTRICCION DE AGUA (Aquaporin-2 expression in the rat colon: effect of water deprivation). P. Gallardo & F.V.Sepúlveda. ICBM, Facultad de Medicina, U. de Chile y Centro de Estudios Científicos (CECS), Valdivia.

La vasopresina (AVP) participa en la regulación de la osmolalidad plasmática estimulando la inserción de acuaporina 2 (AQP-2) en la membrana apical y su síntesis de novo. En el colon de rata, AVP estimula la absorción de NaCl y agua a través de un mecanismo desconocido. Por ello, se investigó la presencia de AQP-2 mediante RT-PCR en colon y su posible regulación por la ingesta de agua. Ratas macho adultas (n = 5), manejadas de acuerdo a las normas NIH, se sometieron a 96 h de restricción de ingesta de agua. El grupo control (n = 5) recibió agua ad libitum. Se obtuvo colon distal, riñón, intestino delgado e hígado para realizar estudios de hibridación in situ (HIS), inmunoblot e inmunohistoquímica. Idéntico tratamiento recibió otros dos grupos (n=10 c/u), usadas en estudios de absorción colónica de agua. La localización del mRNA de AQP-2 se investigó por HIS no radioisotópica. En colon distal, la señal se localizó en el epitelio de las criptas y en menor grado en el epitelio superficial; fue más abundante en tejido de ratas deshidratadas que controles. Estudios de inmunofluorescencia por doble marcaje, mostraron que la inmunofluorescencia para AQP-2 colocaliza en la membrana apical con la misma para la H/K-ATPasa. Estudios de inmunoblot en fracciones de membrana de riñón y colon, mostraron mayor abundancia de AQP-2 en animales deshidratados que controles. La absorción colónica de agua, se vio aumentada en los animales deshidratados respecto de los controles (89.32 ± 9.9 vs 65.1 ± 7.84 µL/hr cm2, promedio ± DE). Estos resultados demuestran la presencia de AQP-2 en la membrana apical del epitelio colónico. Se sugiere que el colon es un sitio de control de la absorción de agua, a través de la regulación de los niveles de AQP-2.
Financiamiento Fondecyt 299008.

INCORPORACION DE CANALES DE K+ DEPENDIENTES DE VOLTAGE A LA MEMBRANA PLASMATICA. (Incorporation of Voltage-Gated K+ Channel to the plasma membrane). Torres-Salazar D1,2, Neely . A.1,2, Vélez P.1,2 y Naranjo D2,3. 1Dep. de Fisiología. Fac. de Ciencias U. de Valparaíso. 2Centro de Neurociencia Molec. Y Cel. De Valparaíso. 3Instituto de Fisiología Celular UNAM.

Se desarrolló un modelo para estudiar los mecanismos de inserción de proteínas de membrana. Se inyectaron ovocitos de Xenopus con cRNA de canales de K+ tipo Shaker y su nivel de expresión se midió registrando la corriente iónica. El transporte de proteínas a la membrana fue bloqueado transfiriendo los ovocitos a 4oC durante 12 horas luego de 24 horas de expresión a 17.5oC. Estos ovocitos fueron montados en la cámara de registro a 4 oC. Se registraron corrientes iónicas durante pulsos de 25ms a +40mV a 0.017 Hz. Luego de 5 pulsos se llevó el ovocito a temperatura ambiente. En 60 minutos, las corrientes aumentaron 3 a 7 veces. Mediciones de capacitancia revelan que la cantidad de membrana puede mantenerse o disminuir sugiriendo un proceso de endocitosis. Para discriminar entre ambas alternativas y corroborar que el aumento de la corriente se debe a la inserción de nuevos canales se está estudiando el efecto de BAPTA,GTP-gS y acido okadaico. Estos resultados validan el uso de canales activados por voltaje expresados en ovocitos como modelo general para desentrañar cómo se insertan las proteínas en la membrana plasmática.
Financiamiento Fondecyt 1991016, 1991008, ICM-Mideplan P88-037-F, NIH-GM53196, Fundación Andes.

ESTUDIO DE FOTOCORRIENTES EN BASTONES DE PLEURODEMA THAUL: SENSIBILIDAD ESPECTRAL Y ABSOLUTA. (Rod photocurrents in toad Pleurodema thaul: Spectral and Absolute Sensitivity). Palma F. y Palacios A.G. Dep. Fisiología, ICBQ, Fac. Ciencias, U. Valparaíso, Centro Neurociencia Molecular y Celular de Valparaíso.(Patrocinio: Dr. J.Bacigalupo)

En el sistema visual de vertebrados, el rango espectral visible se relaciona con el tipo de retinal asociado al pigmento visual de sus fotorreceptores, los cuales se relacionan con el hábitat. Al respecto existen muy pocos estudios en bastones de anfibios endémicos de Chile. El objetivo de este trabajo fue caracterizar el tipo de pigmento visual de este anfibio con método electrofisiológico y compararlo con estudios similares realizados en otros anuros. Para este efecto se utilizó la técnica de pipeta de succión en bastones de animales adultos(n=5), recolectados en la VII región. Los resultados muestran un máximo de sensibilidad en 501 nm (± 3.2, n=34) y los datos se ajustan a un polinomio cuyos coeficientes predicen un pigmento visual de tipo retinal A1 (r = 0.968). Por otra parte, el valor de sigma, que representa el número de fotones necesarios para suprimir el 50% de la fotocorriente total circulante, fue de 2.3 fotones µm-2 (2 animales y n=8 bastones). La amplitud media de las fotocorrientes obtenidas fue de 4.3 pA (rango 2.7-7.5 pA).Financiamiento Fondecyt # 1970162, 1000396, Fundación Andes, Iniciativa Milenio Mideplan P99-037-F.

VENENO DIARREICO DE MARISCOS UN PROBLEMA NATURAL Y TECNOLOGICO. (Diarrhetic shellfish poisoning, a natural and tecnology problem). García,C.;Lagos,N. Laboratorio de Bioquímica de Membranas, Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Casilla 70005 Correo 7 Santiago.

Las toxinas marinas presentes en Chile endémicamente son el veneno paralizante de mariscos (VPM) y el veneno diarréico de mariscos (VDM), ambos cada año producen grandes daños económicos, ecológicos y salud pública, lo que se traduce cada año en perdidas que sobrepasan los millones de dólares. Las técnicas capaces para identificar los venenos, resultan en forma optima para el caso del VPM, siendo capaz de evitar el consumo de los mariscos contaminados evitando así intoxicaciones masivas por parte de la población. Sin embargo para el VDM las técnicas existentes son poco confiables, siendo el ensayo enzimático y la Cromatografía Liquida de alta Resolución (HPLC) los únicos medios capaces para detectar este tipo de veneno. Es está última la única capaz de detectar que tipo de toxina está involucrada en el VDM, siendo estás el ác. okadaico y dinofisistoxina, para ello estás toxinas primero deben hacerse fluorescentes para ser detectadas por HPLC, ya que ellas son opacas y por lo tanto no son detectables por UV ni espectrofotometria. La técnica consiste en pegar un cromóforo a las toxinas, resultando un complejo cromóforo-toxina siendo entonces cada toxina identificada por HPLC de acuerdo a su tiempo de migración, que es específico para cada una de ellas. El inconveniente técnico es que la gran mayoría de cromóforos existentes son muy sensibles a la luz, temperatura y poco estables en el tiempo, es por ello que se han sintetizados una serie de homólogos estructurales a las cromóforos ya existentes iniciándose sus estudios de estabilidad y selectividad a la toxinas del VDM.
Supported by Grant FONDECYT 1961122

TOXICOCINETICA DE TOXINAS PARALIZANTES (Toxicokinetics of paralytic toxins) Andrinolo D., Iglesias V. y Lagos N. Lab. de Bioquímica de Membranas, ICBM, Facultad de Medicina. U. de Chile Conicyt

El Veneno Paralizante de los Molusco (VPM), se encuentra formado por más de 26 toxinas de naturaleza no proteica, hidrosolubles y bajo peso molecular. Se dividen en tres grupos de acuerdo a la carga neta que presentan a pH neutro, el grupo de las saxitoxinas (STXs) +2, el grupo de las gonyaulatoxinas (GTXs) +1, y el grupo de sulfocarbamoilsaxitoxina (C1-C4) 0.

En el mar son producidas por dinoflagelados de los géneros, Alexandrium sp, Piridynium sp., y Gymnodinium sp. y acumuladas por moluscos bivalvos filtradores, quienes al concentrar estas toxinas, se convierten en transvectores y al ser consumidos por el hombre producen la enfermedad paralítica aguda, la cual presenta un cuadro clínico muy variable en intensidad y duración, llegando incluso a causar la muerte

Al comer mariscos contaminados las toxinas son absorbidas hacia el torrente sanguíneo, sin estar descrito hasta el momento cual sería el mecanismo de transporte, y como se distribuyen en el cuerpo ejerciendo su efecto tóxico.

Nuestra hipótesis es que el epímero GTX 2/3, se absorbe a nivel intestinal y administrada por vía oral a gatos, presenta una absorción y eliminación de primer orden. La concentración máxima (Cmax) y el tiempo en el cual se alcanza (Tmax), coinciden con la máxima expresión de los signos de intoxicación, tales como disminución del flujo urinario y presión arterial.

UN INHIBIDOR DE AGMATINASA EN CEREBRO DE RATA (An agmatinase inhibitor in rat brain). Uribe, E., Enriquez, S., Carvajal, N. Departamento de Biología Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas,Universidad de Concepción.

La agmatinasa (EC 3.5.3.11) cataliza la hidrólisis de agmatina en putrescina y urea. Recientemente, se ha asignado un rol como neurotransmisor a la agmatina, sugiriéndose que sus niveles serían regulados por la agmatinasa. La aparente discordancia entre esto y la baja actividad agmatinásica detectada en cerebro (100 ± 20 nmol urea/h/mg de proteína), podría ser explicada por resultados que hemos obtenido en nuestro laboratorio. En efecto, hemos detectado un inhibidor de agmatinasa en homogenizados de cerebro de rata, pero no en macrófagos, que expresan importante actividad agmatinásica. El inhibidor no afecta a la arginasa, pero inhibe competitivamente a la agmatinasa de Escherichia coli. Es resistente a tripsina y a calentamiento a 100 oC por 5 min. En un homogenizado de cerebro, aparece como dos especies separables por filtración molecular. El calentamiento previo del homogenizado a 100 ºC determina la desaparición de la especie de mayor tamaño molecular, que correspondería al inhibidor unido a agmatinasa. Sugerimos que la presencia de este inhibidor explicaría los bajos niveles de actividad agmatinásica detectados en homogenizados de cerebro y que su interacción con la agmatinasa constituye un mecanismo regulatorio para la enzima y, por lo tanto, para los niveles cerebrales de agmatina. La caracterización molecular del inhibidor y su interacción con la agmatinasa, actualmente en curso, contribuirán a clarificar este importante aspecto regulatorio.
Fondecyt 2990039

HIPOXIA HIPOBARICA AGUDA PRODUCE OXIDACION DE MEMBRANAS DE ERITROCITOS HUMANOS (Acute hypobaric hypoxia produces oxidation of human erythrocyte membranes). González, G., Astete, R., Gonzalez, G.A., Sandoval, M. y Behn, C. Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Instituto de Química, Facultad de Ciencias, Universidad Católica de Valparaíso y CEMAE-FACH.

En individuos expuestos a hipoxia hipobárica aguda (HHA) hemos descrito cambios en lípidos y proteína banda 3 de membranas de eritrocitos. Como hay evidencias que HHA representa una condición de estrés oxidativo, se estudia si hay cambios del transporte aniónico por banda 3 correlacionados con mayor oxidación de lípidos (TBARS) y de proteínas (grupos carbonilos y grupos -SH) en membranas de eritrocitos.

En una cámara hipobárica voluntarios se exponen 20 minutos a hipoxia equivalente a una altura de 15.000 pies sobre el nivel del mar. Se evaluó el transporte aniónico antes y después de la HHA, por eflujo de NBD-taurina desde eritrocitos previamente cargados. Después de HHA, el eflujo de NBD-t estudiado en condiciones asimétricas (Cl- interno-SO4externo) presenta una disminución de la velocidad inicial, del tiempo de latencia y de la velocidad máxima (n=6) lo que indicaría una menor eficiencia del transportador. En las membranas (n=3), la HHA aumentó tanto la formación de TBARS (42.1± 5.6 % ) como la de carbonilos (48.7±20.5%) y disminuyeron los grupos -SH (31± 7.8%). Estos resultados sugieren una relación entre disminución del transporte aniónico y aumento de oxidación de membranas de eritrocitos producto de HHA.
Financiamiento: Proyecto DIPUV 03/99

EFECTOS DE HIPOXIA INTERMITENTE (4,600 m)SOBRE FRECUENCIA CARDIACA, PRESION SISTOLICA, VENTRICULOS CARDIACOS Y PARAMETROS SANGUINEOS EN RATAS. (Effect of intermittent hypoxia (4,600 m) on heart rate, systolic blood pressure, ventricles cardiacs and blood parameters in rats) Farias J., Brito J.,Siques P., Soto G. and Campillay F. Universidad Arturo Prat FONDEF D97I1068

Ratas Wistar fueron expuestas a 4 períodos de hipoxia intermitente (HI) en una cámara hipobárica: HI1 =24h HX (hipoxia)/24h NX (normoxia) y HI2 = 48h HX/24h NX durante 2 meses; HI3 = 96hHX /48h NX y HI4 = 96h HX/ 96h NX durante 4 meses. Normoxia (C) e hipoxia crónica (HC) fueron usados como controles.

La presión sistólica (PS) se incrementa durante los 60 dias de exposición en todos los grupos HI comparado con C (HI1 D 43±13; HI2 D 38±12 ; HI3 D 16±13; HI4 D 32±14; C D 0). La PS en HI3 y HI4 después de 2 meses decrece cerca de valores normales. La frecuencia cardíaca (FC) aumenta al final de los 4 meses de exposición se compara con C. HC no mostró cambios en PS y FC.

La relación (Ventriculo derecho/MC) presenta HVD en HI2,HI3,HI4 y HC al compararlos con C.

Los parámetros sanguínesos Hb, Hto, GR, VCM y plaquetas en grupos de HI muestran aumento significativos al compararlos con C.

En resumen en HI, la PS aumenta durante los primeros 2 meses de exposición, para luego descender a valores normales. También se activaría la eritropoyésis, producción plaquetaria y causaria hipertrofia ventricular derecha en ratas.

NEUROBIOLOGIA

LA TRANSMISION SINAPTICA GLICINERGICA EN NEURONAS ESPINALES DE RATON ES REGULADA POR EL CITOESQUELETO (The Glycinergic Synaptic Transmission in Spinal Neurons is Regulated by the Cytoskeleton). van Zundert, B y Aguayo, L.G. Lab. de Neurofisiogía, Depto. de Fisiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción.

Examinamos la importancia del citoesqueleto en la regulación y maduración de receptores de glicina (R-Gli) en neuronas espinales de ratón cultivadas por 7-13 DIV y estudiadas con registros de whole-cell. La aplicación de colchicina y citocalasina-D en forma aguda y crónica no afectó la corriente de glicina (rundown) (73±6%, 60 min.). Además, las sensibilidades del R-Gli por glicina (EC50=33±2 µM), estricnina (42±3%) y picrotoxina (75±3%) no cambiaron después de aplicaciones agudas y crónicas de colchicina y citocalasina-D. Por otro lado, la aplicación de colchicina intracelular disminuyó la amplitud quantal de las corrientes glicinérgicas espontáneas (mIPSC) al 69±5% del control después de 25 minutos de registro. Al contrario, aplicación de citocalasina-D aumentó la amplitud quantal del mIPSC y la frequencia hasta 116±9% y 190±14%, respectivamente. Para poder correlacionar estos datos funciónales con cambios en las propiedades de los clusters postsinápticos de R-Gli, iniciamos un análisis de estos en células controles y tratadas con colchicina y citocalasina-D utilizando microscopía confocal.

En conclusión, en este estudio demostramos por primera vez que el citoesqueleto es capaz de regular la función de R-Gli implicado en el proceso de transmisión sináptica inhibitoria en neuronas espinales.
Fondecyt 2000135 y 1980106.

PARTICIPACION DE GLUTATION EN LA DETOXIFICACION DE BROMURO DE METILO EN HIPOCAMPO DE RATA. (Glutathione involvement in rat hippocampus methyl bromide detoxification). Pancetti, F. y Zeise, M. Programa de Gestión Agraria, Facultad Tecnológica, Universidad de Santiago de Chile.

Bromuro de metilo es un gas desinfectante ampliamente usado en todo el mundo en productos hortofrutícolas. Diversos trabajos han demostrado que este compuesto es neurotóxico en humanos y otros mamíferos. En un trabajo anterior se estudiaron sus efectos a corto plazo en neuronas piramidales de la región CA1 de rebanadas agudas de hipocampo de rata a las cuales se les registraron respuestas extracelulares de campo (Zeise et al., Neurotoxicology, 20(5), 1999). Estos resultados indicaron que las neuronas permanecen viables después de 1 hora de aplicar bromuro de metilo durante 8 minutos. Sin embargo se observó una leve pero irreversible disminución de la excitabilidad sináptica. Ya que bromuro de metilo no produjo cambios electrofisiológicos consistentes con evidencia de neurotoxicidad se pensó que la neurotoxicidad se puede deber a metabolitos producidos en la detoxificación del compuesto a través de glutatión. Debido a esto nos interesamos en investigar los efectos neurotóxicos producidos por exposición de rebanadas de hipocampo de rata a S-metil cisteína, S-metil glutatión y metano tiol (CH3SH), todos ellos metabolitos producidos por la detoxificación de bromuro de metilo a través de la vía de glutatión-S-transferasa. Los resultados obtenidos hasta este momento indican que S-metil cisteína produce una marcada disminución de la excitabilidad sobre todo en ratas más jóvenes, las cuales serían más sensibles a los efectos tóxicos del compuesto. (Financiado por Fundación Volkswagen y DICYT-USACH).

REGULACION DE LA EXPRESION DE ENZIMAS ANTIOXIDANTES DURANTE LA NEUROTOXICIDAD MEDIADA POR COBRE, EN NEURONAS DE SUBSTANCIA NIGRA DE RATA. (Regulation of antioxidant enzymes during copper neurotoxicity in rat substantia nigra neurons). Katherine Marcelain, Irmgard Paris, Raúl Caviedes, Pablo Caviedes y Juan Segura-Aguilar1 Programa de Farmacología Molecular y Clínica, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

Utilizando la técnica RT-PCR semi-cuantitativo, estudiamos la expresión de los mRNAs de superóxido dismutasa, catalasa, glutatión peroxidasa y DT-diaforasa durante el tratamiento con CuSO4 en presencia de dopamina (DA) y Dicumarol. Cuando las células se trataron con CuSO4 o CuSO4 y DA, se observó una disminución en los mRNAs de superóxido dismutasa y glutatión peroxidasa. Sin embargo, éstos recuperaron sus niveles basales cuando las células fueron expuestas a condiciones de estrés oxidativo, durante la reducción del aminocromo con un electrón (CuSO4, DA y dicumarol). Por su parte, la expresión del mRNA de catalasa aumentó con todos los tratamientos. Interesantemente, bajo condiciones de estrés oxidativo, los niveles aumentaron cerca de 4 veces sobre el basal. La regulación positiva sobre la expresión de las enzimas estudiadas bajo condiciones de estrés oxidativo, podría considerarse como una respuesta celular primaria contra el aumento de O2.- y H2O2 producto del "redox cycling" durante la reducción del aminocromo con un electrón. Sin embargo, el incremento en la expresión de enzimas antioxidantes resulta en un efecto totalmente opuesto, ya que éstas aceleran la autoxidación del radical leucoaminocromo o-semiquinona.
Agradecimientos: Proyectos FONDECYT 990622 y 1980906.

ANALISIS MOLECULAR DE LA EXPRESION GENICA DE ENZIMAS ANTIOXIDANTES EN UN CULTIVO DE NEURONAS RCSN INCUBADAS CON SALSOLINOL. POSIBLES IMPLICANCIAS EN LA ETIOPATOGENESIS DE LA ENFERMEDAD DE PARKINSON. (Molecular analysis of the expression of antioxidant enzymes in a RCSN neuron culture incubated with salsolinol. Possible implications in the etiopathogenesis of Parkinson diseases). 1Dagnino-Subiabre, A., 1 Martinez, P., 2Caviedes R., 2Caviedes P., 1Segura-Aguilar J. 1Programa de Farmacologia Molecular y Clínica, 2Programa de Morfologia, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

El salsolinol es una neurotoxina endógena que se forma espontánea y enzimáticamente a partir de la dopamina. El salsolinol está presente en la sustancia nigra y se encuentra en alta concentración en fluidos cerebroespinales de pacientes con Parkinson. Esta neurotoxina produce apoptosis en neuronas y estaría involucrada en la etiopatogénesis de la enfermedad de Parkinson. En este estudio se analizó la expresión de los genes que codifican a las enzimas antioxidantes catalasa, glutatión-peroxidasa, SOD1 y DT-diaforasa en un cultivo de sustancia nigra de rata (RCSN) en presencia salsolinol. Para esto se incubaron por 10 minutos las células RCSN en 3 condiciones: salsolinol, dicumarol (un inhibidor específico de la enzima DT-diaforasa) y salsolinol mas dicumarol, todos en concentraciones finales de 100 µM. El análisis molecular consistió en la extracción de RNA total, transcripción reversa y PCR a diferentes números de ciclos. Este análisis reveló que el salsolinol en presencia o ausencia de dicumarol, regula negativamente la expresión de los mRNA de catalasa y glutatión-peroxidasa. Estos resultados sugieren que al inhibirse el principal sistema de detoxificación del H2O2, este al acumularce podría servir de sustrato a peroxidasas que oxidan el grupo catecol del salsolinol a una orto-quinona, la cual puede ser reducida con 2 electrones por la DT-diaforasa hasta una hidroquinona, siendo esta una vía de detoxificación de la acción degenerativa del salsolinol.
Financiado por FONDECYT 1990622 y 1980906.

COMPLEJOS NEUROTOXICOS DE b-AMILOIDE INDUCEN LA PERDIDA DE FUNCION DE COMPONENTES DE LA VIA DE SEÑALES DE WNT: EFECTO NEUROPROTECTOR DEL ION LITIO (b-amyloid complexes neurotoxicity induces loss of function of Wnt signaling components: Neuroprotective effect of lithium ions). De Ferrari G.V., Godoy J.A. e Inestrosa N.C. Centro de Regulación Celular y Patología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.

El péptido b-amiloide (Ab) es el causante de la muerte neuronal selectiva observada en cerebros de pacientes con enfermedad de Alzheimer (EA). El péptido Ab induce la retracción del cuerpo celular, distrofia axonal y dendrítica. En nuestro laboratorio hemos confirmado las características neurotóxicas del péptido Ab y de su complejo con la enzima acetilcolinesterasa (Ab-AChE). En este estudio se demuestra que la toxicidad inducida por complejos Ab/Ab-AChE resulta en la desestabilización de b-catenina en el citosol y de proteínas asociadas a microtúbulos (MAPs), tau y MAP-1B, en el axoplasma. Por otra parte, el ion litio (100 µM), inhibidor reversible de la glicógeno sintasa quinasa-3b y activador selectivo de la vía Wnt, proteje a neuronas post-mitóticas tratadas con complejos Ab/Ab-AChE y previene de la disminución en los niveles de b-catenina, tau y MAP-1B. En conclusión, nuestros resultados indican que la toxicidad dependiente de complejos Ab/Ab-AChE induce la pérdida de función de componentes de la vía de señales de Wnt y sugiere que las sales de litio podrían ser una alternativa terapéutica en el tratamiento de la EA.
Cátedra Presidencial en Ciencias y FONDAP Nº 13980001 (N.C.I.), FONDECYT Nº 4000030 (G.V.D.).

ETANOL ALTERA LA EXPRESION DE PPARb EN UNA LINEA CELULAR DE SISTEMA NERVIOSO CENTRAL: B12 (Ethanol alters PPARb expression in the B12 Central Nervous System cell line). Leisewitz, A.V., Espinosa,C.E, Bronfman M. Unidad de Bioquímica Celular y Genética; Facultad de Cs.Biológicas; Pontificia Universidad Católica de Chile

Los receptores activados por proliferadores peroxisomales (PPARs) son miembros de la superfamilia de receptores nucleares activados por ligando involucrados en el metabolismo lipídico. Las tres isoformas de PPAR: a,b y g, difieren en el sitio de unión a ligando y son activadas por drogas hipolipidémicas y ácidos grasos de cadena larga, entre otros. PPARa media la respuesta de proliferación peroxisomal y PPARg la diferenciación de adipocitos. Si bien no se conoce la función de PPARb, isoforma presente en todos los tejidos, evidencias muestran que PPARb podría regular la expresión de las otras dos isoformas de PPAR. La regulación del metabolismo lipídico mediada por PPARs, es de gran interés en el Sistema Nervioso Central (SNC), por su alto contenido lipídico (ie: mielina).

Sabiendo que el etanol produce efectos a nivel de SNC y que altera el metabolismo lipídico en hígado, utilizamos como modelo de estudio una línea celular del SNC de rata (B12), perteneciente al linaje oligodendrocítico, la cual presenta un gran número de peroxisomas (sugiriendo un alto metabolismo lipídico) y expresa las tres isoformas de PPAR.

Tratamientos con etanol por 24 horas, generan una disminución concentración dependiente de la expresión de PPARb (0.01%, 0.1% y 0.5%). La proliferación celular no se vió afectada, como tampoco la expresión de las otras isoformas de PPAR. Esto nos lleva a pensar en un posible efecto del etanol sobre el metabolismo lipídico a nivel de SNC.
Agradecimientos: Proyectos Fondecyt 1990155, Fondap 13980001 y Milenio P99-007-F

LA VIA DE SEÑALIZACION Wnt y PPAR EN NEURONAS DE HIPOCAMPO. (Wnt signaling and PPAR in Hippocampal Neurons) Godoy J., Espinoza C., Bronfman M. e Inestrosa N.C. Centro de Regulación Celular y Patología Fac. Cs. Biológicas. Pontificia Universidad Católica de Chile.

La Enfermedad de Alzheimer (EA) es un proceso neurodegenerativo caracterizado por la pérdida de la capacidad cognitiva como consecuencia de la extensiva muerte neuronal. Una de las características patológicas de la EA es el depósito extracelular de fibras amiloides con formación de placas seniles, acompañado de una activación de la microglía en las placas donde se liberan citoquinas que inducen la inflamación del parénquima cerebral.

La vía de señalización Wnt activada por litio media la protección del daño producido por fibras amiloides, lo que se evidencia por el movimiento de la proteina b-catenina hacia el núcleo de neuronas de hipocampo de rata.

Estudios recientes indican que los agonistas del Peroxisome Proliferator-Activated Receptor (PPAR) disminuyen la liberación de citoquinas de la microglía, con la consecuente disminución de la inflamación. En una primera etapa hemos establecido que troglidazona (TGZ) protege a la neurona del daño producido por la fibra amiloide, observándose un efecto trófico con crecimiento y engrosamiento axonal junto a la acumulación de b-catenina en el núcleo de las neuronas como respuesta a TGZ. Estudios de RT-PCR de neuronas de hipocampo permitieron detectar la presencia de tres tipos de PPAR, estableciéndose un aumento en el PPARg en presencia de TGZ, un agonista específico a concentraciones de 0,1-10 µM hasta por 4h. Esto sugiere que la vía de transducción de señales Wnt y el sistema PPAR están relacionados con la neuroprotección al daño producido por fibras amiloides.
Financiado por FONDAP-Biomedicina (Nº 13980001) y Cátedra Presidencial en Ciencias a MB y NCI.

MOVILIZACION DE VESICULAS Y PLASTICIDAD SINAPTICA (Vesicles mobilization and synaptic plasticity). Oliva, C., Delgado, R. y Labarca, P. Centro de Estudios Científicos, Valdivia, Chile.

ipp es una mutante de Drosophila deficiente en la enzima inositol polifosfato 1-fosfatasa (IPP). Esta enzima es sensible a Litio (Li+) y ha sido propuesta como un blanco del monovalente en la enfermedad maníaco-depresiva. ipp es incapaz de mantener incrementos sostenidos en la liberación de transmisor durante estimulación tetánica prolongada. En estudios posteriores hemos observado que la sinapsis neuromuscular de ipp carece de potenciación post-tetánica (PTP). Mediante una combinación de estudios electrofisiológicos y de imágenes, investigamos al relación entre pozos de vesículas sinápticas y la deficiencia en la plasticidad sinápticafalta de PTP. l defecto en la mantención de la transmisión sináptica se debe a una deficiente disponibilidad en los contingentes de vesículas sinápticas listas para ser liberadas (RRP) y vesículas de reserva (RP). Monitoreamos electrofisiológicamente las corrientes post-sinápticas evocadas y mediante imágenes de botones sinápticos, la movilización de vesículas. El número de cuantas, la endocitosis, el reciclamiento y la movilización de vesículas del RRP no presenta diferencias entre larvas normales e ipp. Estudiando la movilización de vesículas desde el RP hacia los sitios de liberación encontramos que esta es deficiente en el mutante y en larvas silvestres tratadas con Li+. Adicionalmente, citocalasina-D que inhibe la movilización del RP bloquea la PTP en individuos normales. Estas observaciones muestran que una movilización deficiente de vesículas sinápticas desde el RP se relaciona con pérdida de PTP, demostrando que este tráfico de vesículas es blanco del Li+ en el sistema nervioso.
Financiado por FONDECYT 1000895, HHMI, Cátedra Presidencial. CECS es un Instituto Científico Milenio.

FISIOLOGIA VEGETAL

DISTRIBUCION ALTITUDINAL Y FACTORES ECOFISIOLOGICOS EN PLANTAS DE LA ZONA MEDITERRANEA EN CHILE. (Altitudinal distribution and ecophysiological factors in plants from the mediterranean zone in Chile). Cabrera, H.M., Flores, L., Marín, J. y Gambotto, F. Instituto de Biología, Fac. Cs. Bs. y Mat., Univ. Católica de Valparaíso, Valparaíso.

En ecosistemas mediterráneos diversos estrés limitarían el desarrollo y sobrevivencia de las plantas, definiendo límites altitudinales de vegetación y distribución de especies. Para caracterizar esto se evaluó el papel del estrés hídrico, térmico y lumínico en la fotosíntesis, tolerancia al frío y fotoinhibición en especies congenéricas de árboles siempreverdes (Kageneckia oblonga) y semideciduos (K. angustifolia) como entre arbustos (Anartrophyllum cummingii) y cojines (A. gayanum) en un gradiente altitudinal entre 1500 a 3100 msnm en los Andes de la zona mediterránea de Chile (33°). Se postuló que la sequía sería limitante en los pisos altitudinales dominados por árboles, el frío en los altitudinales mayores y/o al efecto sinérgico (complementario) de estos diferentes estrés junto al estrés lumínico por un exceso de radiación.

Se caracterizó, estacionalmente y donde están distribuidas las especies, el clima, los suelos y se evaluó la actividad fotosintética y la fluorescencia de la clorofila a, determinando temperaturas de congelamiento y daño foliar. La máxima tasa de fotosíntesis en K. a. de 6 µmol m-2s-1 es similar a la de K. o. y en ambas especies un control estomático en el verano limita las máximas a 2 µmol m-2s-1. En contraste, son más altas las máximas tasas para A. c. (14) y de 10 µmoles m-2s-1 para A. g.. Análisis de nutrientes foliares (N y P) muestran una relación más directa con conductancias y transpiración mayores en estas últimas especies. La fluorescencia sugiere que en las especies no se presentaría una fotoinhibición crónica importante por sequía (verano) o frío (invierno) aunque el consumo fotoquímico y no-fotoquímico varia estacionalmente. En los árboles K. a. y K. o. se presentaría superenfriamiento y las especies arbustiva (A. c.) y en cojín (A. g.) presentarían tolerancia al congelamiento. Estos estrés afectarían de manera distinta las formas de vida y sugiere que la distribución altitudinal reflejaría la interacción entre estos factores.
Proyectos FONDECYT 3990039 y UCV 122.755/2000

CONTENIDO Y CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DEL ACIDO CLOROGENICO EN Deschampsia antarctica. (Content and antioxidant capacity of chlorogenic acid in D. antarctica). Zúñiga, G.E., Rasmussen-Poblete, S y Ríos, M. Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile.

Durante el verano, época favorable para su crecimiento Deschampsia antarctica Desv es afectada por diversas condiciones ambientales que inducen la acumulación de especies reactivas de oxígenos (ERO) estrés oxidativo. Las plantas presentan un eficiente sistema antioxidante enzimático y no enzimático, que les permite remover las ERO generadas bajo el metabolismo normal y condiciones adversas. El propósito de este trabajo fue caracterizar el sistema antioxidante no enzimático de D. antarctica en su hábitat natural.

Se colectaron muestras durante ciclos diarios mes de enero en los años 1999-2000 en la Base Luis Risopatron del INACH. Se realizaron extracciones en MeOH:HCl(c) (99:1 v/v) y se determinó la capacidad antioxidante en ciclos diarios bajo diferentes condiciones ambientales utilizando el radical libre DPPH. El contenido de ácido clorogénico y otros derivados fenilpropanoides fue determinado mediante HPLC, utilizando una columna RP18.

La capacidad antioxidante de los extractos fue mayor en días con alta luminosidad. Durante un ciclo diario la mayor actividad antioxidante se encontró en las horas de alta luminosidad. El contenido de ácido clorogénico fue el compuesto principal presente en los extractos obtenidos en las horas y días de alta luminosidad.

Se postula que el ácido clorogénico forma parte del mecanismo antioxidante de D. antarctica.
Este trabajo fue financiado por el Instituto Antártico Chileno y la Universidad de Santiago de Chile.

ACTIVIDAD BIOLOGICA DE Ruta graveolens (Ruda) CULTIVADA in vivo E in vitro. (Biological activity of Ruta graveolens (Ruda) cultivated in vivo e in vitro). Orellana, S., Vargas, C., Wilkens, M. y Zúñiga, G.E. Departamento de Biología, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile.

Las plantas producen diversos metabolitos que pueden ser utilizados por el hombre con diferentes propósitos. Nuestro Laboratorio ha centrado su atención en plantas con propiedades medicinales que puedan ser utilizadas como fuentes de compuestos bioactivos, mediante el cultivo in vitro. La ruda es una planta de gran uso etnobotánico. En este trabajo se compara las propiedades de plantas de ruda cultivadas in vivo e in vitro.

Plantas de ruda de un año de edad se utilizaron para inducir cultivos in vitro y para obtener extractos. Los cultivos in vitro se indujeron a partir de explantes cultivados en medio MS a 25 ± 3 °C y un fotoperíodo de 16/8 h luz. Los extractos se obtuvieron sumergiendo el tejido en etanol 85% (1:2 p/v) o en agua (0-4% p/v). A los extractos se les determinó su actividad antibacteriana utilizando diferentes bacterias patógenas y su actividad alelopática usando Lepidium sativum y Hordeum vulgare.

Los extractos de plantas in vivo mostraron actividad antibacteriana sobre S. aureus, M luteus, E. cloacae y E. coli, mientras que los extractos de plantas in vitro fueron activos además, contra B. cereus y B. subtilis. La actividad alelopática fue superior en los extractos de plantas in vitro. El cultivo de tejidos de ruda permite obtener extractos con actividad biológica igual o superior a las plantas in vivo.
Financiado por proyecto FONDEF D97I2034 y DICYT, Universidad de Santiago.

ACTIVIDAD CRIOPROTECTORA DE UNA DESHIDRINA INDUCIDA POR FRIO (P-80) EN CEBADA (Cryoprotective activity of a cold-induced dehydrin (P-80) in barley). Gallardo, J., Maidstone, P., Corcuera, L.J. y Bravo L.A. Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Concepción.

Las deshidrinas son proteínas inducidas por deshidratación celular. Poseen un segmento de consenso (15 aminoácidos) denominado K. Una deshidrina de 80 KDa (P-80) es acumulada en la vecindad del tejido vascular en cebada aclimatada al frío. Esta proteína también se acumula en menor grado por altas temperaturas. Se ha postulado que algunas deshidrinas podrían crioproteger estructuras lábiles al congelamiento o funcionar como anticongelantes. En este trabajo se postula que P-80 poseería actividad termoprotectora in vitro. Se estudió la actividad crioprotectora y termoprotectora de P-80 in vitro midiendo la recuperación de la actividad de una enzima termolábil LDH. (E.C.1.1.12.27). La adición de 100 µg/ml P-80 no protegió a la LDH a alta temperatura (50°C), recuperándose sólo un 8.2% de la actividad del control. Este efecto fue 47% menor que el observado con BSA a igual concentración. P-80 crioprotegió a la LDH, recuperándose después del ciclo de congelamiento/descongelamiento el 50% de la actividad a una concentración de P-80 de 10µg/ml. La máxima actividad crioprotectora se alcanzó a una concentración de P-80 de 100 mg/ml, alcanzando un 108% con respecto al control. Este efecto fue un 43,5 % superior al observado con BSA en la misma concentración. A concentraciones mayores disminuyó el efecto crioprotector de P-80.
Fondecyt 1980552.

EFECTO DEL FRIO Y FOTOPERIODO EN LA ACUMULACION DE AZUCARES EN CUATRO ESPECIES DE POACEAE. (Effect of cold and photoperiod on sugar accumulation in four species of Poaceae). Zúñiga A., Inostroza P., Bravo L.A. y Corcuera L.J. Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Concepción.

Deschampsia antarctica Desv. se aclimata al frío y tolera el congelamiento. Debido a su alta capacidad fotosintética a baja temperatura, se postula que D. antarctica acumula más azúcares solubles (AS), especialmente sacarosa, que otras gramíneas aclimatadas al frío y que la longitud del día modula esta respuesta. Se estudió la acumulación de (AS) en cuatro especies de Poaceae (Cebada, Avena, Trigo y D. antarctica) aclimatadas al frío en dos fotoperíodos 16/8h y 21/3h luz/osc. Todas las especies acumularon más AS en el fotoperíodo 21/3. D. antarctica acumuló más AS que las otras especies sólo en el fotoperíodo 16/8. La sacarosa aumentó durante la aclimatación al frío en las cuatro especies en ambos fotoperíodos. La sacarosa fue 2 a 3 veces mayor en D. antarctica que en las otras especies en ambos fotoperíodos, alcanzando un 27 % de los AS en (16/8) y un 42% en (21/3). Glucosa y fructosa no se incrementaron significativamente con la aclimatación al frío en D. antarctica. En Avena y Trigo estos compuestos aumentaron 10 a 20 veces en el fotoperíodo 21/3. El alto contenido y proporción de sacarosa en D. antarctica en el fotoperiodo 21/3, favorecerían su sobrevivencia y crecimiento en la Antártida.
Fondecyt 2000136.

RESISTENCIA AL CONGELAMIENTO EN Arabidopsis thaliana (L.) Heyhn. (Frost resistance in Arabidopsis thaliana). Ulloa1, N., Reyes, M2., Bravo2, L. A., Mol1, V., Corcuera2 , L. J. y Alberdi1, M. 1Instituto de Botánica , Universidad Austral de Chile, Valdivia, Departamento de Botánica2, Universidad de Concepción, Concepción, Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular, Universidad de la Frontera, Temuco.

Arabidopsis thaliana (Brassicaceae) ha sido utilizada como modelo para el estudio de la resistencia al frío. Sorprendentemente, se desconoce si su resistencia al frío se debe a tolerancia al congelamiento extracelular o evitamiento del congelamiento. En este trabajo se estudia la resistencia foliar a la congelación (TL50) en diferentes etapas del desarrollo en plantas aclimatadas (4ºC) y no aclimatadas (23ºC) al frío y las temperaturas de nucleación de hielo y congelamiento en su etapa pre-reproductiva, por análisis térmico. La estabilidad del aparato fotosintético durante la aclimatación se determinó por fluorescencia modulada, no evidenciando señales de trastorno.

Las TL50 de hojas no aclimatadas fueron similares (@-3ºC) en las etapas de desarrollo investigadas, descendiendo con la aclimatación hasta -7ºC, incluso en la etapa reproductiva, que se caracteriza por ser una de las más sensibles al frío. Las temperaturas de nucleación fueron muy similares a las TL50 (aproximadamente _6,4 a _7,2ºC). La temperatura de congelamiento fue -1,3ºC en plantas controles y -3,5ºC en las aclimatadas por 21 días. Se concluye que Arabidopsis no es tolerante al congelamiento, sino evasora, pues es capaz de sobreenfriar.
FONDECYT 1000610; DID-UACH S 2000-26

EFECTO DE LA APLICACION DE RESIDUOS SOLIDOS GENERADOS EN EL PROCESO DE PRODUCCION DE CELULOSA SOBRE EL DESARROLLO DE PINUS RADIATA EN CONDICIONES DE INVERNADERO. (Effects of solid residues from the cellulose industry on plant development of radiata pine (Pinus radiata) under greenhouse conditions). Jordán, M., Osses, M. y Roveraro, C. Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. Email: mjordan@genes.bio.puc.cl. Celulosa Arauco y Constitución, S.A. Arauco.

Los residuos sólidos originados durante el proceso de elaboración de la celulosa y del papel, por hoy depositados en vertederos, contienen diversos elementos esenciales que pueden ser aprovechados por las plantas y que, en suelos forestales muy pobres, pueden aportar nutrientes apoyando programas de fertilización. Se han analizado varios residuos, los correspondientes a Cenizas, Dregs, Escoria, Grits, Lodos y Rechazos de Cocción y se han ensayado en proporciones de 10% a 90% mezclados con dos tipos de suelos de uso forestal de la novena región. Se evaluó la germinación, crecimiento, condición de las raíces y de regiones subapicales de éstas y del tallo. Los resultados histológicos y de crecimiento indican que varios residuos usados promueven el crecimiento en baja concentración y éstos solo aparecen como limitantes cuando se emplean en niveles elevados. Lo anterior debe ser evaluado sobre la base que plántulas en sus primeras fases de desarrollo, son más sensibles a agentes de estrés; situación no esperable a nivel de campo en árboles de mayor edad y sistema radicular profundizado. Debido a que, junto a una acción fertilizadora leve, el empleo de residuos corrige el pH ácido de los suelos, aumenta la capacidad de retención de agua y que la presencia de materia orgánica libera N, favoreciéndose además la estructura del suelo, se considera que el empleo de residuos puede ser de gran utilidad y de implicancia económica ventajosa. (Fondef D97/1012).

CARACTERIZACION DE LA INTERACCION ARABIDOPSIS THALIANA-BOTRYTIS CINEREA (Characterization of the Arabidopsis thaliana-Botrytis cinerea interaction) Silva, H. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. Patrocinante: Ariel Orellana

Las perdidas mundiales en agricultura debido a infecciones fúngicas sobrepasan varios billones de dólares siendo Botrytis cinerea uno de los patógenos fúngicos más importantes. Algunas de las enfermedades causadas por Botrytis incluyen el "gray mold" de uvas y frutillas. También causa pudrición blanda secundaria de frutas y verduras que se encuentran almacenada y en transito.

En este trabajo se presentara el inicio de un screen para identificar mutantes en plantas de Arabidopsis thaliana que sean resistentes a la infección por el hongo. Se están utilizando líneas de plantas de Arabidopsis que han sido mutagenizadas por inserción del T-DNA o de transposones. Algunas mutantes putativas se han identificado y se ha iniciado su caracterización genética. De igual modo se han testeado diferentes ecotipos de Arabidopsis así como también otras mutantes previamente identificadas en otros laboratorios.
Financiado por Fondecyt 3990038 y Fundación Andes

BOTANICA

CARACTERIZACION DE LA AVIFAUNA EN LOS TIPOS FORESTALES DEL PARQUE NACIONAL CHILOE. (Caracterization of the avifauna of the forest types of Chiloe National Park). Jiménez M.1, Murillo V.1,2 y Villarroel C3. 1Universidad de Concepción; 2 Becario Conicyt; 3I.M. Sn Pedro de la Paz. Patrocinio: Bittner M.

El P. N. Chiloé (X Región-Chile) se caracteriza por presentar una topografía accidentada, importantes variaciones de alturas, presencia de redes hidrográficas, cuerpos de agua dulce y salobres, y una abundante cubierta vegetal arbórea estructurada en diferentes tipos forestales. Estas particularidades propician la existencia de diversos ambientes disponibles para distintos grupos de aves. A pesar de esto, son pocos los estudios que consideran aspectos ecológicos de las comunidades que allí habitan. Dada la importancia de este tipo de estudios para establecer cualquier plan de conservación y manejo, nos hemos propuesto entregar una aproximación a la riqueza avifaunística asociada a distintos tipos forestales en el P. N. Chiloé. La observación de la avifauna se realizó sobre un transecto que incluyó los tipos forestales presentes en un gradiente altitudinal, en el margen suroccidental de la Cordillera de Piuché (sector Chanquín). Para el análisis de los datos se utilizaron el índice de asociación de Jaccard y el modelo de agrupación por anidado. Se registró en el área estudiada un total de 37 especies pertenecientes a 13 ordenes y 23 familias. El Subtipo Forestal (STF) Coigüe (TF Siempreverde) presentó la mayor riqueza específica (23) y el Tipo Forestal (TF) Alerce la menor (7). El análisis de conglomerado arrojó la mayor similitud avifaunística entre el STF Coigüe y el TF Ciprés, par estrechamente relacionado con el STF Tepú (TF Siempreverde). Se discuten estos resultados con respecto a la oferta de hábitats y a las relaciones ecológicas del ensamble, así como el significado de la agrupación por anidado.
Agradecimientos: I.M. de Chonchi, Gob. Prov. Chiloé, Corp. Mun. Educación de Castro y Conaf Chiloé.

AREAS DE ENDEMISMOS EN LA FLORA DE LA VIII REGION DEL BIO-BIO, CHILE. (Areas of endemism in the flora of the VIII Region of Bio-Bio, Chile). L.A Cavieres, A. Marticorena y P. López. Departamento de Botánica, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, U. de Concepción.

Los taxa endémicos son aquellos que están restringidos a algún lugar geográfico específico y pueden definirse como la biodiversidad única de una región. El conocimiento de la distribución de las áreas de concentración de las especies endémicas es fundamental para llegar a una estrategia que permita el uso sustentable y la conservación de la biodiversidad del país. El análisis de parsimonia de endemismos (Parsimony Analysis of Endemicity (PAE)) es un método que permite clasificar áreas de acuerdo a taxa compartidos. El cladograma resultante representa un conjunto de áreas anidadas que comparten taxa en común, y donde las dicotomías terminales representan las especies únicas de esas áreas o endemismos. En el presente trabajo se determina a través de un análisis de PAE, áreas con concentración de endemismos dentro de la VIII Región y se compara su representación en el actual Sistema Nacional de Areas Silvestres Protegidas del Estado chileno (SNASPE). Para esto se utilizó la base de datos de la Flora de Chile y se generó una matriz de presencia y ausencia de especies en cuadrantes de 0.5 x 0.5 grados de latitud y longitud. Con el uso del programa PAUP se generó un cladograma de áreas, de consenso estricto, donde las áreas anidadas terminales corresponden a los cuadrantes con concentración de especies endémicas. Se encontraron 3 grandes áreas: una ubicada en la cordillera de la costa, otra ubicada en la depresión central, y una última ubicada en los Andes. La determinación de estas áreas parece estar muy influenciada por la intensidad de colectas en dichas zonas. Se discuten los patrones de distribución de las especies endémicas que sustentan tales zonas.
Financiado por: FONDECYT 1000364

PLASTICIDAD FENOTIPICA DE Convolvulus arvensis FRENTE A VARIACIONES DE LUZ Y SOPORTE FISICO (Phenotypic plasticity in Convolvulus arvensis to shading and physical support). Gianoli, E. Dpto. Ciencias Ecológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

Existen evidencias a nivel interespecífico de que la expresión de plasticidad fenotípica frente a variaciones de luz en plantas erectas y rastreras se da de manera diferencial, a través de órganos análogos. Así, la elongación de entrenudos es mayor en plantas erectas que en rastreras, y la elongación de peciolos es mayor en las plantas rastreras. Se ha concluido que la plasticidad diferencial de órganos espaciadores puede haber sido seleccionada como consecuencia del hábito de crecimiento de la especie. Sin embargo, esto no se ha investigado a nivel intraespecífico, que es la escala de los procesos microevolutivos. En este trabajo se estudia la plasticidad fenotípica frente a variaciones de luz de Convolvulus arvensis, especie con hábito de crecimiento erecto (trepadora) o rastrero, dependiendo de la disponibilidad de soporte físico. Se evalúa a nivel intraespecífico la hipótesis referida a la plasticidad diferencial de órganos espaciadores dependiendo de la forma de crecimiento. Por otro lado, se sabe que el soporte físico es un factor ambiental que puede afectar la morfología de plantas trepadoras. En consecuencia, otro aspecto abordado aquí es la integración de la plasticidad fenotípica. Se evalúa la relación entre la plasticidad de órganos de C. arvensis frente a ambos factores ambientales (luz, soporte), enfatizando la plasticidad de las correlaciones entre atributos a través de los diferentes ambientes. Esto último es relevante para la intensidad de selección de atributos con valor adaptativo y, en este caso, permite proponer una explicación al resultado obtenido: la hipótesis puesta a prueba a nivel intraespecífico no se verifica.
FONDECYT 3990041

RELACION ENTRE GERMINACION Y SOMBRA TOLERANCIA DE PLANTULAS EN UN BOSQUE TEMPLADO (Relationships between germination and seedling shade tolerance in a temperate forest) Figueroa, J1 y Lusk, C2. 1Departamento de Ecología, Universidad Católica de Chile. 2Departamento de Botánica, Universidad de Concepción, Chile.

Los árboles tropicales han sido agrupados en pioneros, que se establecen en sitios abiertos y especies climax capaces de establecerse bajo el dosel. Asimismo, se ha sugerido que los requerimientos de germinación podrían distinguir especies de ambos grupos. Sin embargo, este postulado no ha sido corroborado en bosques templados. En este estudio con especies chilotas, nosotros preguntamos: ¿Puede la dependencia de la germinación a un claro utilizarse para discriminar entre especies pioneras y no pioneras? ¿Está la germinación correlacionada con la sombra tolerancia de las plántulas?

Para cuantificar la tolerancia a la sombra en cada especie y estimar el ambiente lumínico ocupado por las plántulas utilizamos dos LAI-2000. Para cuantificar la dependencia de la germinación al claro, se comparó la germinación bajo el dosel y en un claro.

La correlación no fue significativa entre el ambiente promedio de las plántulas arbóreas y arbustivas y la germinación dependiente del claro; sí en enredaderas. La gran mayoría de las especies germinaron en el claro y bajo el dosel. La germinación de algunas especies sombra intolerantes no incrementó en el claro. Pocas especies sombra tolerantes germinaron mejor en el claro. No tenemos evidencia para sugerir que la germinación esté correlacionada con la sombra tolerancia en bosques chilotes.
(JAF)Fondecyt 3980020; (CL)Fondecyt 1000367

EFECTO DE BORDE EN FRAGMENTOS DE BOSQUE NATIVO TEMPLADO DE CHILE CENTRAL (Effects of edges on native forest patches of Central Chile). San Martín, J., W. Hempel y P. Schmith. Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología Universidad de Talca Casilla 747 Talca Chile e Instituto de Botánica Universidad Técnica de Dresden, Alemania.

Uno de las consecuencias de la actividad antrópica en el medio natural es la fragmentación de la vegetación boscosa nativa del lugar. La nueva forma de cobertura de un bosque en unidades de tamaños diferentes, espa- cialmente disgregadas, es una problemática que exige un conocimiento de los cambios físicos y biológicos del sistema. Para fragmentos de bosque natvo caducifolio templado de Chile Central se evaluaron en sus bordes los cambios en la biodiversidad floristico-vegetacional. En siete sitios de la precordillera andina y costera de la VII Región en fragmentos de tres tamaños (menor a cinco, mayor a cinco y superior a 50 hás) de Nothogafus glauca, Fagaceae se realizaron transectos de 5 x 55 m en dirección e de la pendiente, exposiciones S, SE y SW y altitudes de 250 a 950 cubriendo el gradiente latitudinal N-S En cada transecto y en dirección borde externo-interior de los bosques se establecieron cuatro parcelas de 5 x 10 m con separación de 5 m inventariándose las especies y su cobertura según la métodica de Braun-Blanquet El espectro taxonómico comprende 133 especies distribuídas en 112 géneros y 63 familias prevalenciendo las de origen nativo (93,2 %), pero seis de ellas con problemas de conservación. En las formas de crecimiento, y en orden decreciente de la riqueza de especies. están los arbustos, las hierbas y los árboles. De estos últimos el 90,6 % (29) regenera en los bordes. En el ámbito ecológico dominan los elementos de carácter templado (62,4 %) seguido por los esclerófilos (36,8 %) En todos los fragmentos la disimilitud de especies aumenta desde el borde externo al interno y se correlacionan negativamente con la cobertura del dosel superior La magnitud del efecto de borde está también influenciada por el tipo el tipo de vegetación circundante y la exlusión de la influencia antrópica
El autor agradece el apoyo de la Universidad de Talca, Chile, y Universidad Técnica de Dresden, Alemania.

IMPACTO NEGATIVO DE INSECTOS AGALLADORES SOBRE LA PRODUCCION DE FRUTOS DEL ARBUSTO NATIVO COLLIGUAJA INTEGERRIMA. (Negative impact of galling insects on fruit production of the native shrub Colliguaja integerrima). Gonzáles, W.L. Departamento de Ciencias Ecológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. Patrocinio: Rodrigo Medel

La herbivoría por insectos es un evento frecuente en sistemas tanto manejados como silvestres. Sin embargo, el impacto negativo de los insectos sobre la sobrevivencia y/o fecundidad de una planta en condiciones silvestres, pocas veces ha sido reportado en la literatura. En el presente trabajo, se estudió el impacto de insectos agalladores sobre la fecundidad y el crecimiento del arbusto nativo Colliguaja integerrima (Euforbiaceae). Se evaluó la incidencia de agalladores en una población de C. integerrima (porcentaje de plantas agalladas), la producción de frutos y el crecimiento vegetativo en plantas con y sin agallas. Finalmente, a través de un análisis de regresión múltiple se evaluó la relación entre el número de agallas y atributos de la planta: número de frutos y ramas, altura y área de la planta, y longitud de las ramas. La incidencia de agallas fue cercana al 75 %. La producción de frutos fue significativamente menor en plantas con agallas que en plantas sin agallas, y no se encontraron diferencias significativas en el crecimiento vegetativo entre plantas con y sin agallas. Finalmente, a través del análisis de regresión múltiple, se encontró relación negativa sólo entre el número de frutos y el número de agallas por planta. Las consecuencias del ataque de insectos agalladores sobre la población de C. integerrima, se discuten en el presente trabajo.
Financiamiento: Cátedra Presidencial a Hermann M. Niemeyer

EFECTO DE LA EXCLUSION DEL UVB AMBIENTAL EN PLANTULAS DE SOPHORA MICROPHYLLA AIT. (Effect of the ambiental UVB exlusion in Sophora microphylla seedlings). Romero, M; Hess, S; Lovengreen, C; Iturra, G. Institutos de Botánica, Química y Física. Facultad de Ciencias, Universidad Austral de Chile. Valdivia, Chile.

La reducción del ozono estratosférico incrementa el daño potencial de la radiación UVB en los vegetales. Cada disminución de 1% de ozono aumentaría en ± 2% el UVB incidente afectando la productividad de especies adaptadas a intensidades moderadas o bajas de UVB.

En plántulas de Sophora microphylla Ait., árbol leguminoso nativo, propio de sectores bajos e importante en la recuperación de suelos debido a la presencia de asociaciones simbióticas tripartitas, se estudia estacionalmente, en condiciones de campo, el efecto de niveles variables de radiación UVB ambiental en la productividad, morfo-anatomía y pigmentos foliares.

Se utilizan filtros Mylar y Acetato para la exclusión diferencial de las radiaciones UVB manteniendo normal la transmisión del PAR. Plantas sin filtro se consideran como referencia libre.

Las plantas sin UVB evidencian mayor tasa de crecimiento relativo, longitud del vástago y número de foliolos por hoja y menor grosor de la lámina foliar. En plantas bajo UVB es mayor el índice de superficie asimilante.

Las condiciones de UVB no afecta mayormente la concentración total de clorofilas y carotenos, mientras la concentración de flavonoides aumenta hasta un 25% en presencia de UVB. En los meses de alta irradianza se incrementó la selectiva de flavonoides tipo Quercetina, eficiente inhibidor de los superoxidas.

BIOLOGIA

DESARROLLO DE FORMATOS PCR "GEL-FREE" PARA LA SELECCION DE GENOTIPOS DE TRIGO DE ELEVADA CALIDAD AGROINDUSTRIAL (Development of "gel-free" PCR formats for selecting wheat genotypes possessing improved baking quality) J. Zúñiga R.1, C. Jobet F.1 y H. Campos de Q.1,2. 1: INIA-Carillanca, Casilla 58-D, Temuco/2:Semillas Pioneer Chile Ltda. Patrocinante: Dr. Edmundo Acevedo

El trigo es la principal especie cereal cultivada en Chile y las exigencias de calidad agroindustrial presentan un creciente impacto sobre el desarrollo de nuevas variedades, haciéndose necesario acelerar la eficiencia de selección de sus sistemas de fitomejoramiento. Nuestro grupo ha desarrollado sistemas PCR que permiten identificar genes asociados con calidad en trigo, sin embargo persiste su separación electroforetica. Para obviar dicha limitante y acelerar más aún la selección genética en trigo, hemos desarrollado sistemas del tipo ELISA-PCR. El gen codificador de la proteína HMWx5, localizado en el genoma D y asociado con calidad panadera, fue amplificado con partidores gen-específicos marcados con biotina y digoxigenina y posteriormente detectado mediante ELISA en microplacas mediante lecturas a 405 nm. Una vez optimizadas la reacción PCR y posterior captura inmunológica, las absorbancias correspondientes a las muestras positivas y negativas permitieron la rápida y efectiva separación de genotipos, reduciéndose el tiempo analítico e incrementando la confiabilidad del proceso de selección. El sistema desarrollado presenta numerosas ventajas sobre la detección electroforética de amplicones como menor tiempo analítico, eliminación de la exposición a elementos como BrEt y transiluminadores y una mayor automatización de la captura de datos.
Agradecimientos: Investigación financiada por proyecto FONDEF D98I1074

NECROSIS INDUCIDA POR EL RECEPTOR FAS EN CELULAS DE LINFOMA B DE RATON, A20. (Fas Receptor-mediated Necrotic Cell Death in murine A20 B lymphoma cells) Hetz, C.,* Hunn, M.,# Rojas P.,* Leyton, L.* and Quest A. F. G.* #Institute of Biochemistry, University of Lausanne, Ch. des Boveresses 155, CH-1066 Epalinges, Switzerland. *Instituto de Ciencias Biomedicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Independencia 1027, Santiago, CHILE. Phone/Fax: 56-2-7382015; E-mail: aquest@machi.med.uchile.cl

The signaling events triggered upon FasL stimulation of murine A20 B lymphoma cells were investigated. In these cells, FasL (100 ng/ml) induced activation of caspase-3 (within 2 h), followed by cleavage of poly ADP-ribose polymerase and phosphatidylserine exposure (within 2-3 h), DNA fragmentation (within 3-4 h) and approximately 90% cell death after 16 h. Cell viability was completely restored by a generic caspase inhibitor (z-VAD, 100 µM), but only partially restored (30%) by inhibition of caspase-3 (DEVD, 100 µM) while a caspase-1 inhibitor (YVAD 150 µM) had no effect. To further characterize these events, A20 cell viability was analyzed by flow cytometry using the propidium iodide (PI) exclusion method. In response to FasL, two PI-positive cell populations were distinguishable in which cell death occurred either with DNA fragmentation in a caspase-3 dependent manner (apoptosis) or in the absence of DNA fragmentation (necrosis). Taken together, these results suggest the existence of two different pathways emerging from the Fas receptor, one leading to caspase-3-dependent apoptosis and the other favoring necrosis downstream of caspase-8 but independent of caspase-3.

EXPRESION DE VARIANTES DEL mRNA DE SHBG EN LA TROMPA DE FALLOPIO HUMANA (Expression of SHBG mRNA variants in the human fallopian tube). 1Pinto M., 1Ojeda S., 2Montero J.C., 1Noé G. 1Pontificia Universidad Católica de Chile, Facultad de Ciencias Biológicas, Unidad de Reproducción y Desarrollo. 2 Hospital San Juan de Dios, Servicio de Obstetricia y Ginecología.

SHBG es una glicoproteína plasmática, sintetizada en el hígado, que une esteroides sexuales con alta afinidad. Se han descrito dos variantes del mRNA de SHBG, A-8 y 1-8. Usando RT-PCR con partidores específicos, clonamiento y secuenciación detectamos estas variantes del mRNA de SHBG en trompa de Fallopio humana. Además usando RT-PCR con un nuevo partidor antisence ubicado en el exon 5 y Southern-blot analizamos la expresión de estas variantes en trompas de mujeres en fase folicular, periovulatoria y lútea. Se encontró que algunas trompas sólo expresan la forma 1-5 y que en el período periovulatorio, las trompas expresan mayores niveles de ambas variantes. Estas resultados serán cuantificados determinando la expresión relativa de SHBG y b-actina.
Financiado por FONDECYT 8980008.

PREDICCION DE CARCINOGENICIDAD EN HIDROCARBUROS AROMATICOS POLICICLICOS MEDIANTE REDES NEURONALES ARTIFICIALES CON ALGORITMO BACKPROPAGATION. (Prediction carcinogenicity of polycyclic aromatic hydrocarbons using artificial neural network by algorithm backpropagation) Medina,C. Facultad de Farmacia, Universidad de Concepción. Casilla 160-C, Concepción

Los Hidrocarburos Aromáticos Policiclicos (HAP) son compuestos pirogénicos, es decir, originados en procesos de combustión, por ejemplo: el smog, humo del cigarrillo etc. Los HAP son sustancias contaminantes para el hombre y en muchos casos con reconocidas propiedades carcinogénicas. Es por esto que en ausencia de la información de carcinogenicidad de un HAP de estructura conocida, es de gran utilidad poseer alguna metodología predictiva de esta propiedad conociendo solamente su estructura. El objetivo del presente trabajo, es establecer una metodología basada en redes neuronales artificiales, que permita predecir la carcinogenicidad de cualquier HAP a partir de su información estructural.

Para lograr este objetivo se emplea una red neuronal artificial basada en un algoritmo de retropropagación de errores (backpropagation), la cual fue entrenada con una base de datos correspondiente a estructuras y carcinogenicidades conocidas de HAP. Por otro lado la información estructural fue representada por una serie de índices topológicos adecuados derivados de la teoría de grafos y los datos de carcinogenicidades se dividieron en 2 categorías principales: carcinogenico y no carcinogenico (1 y 0 respectivamente).

Los resultados obtenidos muestran un alto poder predictivo (87%) de carcinogenicidad en HAP, lo cual sugiere que la presente metodología es un eficiente método para predecir la propiedad estudiada en estos compuestos.

FUMONISINA B1: EFECTO EN EL CICLO CELULAR E INDUCCION DE QUIEBRES DE DNA EN CELULAS HUMANAS (fumonisin b1: cell cycle effects and dna strand breaks induction in human cells) Aranda M1., Carrasco J.1, Pérez-Alzola L.P. Laboratorio de Genetica, Departamento de Cs. Biologicas, Facultad de Quimica y Biologia, Universidad de Santiago de Chile

Fumonisina B1 (FB1), micotoxina producida por Fusarium moniliforme, es contaminante de alimentos de alto consumo humano como maiz y trigo. Se sabe que induce hepatocarcinomas en ratas, sin embargo aún no se ha establecido su mecanismo de accion.

Se determinó el efecto de FB1 sobre el ciclo celular e inducción de quiebres de ADN en la linea celular humana Hep-2 tratada durante 4 horas con FB1 (1 o 10 µg/mL). Mediante citometría de flujo se encontró que 10 µg/ml de FB1, disminuye los estados G0/G1 y S, mientras que aumenta el estado G2/M. Por el contrario, el control positivo metil-metano-sulfonato (MMS), mostró un marcado aumento de G0/G1 y un incremento de la fase S. En presencia de MMS y FB1 esta fase S diminuye, aumentando levemente G0/G1.

Se utilizó el ensayo de electroforesis alcalina de una sola célula (cometa) acoplado al de sintesis de ADN no programado (UDS) por incorporación de bromodeoxyuridina (BrUrd) detectado con anti-BrUrd, para determinar los quiebres producidos por una falla de los sistemas de reparación. Se observó quiebres de ADN con 10 mg/mL de FB1 con un tail moment de 3400 comparado con 1800 de los controles. Estos quiebres de ADN podrían ser un evento critico en la muerte celular y/o en el mantenimiento de la inestabilidad genómica en la progresión maligna causada por FB1. No se obtuvo una diferencia significativa en los quiebres inducidos entre células controles y tratadas con 1 µg/ml de FB1 con un tail moment de 1950.
Financiado por Proyecto FONDECYT 1990212 y DICYT-USACH.

CARACTERIZACION DEL TRANSPORTE DE VITAMINA C EN UN MODELO DE CELULAS ENDOTELIALES CEREBRALES HUMANAS EN CULTIVO. (Characterization of Vitamin C transport in human cerebral endothelial cells in culture). Guzmán, C., y Cárcamo, J.G., Departamento de Fisiopatología. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad de Concepción. Patrocinio: Dr. Alejandro Reyes Pinto.

El desarrollo de líneas celulares inmortalizadas a partir de células endoteliales de cerebro humano (HBMEC) ofrece la oportunidad de modelar in vitro el comportamiento de la barrera hematoencefálica. Hemos llevado a cabo una caracterización inicial del transporte de vitamina C en células HBMEC cultivadas in vitro. Nuestros resultados muestran que las células HBMEC transportan tanto la forma reducida, ácido ascórbico, como la oxidada, ácido deshidroascórbico, de la vitamina C. El estudio detallado de la cinética de transporte reveló la presencia de al menos cuatro actividades funcionales con la capacidad para transportar vitamina C. Dos sistemas, uno de elevada afinidad y uno de baja afinidad, con capacidad para transportar ácido ascórbico en forma dependiente de sodio, de los cuales aparentemente ninguno parecería corresponder a las isoformas ya clonadas. También detectamos dos componentes con capacidad para transportar ácido deshidroascórbico, en una forma independiente de sodio, uno de elevada afinidad y uno de baja afinidad, los cuales presentan características funcionales similares a los transportadores de glucosa. Creemos que este modelo nos permitirá establecer si el transporte vectorial de la vitamina C en el sentido luminal a abluminal puede dar cuenta de su elevada concentración a nivel cerebral.
Financiamento: proyectos FONDECYT 3000024 y 1990333.

BIOLOGIA CELULAR

PRESENCIA DE INMUNOGLOBULINAS EN QUISTES HIDATIDICOS DE Echinococcus granulosus. Paredes, R. y Galanti, N. Laboratorio de Biología Celular y Molecular, I.C.B.M., Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

E. granulosus posee un ciclo de vida que considera un hospedero definitivo (cánidos) y un hospedero intermediario (herbívoros y el hombre). En este último genera la enfermedad denominada Hidatidosis, desarrollando los quistes hidatídicos, pudiendo ser estos de dos tipos: los fértiles (productores de protoescólices) y los infértiles.

Con el fin de identificar proteínas con expresión diferencial entre capa germinal fértil e infértil, se obtuvo el patrón electroforético de proteínas totales mediante SDS-PAGE. Una proteína de 27 kDa, que sólo se presenta en capa germinal infértil, se sometió a microsecuenciación parcial de aminoácidos. La secuencia parcial presentó 100% de homología con la cadena liviana de Inmunoglobulina (Ig). La presencia de Ig en líquido hidatídico de quistes infértiles se comprobó mediante precipitación con sulfato de amonio. La precipitación con concentraciones crecientes de cloruro de sodio, permitió encontrar dos fracciones de Ig: la primera con una unión inespecífica que se extrae con bajas concentraciones de sales; y una segunda fracción fuertemente adherida a la capa germinal infértil que no es posible extraerla con una concentración de NaCl 1M, por lo tanto la unión de la Ig con el antígeno es específica para la capa germinal. Finalmente, mediante inmunocitoquímica con anticuerpos anti IgG bovino, se localizó IgG asociada a la capa germinal del quiste hidatídico infértil provenientes de bovinos.

Así, se postula que podría existir una respuesta inmunológica, por parte del hospedero, que cumpliría un rol fundamental en la determinación de la fertilidad en quistes hidatídicos.
Financiado por Proyectos: FONDECYT Nº 1970766, DID,I013/2, DID-Enlace, Andes-Antorcha-Vitae

REGULACION POR CITOQUINAS DE LA EXPRESION DEL RECEPTOR DE GLUCOCORTICOIDES EN SUJETOS NORMALES Y ARTRITIS REUMATOIDE. Erick Riquelme, Carolina Sepúlveda, Hector Gatica, Andrea Holuiggi, Marta Aliste, I. Anneliese Goecke.

Los efectos de los glucocorticoides son mediadas por un receptor intracitoplasmático, llamado receptor de glucocorticoides (RGC). Existen dos isotipos del RGC llamados alfa (RGCa) y beta (RGCb). El RGCa media sus acciones, el RGCb en cambio inhibe las acciones dependientes del complejo hormona-GCRa. Dado el efecto inmunosupresor y antiinflamatorio de los glucocorticoides es fundamental conocer si el GCRb se expresa en células del sistema inmune y si su expresión es regulada por citoquinas, tanto en condiciones normales como en pacientes portadores de una enfermedad inflamatoria crónica, como la artritis reumatoide (AR). El objetivo de este trabajo fue evaluar si el RGCb se expresa en linfocitos T (LT)y B (LB) y estudiar si TNFa y/o IL2+IL4 modulan la expresión de este receptor en estas células en cultivo, provenientes de pacientes con AR y sujetos sanos. Métodos: Se seleccionaron 6 pacientes con AR que no hubiesen recibido GC en las 6 semanas previo al estudio, y 6 sujetos sanos pareados por edad y sexo con los enfermos. En ellos se obtuvo sangre periférica, se aislaron mononucleares y se separaron LT y LB utilizando anticuerpos específicos conjugados con partículas magnéticas. Estas células fueron cultivadas en presencia o ausencia de TNF a o IL2+IL4. Luego se evaluó la expresión del RGCa y GCRb mediante inmunocitoquímica utilizando anticuerpos específicos para cada isotipo del receptor. Los resultados se expresan como porcentaje de células teñidas de un total de 1000 células contadas en duplicado. Resultados: El RGCb se expresa tanto en LT como LB de individuos controles y pacientes con AR. La presencia de citoquinas en el medio de cultivo produjo una tendencia al aumento de la expresión del RGCb en las células de sujetos control, siendo significativo solo para el caso de LB cultivados en presencia de IL2+IL4 v/s medio de cultivo solo (p=0.04). Este efecto fue más notorio en las células de pacientes AR, donde tanto en LT como LB, TNFa indujo un aumento de células inmunopositivas de 13,8 % (p=0.02) y 13,0 % (p=0.04) respectivamente. Lo mismo se observo con la presencia de IL2+IL4 en el medio de cultivo que indujo un aumento de células teñidas de 18,7 % en ambos casos ( p= 0.04). El RGCa se expresó en el 100 % de las células estudiadas, lo cual no varió en pacientes o controles, ni en presencia o ausencia de citoquinas. Se concluye que LT y LB expresan ambos isotipos del RGC siendo la expresión del RGCb inducida por citoquinas como TNFa e IL2+4, fenómeno más evidente en células de pacientes con AR. Esto pudiera implicar, que en estos pacientes puede inducirse un estado de resistencia a corticoides durante los períodos de mayor actividad inflamatoria de la enfermedad.
FONDECYT : 197-0413.

MORFOGENESIS IN VITRO EN LINEAS CELULARES GASTRICAS DE RATA. (In vitro morphogenesis in rat gastric cell lines). Nelson, P., Cabello, A. y Garrido, J. Departamento de Biología Celular y Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.

Previamente, hemos caracterizado dos líneas celulares de fenotipo epitelial obtenidas a partir de mucosa gástrica de rata, denominadas ERG-1 y ERG-2. Estas células, al ser cultivadas por plazos de 7-10 días en presencia de EGF (ERG-1), o en medio con baja concentración de suero fetal bovino (0,25%) adicionado o no de HGF (ERG-2), experimentan un proceso morfogenético que culmina en la aparición de estructuras tubulares de aspecto glandular. En este trabajo presentamos la caracterización de una tercera línea celular (ERG-3) del mismo origen que las anteriores, que no presenta tubulogénesis en las condiciones de cultivo y/o suplementación arriba señaladas. Con el propósito de perfeccionar y extender nuestro modelo hemos estudiado el proceso de tubulogénesis en estas tres líneas celulares al ser cultivadas en matrices tridimensionales de colágeno 1, y hemos comparado las características de este proceso con la tubulogénesis en cultivos bidimensionales sometidos a condiciones semejantes de estímulo y suplementación. En los cultivos realizados en matrices tridimensionales el proceso morfogenético se acelera, y las estructuras tubulares generadas son más complejas. Esto es especialmente notorio en el caso de la línea ERG-3, que cultivada en matriz de colágeno y estimulada con HGF completa una "branching morphogenesis" extensa ya a los 4 días de cultivo.
Financiado por FONDECYT Nº 1980961

SOBRE-EXPRESION DE c-rel DE LA FAMILIA NFkB/Rel AL INHIBIR LA METILACION DEL DNA CON 5-AZACITIDINA EN CELULAS JURKAT (Overexpression of c-rel by 5-azacytidine inhibition of DNA methylation in Jurkat cells). Metz, C., y Jacobelli, S. Dpto. de Inmunología Clínica y Reumatología. Facultad de Medicina. P. Universidad Católica de Chile.

Los factores de transcripción de la familia NFkB/Rel regulan la expresión de numerosos genes de la respuesta inmune e inflamatoria y su falla puede llevar a serias disfunciones en estos procesos. La función de c-Rel, uno de los miembros de esta familia, depende de una estricta regulación de sus niveles de expresión. Hemos descrito recientemente que c-rel se sobre-expresa en linfocitos T de pacientes con enfermedades autoinmunes, como lupus eritematoso generalizado (LEG) y artritis reumatoídea (AR), en los cuales otros autores han encontrado hipometilación del DNA. Como la metilación del DNA es un mecanismo general de regulación de la expresión génica estudiamos aquí el efecto de inhibir la metilación del DNA con 5-azacitidina sobre la expresión de c-rel en células Jurkat, una línea celular derivada de linfocitos T. Luego de tratar las células por 7 días con 5-azacitidina se encontraron elevados los niveles del mRNA de c-rel y de la proteína Rel, analizados por RT-PCR competitivo y por inmunoblot, respectivamente. Además, al estimular las células con PMA + ionomicina se observó un aumento más rápido mRNA de c-rel en las células tratadas con 5-azacitidina, alcanzando más del doble de los niveles controles a las 4 horas. Todo esto remeda las observaciones que hemos realizado en linfocitos de enfermos con LEG y con AR, sugiriendo un nexo entre la sobre-expresión de c-rel y la hipometilación descrita en autoinmunidad.
(Fondecyt# 1981026).

DESTINACION APICAL DE LAS ISOFORMAS DE RECEPTORES OPIOIDES EN LA SUPERFICIE DE CELULAS MDCK TRANSFECTADAS. (Apical sorting of the opioid receptor isoforms in transfected MDCK cells). Sánchez, F.; Soza, A. Depto. Inmunología Clínica y Reumatología, Fac. De Medicina y Depto. Biología Celular y Molecular, y FONDAP, Fac. Ciencias Biológicas. P. Universidad Católica. Patrocinante: Alfonso González

Los receptores opioides mu, delta y kappa se expresan predominantemente en sistema nervioso central y pertenecen a la superfamilia de receptores acoplados a proteína G que atraviesan siete veces la membrana. Aunque presentan un 70% de homología entre sí, se diferencian en sus propiedades farmacológicas, unión a ligando y distribución en sistema nervioso central. No se ha descrito una clara regionalizacion somatodendritica o axonal de estos receptores en neuronas. En este trabajo hemos utilizado el modelo de las células epiteliales MDCK polarizadas, en el cual la segregación apical y basolateral se ha homologado a la axonal y dendrítica respectivamente, para analizar si poseen información de regionalización dominio específica. Las tres isoformas. mostraron una distribución predominantemente apical al expresarlas mediante transfección. en células MDCK. Este modelo experimental podría permitir identificar determinantes estructurales de regionalización funcionales en neuronas
(Proyectos FONDECYT #2990026, #3990016, 1980974, FONDAP 13980001).

DETECCION DE GENES CON EXPRESION DIFERENCIAL DURANTE LA RESPUESTA HEPATICA DE FASE AGUDA EN RATAS FISHER 344 SENESCENTE, MEDIANTE cDNA MICROARRAYS..(cDNA microarray analysis shows differential expression of a subset of genes, during the hepatic acute phase response in aged Fisher 344 rats). *Gómez C., #Sell C., *#Walter R. *Instituto de Ciencias Biomédicas (ICBM), Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Santiago, Chile. #The Lankenau Medical Research Center, Wynnewood, PA, USA. Patrocinio: Dr. Felipe Sierra.

La respuesta hepática de fase aguda (APR) es una reacción fisiológica contra daño local o sistémico tal como infección, cirugía o isquemia. Usando la rata como modelo hemos detectado que los animales senescentes, en relación a sus contrapartes jóvenes, presentan una APR alterada durante las primeras horas que siguen a una inyección de lipopolisacárido bacteriano (LPS).

Para caracterizar los genes que regulan la iniciación de la APR en animales senescentes inyectamos (i.p.)ratas Fisher 344 de 6 y 23 meses con 2 mg/kg LPS. Después de 4 horas extrajimos los hígados, purificamos RNA poli A+ y preparamos sondas de cDNA que fueron hibridadas a cDNA microarrays con 1176 genes inmobilizados en una membrana de nylon. Nuestros resultados mostraron que: el tratamiento con LPS indujo expresión diferencial de genes en ambos grupos experimentales principalmente en factores transcripcionales, moléculas involucradas en transducción de señales y en rutas metabólicas. Al utilizar RT-PCR para analizar la expresión de algunos genes seleccionados, corroboramos lo obtenido por cDNA microarrays. Particularmente, la inducción de la expresión de MIP-1a, quimioquina involucrada en quimiotaxis y hematopoyesis, muestra un pronunciado descenso en los animales senescentes.

Nuestros resultados indican que durante las primeras horas que siguen al tratamiento con LPS, existe expresión génica diferencial entre animales jóvenes y viejos. Hallazgos como el de MIP-1 a, dan nuevas e interesantes direcciones a nuestra comprensión de los efectos de la edad sobre la APR.
Agradecimientos: FEBA y The Lankenau Institute for Medical Research.

EXPRESION DE REST Y DEL CANAL DE SODIO NEURONAL EN EL DESARROLLO TEMPRANO DE Xenopus laevis.(Expression of REST and neuronal sodium channels during the early development of Xenopus laevis) Fuentes, R. y Armisén, R., ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. Patrocinio: Dr. Miguel Allende Connelly.

La expresión del canal de sodio es un evento importante en la adquisición de la madurez electrofisiológica de las neuronas primarias de Xenopus laevis. Se ha demostrado en líneas celulares no neuronales y líneas neuronales indiferenciadas que el canal de sodio tipo II es regulado negativamentre por el represor transcripcional REST. Para determinar la importancia fisiológica de la expresión de REST en el comienzo de la transcripción de canal de sodio in vivo hemos caracterizado el patrón espacial y temporal de expresión de mRNA codificante del canal de sodio y del homólogo de REST en el embrión de X. Laevis. La hibridización in situ (ISH) en embrión entero con una sonda contra el canal de sodio tipo II de X. Laevis(xNaV1.2) muestra que su expresión en el estadío de neurula tardía está restringida a neuronas primarias. El cDNA de REST de X. laevis (xREST) fue obtenido mediante una combinación de un screening de genotecas de cDNA y PCR. La secuencia aminoacídica predicha para xREST no presenta la región carboxilo terminal presente en los homólogos de REST de humano y de rata. Además tiene un 60% de identidad con REST de mamífero en los dominios amino represor y de unión a DNA. La ISH en embrión entero de xREST muestra una expresión difusa en el estadío de gástrula, quedando restringida a tejidos no neuronales en el estadío de neurula tardía. El patrón de expresión de estos genes es consistente con la función propuesta para REST en la expresión del canal de sodio tipo II.
Financiado por FONDECYT 2980063 (RA) y 4000031 (RA)

MUTACION SITIO DIRIGIDA DEL CININOGENO T DE RATA Y EFECTOS EN EL PROCESO DE PROLIFERACION CELULAR. (Site-directed mutagenesis of rat T-kininogen, and its effects on cell proliferation). *Pérez, C., *Nishimura, S. y *#Sierra, F. *Instituto de Ciencias Biomédicas (ICBM), Facultad de Medicina, Universidad de Chile, Santiago, Chile. # The Lankenau Medical Research Center, Wynnewood PA, USA.

El cininógeno T (T-KG) es una isoforma de cininógeno sintetizada principalmente por el hígado de ratas (Rattus norvegicus). En fibroblastos murinos, niveles bajos de expresión de T-KG llevan a una disminución de la proliferación celular, mientras que niveles altos (bajo control del promotor de CMV), son completamente incompatibles con la proliferación. Parte de estos efectos parecen ser mediados por inhibición de la vía ERK de transducción de señales. En este estudio se describe la construcción de una serie de mutaciones sitio dirigidas de cininógeno T, con el fin de eliminar cada una de las funciones conocidas de la proteína. Estas mutantes (bajo control de un promotor inducible por IPTG) han sido transfectadas en fibroblastos murinos y hemos medido la expresión de T-KG y algunos elementos de la vía ERK de transducción de señales. Consistente con la participación de la vía ERK en los efectos antiproliferativos del T-KG, la activación constitutiva de esta vía mediante expresión de Ha-Ras permite rescatar líneas celulares con expresión elevada de T-KG. Por otro lado, estas células presentan una reversión parcial de las características transformadas de proliferación normalmente impartidas por Ha-Ras. Para dilucidar la naturaleza molecular de estos cambios, hemos transfectado el cDNA completo de T-KG bajo control de CMV, en células A10, una línea celular que expresa Ha-Ras en forma condicional (inhibible por IPTG). En ambos modelos experimentales, además de las mediciones moleculares descritas, hemos comenzado a evaluar parámetros celulares mediante recuento celular e incorporación de bromodeoxiuridina al DNA.
Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1981064 y NIH AG-13902

FISIOLOGIA CELULAR

TRANSPORTE PREFERENCIAL DE VITAMINA C OXIDADA EN HEPATOCITOS DE RATA. (Preferential transport of oxidized Vitamin C in rat hepatocytes). Zúñiga, F., Vásquez, O. y Vera, J. C. Departamento de Fisiopatología. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad de Concepción. Patrocinio: Dr. Francisco Nualart

Las células de mamíferos transportan vitamina C reducida a través de transportadores dependientes de sodio, ó SVCTs, y vitamina C oxidada a través de transportadores de glucosa, ó GLUTs. Hemos caracterizado la expresión y función de transportadores de vitamina C en hepatocitos de rata. Análisis por RT-PCR reveló que los hepatocitos expresan el ARNm para la isoforma SVCT1 del transportador de ácido ascórbico, y en menor medida el ARNm para la isoforma SVCT2. Sin embargo, ensayos de transporte a diferentes temperaturas, y en la presencia y ausencia de iones sodio, revelaron que los hepatocitos carecen de la capacidad para transportar ácido ascórbico. Por otro lado, los hepatocitos de rata transportan eficientemente el ácido deshidroascórbico a través de un transportador de baja afinidad, y el transporte ocurre en una forma dependiente de la temperatura pero independiente de la presencia de iones sodio. Análisis cinéticos, acoplados a ensayos de competencia con sustratos e inhibidores específicos de los transportadores de glucosa, además de estudios de expresión utilizando RT-PCR y de inmunolocalización in situ, sugieren que GLUT2, un transportador de glucosa de baja afinidad que es expresado a elevados niveles en el hepatocito, sería el principal responsible de la captación de vitamina C oxidada en hepatocitos de rata.
Financiado por proyecto FONDECYT 1990333

EFECTO DEL CININOGENO-T EXTERNO SOBRE LA PROLIFERACION Y LA VIA MAPK EN DIVERSAS LINEAS CELULARES (Effect of exogenous T-KG on proliferation and ERK activity in several cell lines) *Pérez-M,V., *Acuña-Castillo, C. y *#Sierra F. *Instituto de Ciencias Biomédicas (ICBM), Facultad de Medicina, Universidad de Chile,, Santiago, Chile. # The Lankenau Medical Research Center, Wynnewood, PA, USA. Patrocinio: Dr. Felipe Sierra.

El Cininógeno-T (T-KG) es una proteína multifuncional que posee actividad inhibidora de proteasas de cisteina. Se expresa principalmente en hígado y macrófagos y en nuestro laboratorio lo hemos caracterizado como un buen biomarcador del envejecimiento en ratas. Además, observamos que la transfección de fibroblastos con T-KG resulta en una inhibición de la proliferacion celular, que se correlaciona con un aumento en los niveles de MKP-1 y de ERK 1/2 inactivo.

En células que lo expresan, el T-KG se distribuye entre una fracción intracelular y una secretada. Para estudiar los efectos de la forma secretada en ausencia de T-KG intracelular, hemos usado T-KG recombinante, así como sobrenadantes de células que sobreexpresan la proteína, para medir sus efectos en células que no la producen (fibroblastos, linfocitos T y células endoteliales). Nuestros resultados sugieren que los efectos del T-KG sobre la proliferación y sobre la vía ERK son separables, y que el T-KG secretado es capaz de inhibir la proliferación de células que no lo producen. Como las células elegidas representan a algunos de los tipos celulares que entran en contacto directo con T-KG circulante, estos resultados tienen un gran significado fisiológico, ya que amplían el rango de células cuya proliferación podría ser inhibida por el aumento de T-KG sérico durante el envejecimiento.
Financiamiento: Proyecto Fondecyt #2000038.

CARACTERIZACION DEL TRANSPORTE DE VITAMINA C EN UN MODELO DE CELULAS EPITELIALES INTESTINALES EN CULTIVO. (Characterization of Vitamin C transport in intestinal epithelial cells in culture). Henríquez, E. A., Kempe, S. S.,y Maulén, N. P. Departamento de Fisiopatología. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad de Concepción.Patrocinio: Dr. Marcelo Bustamante.

Hemos caracterizado el transporte de vitamina C en células CaCo-2 de carcinoma de colon humano, las que poseen características morfológicas y funcionales similares a enterocitos diferenciados de intestino delgado. Las células CaCo-2 transportan tanto la forma reducida (AA) como la oxidada (DHA) de la vitamina C y un estudio detallado de la cinética de transporte reveló la presencia de al menos cuatro actividades funcionales con la capacidad para transportar vitamina C. Dos componentes, uno de elevada afinidad y uno de baja afinidad, poseen la capacidad para transportar AA en una forma dependiente de sodio, de los cuales aparentemente sólo uno parecería corresponder a una isoforma ya clonada molecularmente. También detectamos dos sistemas con la capacidad para transportar DHA en una forma independiente de sodio, uno de elevada afinidad y uno de baja afinidad, los que presentan las características esperadas para los transportadores de glucosa presentes en estas células. Especulamos que la segregación selectiva de estas familias de transportadores de vitamina C a los compartimentos membranosos apicales o basolaterales de las células intestinales podría determinar que la vitamina sea transportada en forma vectorial en el sentido apical a basolateral.
Financiado por proyectos FONDECYT 3990007 y 1990333.

TRANSPORTE ANIONICO EN ERITROCITOS HUMANOS SOMETIDOS A ESTRES OXIDATIVO (Anionic transport of human erythrocytes submitted to oxidative stress) Ferrer, V., Lissi, E.A., Celedón , G. Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias, Universidad de Valparaíso y Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile.

La inducción de un estrés oxidativo en eritrocitos con 2,2' azobis-(2-amidinopropano)(AAPH) produce daño en la proteína banda 3, previo a la lisis celular. Sin embargo, no se conoce cómo se afecta su función de transporte, lo que es de interés estudiar por la importancia de esta función en la entrega de oxígeno a los tejidos.

Se evaluó el transporte aniónico estudiando el eflujo de NBD-taurina desde eritrocitos tratados durante 90min con AAPH (75mM) y posteriormente cargados con NBD-t. Se comprobó que este transporte es a través de banda 3 usando DIDS. A 30ºC (n=3) y en condiciones asimétricas (Cl- interno - SO4externo), se observó que la velocidad inicial aumentó (90.7±32.7%) y el tiempo de latencia disminuyó (52.4 ±12.9%); estas modificaciones indicarían una mayor eficiencia del intercambio SO4/Cl-. Además, la velocidad máxima disminuyó (17.2±6.7%) indicando una menor eficiencia en la unión de NBD-t al transportador. Estas alteraciones del transporte son dependientes del tiempo de exposición a AAPH y muestran las misma tendencias de cambio si el estudio se realiza a 37ºC.

Se concluye que hay una pérdida de selectividad del transportador, lo que implicaría un mejor transporte de sulfato como consecuencia de la modificación oxidativa. Esto será analizado realizando experimentos en condiciones simétricas.
Financiamiento: Proyecto FONDECYT 1000-022.

EFECTO DE LA ADMINISTRACION CRONICA DE MELATONINA EN EL APRENDIZAJE VISUO-ESPACIAL EN RATAS. (Effect of chronic administration of melatonin on visuo-spatial learning in rats). Burgos, H1., Zollner, J1., Ugarte, M.L1., Fernández, V2. 1Escuela de Psicología, Universidad Santo Tomás, 2Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

Melatonina es un potente antioxidante que ha comenzado a ser utilizado en protocolos clínicos en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, dado su efecto citoprotector sobre neuronas hipocampales en modelos experimentales de enfermedades neurodegenerativas. No obstante existen antecedentes contradictorios respecto a su acción en la memoria de corto plazo medida a través de pruebas olfatorias y de ansiedad. Se evaluó en el laberinto de Olton el desempeño visuo-espacial de ratas machos Long-Evans (Hooded) tratados con melatonina a partir del día Post-natal 60. Los resultados mostraron que la administración crónica de melatonina (10 mg/kg/10días vía intraperitonial)indujo un aumento en el número de errores, así como un incremento en el tiempo total de logro. Estos resultados indican que melatonina retarda el aprendizaje visuo-espacial (memoria de trabajo) y sugieren un déficit evidente en el procesamiento hipocampal.
Financiado por Proyecto Nº 17 Universidad Santo Tomás.

EFECTO DE UNA TERAPIA DE REEMPLAZO HORMONAL (TRH) ESTROGENO-PROGESTINA EN COMPOSICION Y FUNCION DE HDL (LIPOPROTEINA ALTA DENSIDAD). (Effect of estrogen-progestin replacement hormonal therapy on HDL composition and function). Ulloa, N1. Bustos, P1. Arteaga2, E. Durán1, D. y Calvo, C1. Facultad de Farmacia, Universidad de Concepción1, Facultad de Medicina, Universidad Católica de Chile2. Patrocinante: Víctor Silva Figueroa1

La enfermedad cardiovascular (ECV) ocasiona un 33% de muertes en mujeres chilenas en edad de menopausia. La menopausia se asocia a modificaciones aterogénicas de lipoproteinas. Existe correlación inversa entre ECV y Colesterol-HDL. La TRH es eficaz para elevar colesterol-HDL.

Objetivo: Evaluar efecto de TRH cíclica-combinada en composición-función de HDL.

Métodos: Doble-ciego aleatorio en 28 mujeres post-menopáusicas con 1 año de amenorrea mínimo, FSH >50IU/L. Se excluyeron fumadoras, consumidoras de etanol(>28ml/día), diabéticas y tratadas con hipolipemiantes y/o hipotensores. 16 mujeres recibieron 0.625mg estrógenos-conjugados más 5mg de medroxi-progesterona durante los 14 últimos días del ciclo. Las 12 restantes recibieron placebo. Plasma en ayuno fue colectado previo y post-terapia (0,15,43,71días). Se cuantificaron lípidos plasmáticos, lípidos de HDL, subpoblaciones de HDL (partículas LpA-I y LpA-I:A-II), actividad de LCAT y eflujo de colesterol desde células- Fu5AH.

Resultados-Conclusiones: Análisis intra-grupo, 71 días post-terapia demostraron incrementos significativos (p<0.05) de LpA-I, HDL-colesterol, HDL-fosfolípidos, HDL-triglicéridos, HDL-colesterol-libre, eflujo de colesterol y disminución significativa en colesterol total y LDL-colesterol. Análisis inter-grupo, 71 días-post-terapia demostraron incremento significativo de LpA-I, HDL-fosfolípidos, HDL-triglicéridos, HDL-colesterol-libre y disminución de LDL-Costerol. No hubo cambios siificativos en actividad de LCAT ni partículas LpA-I:A-II.Financiado por INSERM/CONICYT 97042 y DIU 99.072.021-1

THE Aß-COPPER COMPLEX CATALYZES H2O2 GENERATION IN THE PRESENCE OF REDUCING AGENTS. Opazo C.,*, Goto J..J., Huang X., Inestrosa N.C.* and Bush A.I. Laboratory for Oxidation Biology, Genetics and Aging Unit, and Department of Psychiatry, Harvard Medical School, Massachusetts General Hospital, Boston, USA. *Centro de Regulación Celular y Patología, Departamento de Biología Celular y Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.

The Alzheimer amyloid b-peptide (Ab) binds copper with attomolar affinity forming a complex able to generate hydrogen peroxide through metal ion reduction. This Ab redox activity correlates with a potentiation of Ab neurotoxicity. In the present work we evaluated different reducing agents as sources of electrons for the Ab1-42 redox activity. Hydrogen peroxide was measured by dichlorofluorescein-peroxidase fluorimetric assay. We found that Tris (2-carboxyethyl)-phosphine (TCEP), Vitamin C, L-Dopa and Dopamine were the best substrates for H2O2 production by Ab1-42. Ab1-42 with the rat/mouse sequence possesses decreased activity compared to Ab1-42 with human sequence. The Ab activity was inhibited for specific anti-Ab antibodies, strong copper chelators and Superoxide Dismutase inhibitors. The Ab-Cu complex displayed enzymatic behavior in hydrogen peroxide production, with Vmax= 21 nM/min and Km= 29 µM with dopamine as the substrate.

Interestingly, we found that zinc-depleted Superoxide Dismutase (Cu-ESOD), related to familial Amyotrophic lateral sclerosis also produces H2O2 using biological reducing agents. These findings may be a common pathogenic link in the oxidative damage observed in both diseases.

Supported by FONDECYT Grant 2990087 to C.O.; the American Health Assistance Foundation to A.I.B.; FONDAP-Biomedicina, Nº 13980001, CIMM-ICA and Presidential Chair in Science to N.C.I.

EFECTO DEL a-TOCOFEROL EN LOS NIVELES SERICOS DE TNF-a EN RATAS HIPERTIROIDEAS (Effect of a-tocopherol on the seric levels of TNF-a in hyperthryoid rats). Tapia G., Fernández V., Sepúlveda A., Videla L.A. Programa de Farmacología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

El hipertiroidismo aumenta el metabolismo oxidativo y la generación concomitante de especies reactivas del oxígeno y del nitrógeno, desencadenando un estrés oxidativo hepático. Esta condición determina hiperplasia e hipertrofia de las células de Küpffer (CK), macrófagos hepáticos que liberan TNF-a, citoquina proinflamatoria.

Para evaluar el efecto del estrés oxidativo inducido por el hipertiroidismo experimental sobre la liberación de TNF-a, como también la acción de un antioxidante (a-tocoferol), se cuantifican los niveles séricos de esta citoquina (ELISA) en ratas tratadas con (a) 0,1 mg/kg de L-3,3,,5 triiodotironina (T3) (b) 100 mg/kg de a-tocoferol (c) T3, pre-tratadas con a-tocoferol y (d) vehículos de T3 y a-tocoferol (controles). Estos resultados se relacionaron con los niveles hepáticos de glutatión total y con los de proteínas oxidadas, como parámetros de estrés oxidativo. Respecto a controles, el hipertiroidismo indujo cambios significativos tanto en el TNF-a (100 veces de aumento) como en el glutatión (46,5% de disminución), efectos que fueron revertidos por el pretratamiento con a-tocoferol. La oxidación de proteínas no fue modificada por los distintos tratamientos.

Se concluye que el estrés oxidativo inducido por T3 estimula la liberación de TNF-a, siendo ambos contrarrestados por el pretratamiento con un antioxidante señalando una estrecha correlación entre estrés oxidativo y la liberación de la citoquina.
FONDECYT 1000887.

BIOLOGIA CELULAR

MECANISMOS DE TRANSDUCCION DE SEÑALES QUE MEDIAN LA EXPRESION DE MMP-9 POR TGF-B1 EN LA CARCINOGESIS DE PIEL DE RATON (TGF-ß1 signaling transduction pathways in MMP-9 expression of mouse skin carcinogenesis) Santibáñez, JF.(1), Hurtado, C.(1), Fabra, A.(2), Martínez J.(1) y Quintanilla,M.(3). (1)INTA, Universidad de Chile. (2)Institut de Recerca Oncologica, Barcelona, España. (3)Instituto de Investigaciones Biomédicas, Madrid, España

TGF-b1 ha sido postulado como un factor con un papel dual en la progresión tumoral. En etapas tempranas de la progresión inhibe la proliferación e induce la diferenciación, en cambio en etapas tardías estimula producción de proteasas, invasividad y malignidad tumoral. En nuestro laboratorio hemos estudiado el papel de TGF-b1 en la producción de la metaloproteasa de matriz de tipo 9 (MMP-9) utilizando un panel de líneas celulares (queratinocitos inmortalizados y de carcinomas escamosos y fusiformes) representativo de los distintos estadíos de la carcinogénesis de piel ratón. Nuestro objetivo ha sido dilucidar los mecanismos de señalización por los cuales TGF-b1 modula la producción de MMP-9 en la progresión tumoral. Nuestros resultados indican un aumento en la producción basal de MMP-9 en relación con el mayor grado de malignidad celular de las líneas estudiadas. El tratamiento con TGF-b1 estimuló la producción de MMP-9 sólo en las líneas derivadas de carcinomas. Del análisis de tres rutas de señalización intracelular (Smad, p38 y Ras-ERK1,2) descritas para TGF-b1, observamos que la intervención de las rutas de Smad y p38 (utilizando líneas estables transfectadas con el dominante negativo para DPC4/Smad4 y el inhibidor especifico SB 203580 respectivamente) no produjo una inhibición de la secreción de MMP-9 estimulada por TGF-b1. Al bloquear la ruta de Ras-ERK1,2 (mediante un Dominante Negativo para Ras y el inhibidor de MEK PD98059) se observó una fuerte inhibición del estimulo del factor sobre la producción de MMP-9. Los resultados expuestos nos permiten concluir que TGF-b1 modula la producción de MMP-9 a través de la activación de la ruta de MAP quinasas Ras-ERK1,2.
Financiamiento: FONDECYT 3000045 y DID I00-99/2

ACCION DE TALIDOMIDA EN EL PATRON ADHESIVO DEL ESTROMA DE LA MEDULA OSEA: IMPLICANCIAS EN EL TRATAMIENTO DEL MIELOMA MULTIPLE. (Thalidomide activity in bone marrow stroma adhesive pattern: implicancy in Multiple Myeloma therapy). Fernández M.*, Simon V.*, Reyes X.*, Alarcón G.** Unidad de Biología Celular, INTA, U. de Chile* y Servicio de Oncohematología, Hospital DIPRECA.**

El Mieloma Múltiple (MM) es una neoplasia de células B caracterizada por la acumulación en la médula ósea (MO) de células plasmáticas (CP) malignas. A la fecha, es una enfermedad incurable lo que hace que constantemente se esté buscando nuevos esquemas de terapia. En los últimos años, la terapia con Talidomida en pacientes con MM refractario a quimioterapia convencional ha resultado ser eficaz en inducir respuestas marcadas y duraderas. Sin embargo, a pesar de los conocidos efectos antiangiogénicos de Talidomida la densidad microvascular de la MO, aumentada en el MM, no cambia significativamente en todos aquellos pacientes con una respuesta satisfactoria. Esto sugiere que Talidomida podría además estar actuando a otro nivel en el microambiente medular. Dado que tanto la proliferación como la sobrevida de las células de MM dependen de su adhesión al estroma del la MO, estudiamos el efecto de Talidomida en: a) la adhesión de células de MM a células de estroma de MO, por citometría de flujo y b) el depósito de matriz extracelular mediante microscopía confocal y Western blott. Los resultados obtenidos muestran que Talidomida inhibe tanto la adhesión de CP de MM a células de estroma de MO como el depósito de moléculas de matriz extracelular. Se puede inferir entonces que Talidomida no sólo es un agente antiangiogénico sino que también antiadhesivo.
(Proyecto FONDECYT 1990082)

EXPRESION DE TRANSPORTADORES DE HEXOSAS EN GLIA EPENDIMARIA TUMORAL HUMANA. (Hexose transporter expression in human tumoral ependymal glia). Carrasco, M., Godoy, A., Reinicke, K., Pérez, F., Tenhamm, E.,. Montecinos, H, Nualart, F. Laboratorio de Neurobiología, Depto. de Histología y Embriología, Universidad de Concepción. Instituto de Neurocirugía, Santiago.

Las células ependimarias son un tipo especializado de glia que recubre la pared de las cavidades ventriculares cerebrales. Estas células participan en el movimiento de líquido cefalorraquideo, síntetizan diferentes factores que liberan a los ventrículos y estarían involucradas en neurogénesis post-natal.

Durante los primeros años de vida pueden transformarse neoplásicamente generando tumores intraventriculares denominados ependimomas. Las células ependimarias normales presentan una alta expresión de transportadores de glucosa GLUT1 y GLUT2, sin embargo, se desconoce qué isoformas de GLUT se expresan en las células tumorales. Se realizó un análisis inmunocitoquímico de 27 ependimomas, observándose en un 89% de los tumores una baja expresión de GLUT1. Sin embargo, GLUT2 mostró una reacción citoplasmática intensa en un 44% de los tumores, leve en un 26% y negativa en un 30%. En una segunda etapa se realizaron análisis cinéticos de captación de glucosa utilizando células tumorales aisladas de ependimoma y mantenidas en cultivo. Las contantes cinéticas mostraron solamente la expresión de GLUT1, lo que fue confirmado por estudios de RT-PCR. Considerando los resultados obtenidos en otros tumores cerebrales, que indican una alta expresión de la isoforma GLUT1, se puede sugerir que los ependimomas se adaptan metabolicamente sin inducir la sobre-expresión de esta isoforma. La expresión de GLUT2, en un porcentaje significativo de tumores, indicaría una adaptación metabólica particular de tumores que crecen en regiones internas del cerebro y en contacto con el líquido cefalorraquideo.
Proy. FONDECYT 1980130

AUTOINMUNIDAD CONTRA PROTEINAS P RIBOSOMALES Y EL RECEPTOR DE DOPAMINA D2 EN RELACION CON MANIFESTACIONES NEUROPSIQUIATRICAS EN LUPUS. (Autoimmunity against ribosomal P proteins and dopamine receptor D2 in relation with lupic neuropsichiatric manifestations) Burgos P, Massardo L, y González A. Dpto de Inmunología Clínica y Reumatología, Facultad de Medicina. Dpto. Biología Celular y Molecular, Fac. Ciencias Biológicas y FONDAP, P. Universidad Católica de Chile y MIFAB.

Las manifestaciones neurosiquiátricas en pacientes con Lupus Eritematoso Generalizado (LEG) se han asociado por largo tiempo con autoanticuerpos dirigidos contra un epítopo de 22 residuos presente en tres proteínas ribosomales. El mecanismo que da cuenta de esta asociación es desconocido pero supone una reactividad cruzada con alguna proteína en la superficie de células neuronales, que no ha sido identificada. En este trabajo hemos detectado un proteína p>230kDa integral de membrana plasmática en células N2a utilizando sueros de pacientes con LEG y un anticuerpo policlonal hecho contra el péptido P sintético. Además, en sinaptosomas aislados de cerebro de rata detectamos tanto la p>230kDa como otra proteína de 85kDa (p85) que aparece en la superficie sinaptosomal por despolarización y está concentrada en cuerpo estriado, región relacionada con desórdenes neurosiquiátricos. Resultados de alineamiento e inmunoreactividad cruzada sugieren que la p85 correspondería al receptor de dopamina D2 (D2R). La p>230kDa podría corresponder a formas oligoméricas del D2R previamente descritas.
Financiado en parte por FONDECYT#1980974; #2990025, FONDAP 13980001 y Cátedra Presidencial en Ciencias.

INHIBICION DE LA PROLIFERACION DE EPIMASTIGOTES DE TRYPANOSOMA CRUZI POR ACCION DE LA DEHIDROLEUCODINA (Inhibition of proliferation of Trypanosoma cruzi epimastigotes by Dehydroleucodine action) 1Jiménez Ortiz V, 1Sosa M.A, 3Giordano O, 2Galindo M., 2Galanti N. 1IHEM, UNCuyo; 2ICBM , Facultad de Medicina, UChile; 3Cat. De Qca. Orgánica, UNSL.

La dehidroleucodina (DhL) es un principio activo extraído de Artemisia douglassiana que responde a una estructura de sesquiterpeno lactona.

Basándonos en la actividad antiprotozoaria de otros extractos naturales, hemos estudiado el efecto de esta droga purificada, sobre cultivos de epimastigotes de T. cruzi. El trabajo se desarrolló sobre cultivos axénicos de epimastigotes de la cepa tulahuen en medio Diamond, tanto en fase estacionaria como exponencial de la curva de crecimiento. Los flagelados fueron sometidos a diversas concentraciones de DhL, encontrándose una clara inhibición de la proliferación parasitaria por efecto de la droga tras 24 horas de exposición a la misma. No hubo diferencias significativas entre ambas fases de crecimiento.

Concentraciones de 2,5 y 5 ug/ml de DhL son efectivas para inhibir la proliferación de epimastigotes, sin provocar un porcentaje significativo de muerte celular.

El efecto antiproliferativo fue dependiente de la concentración, y hemos determinado en forma precisa las dosis necesarias para provocar la inhibición de la proliferación y/o la muerte celular.

Confirmamos que el efecto inhibitorio se debe a la acción de la DhL y no a la acción de los solventes utilizados.

Además se realizó un estudio detallado sobre la estabilidad de la droga en el medio de cultivo.

Bajo la acción de la DhL, se observaron por microscopía óptica cambios morfológicos importantes tales como alteración de la forma, vacuolización citoplasmática y picnosis nuclear.

Se estudió el efecto de la DhL sobre epimastigotes sincronizados observándose que en concentraciones similares a las mencionadas, la droga inhibe la multiplicación de los parásitos.

ENFERMEDAD DE ALZHEIMER: NEUROPROTECCION MEDIADA POR MOLECULAS PROINFLAMATORIAS . (Alzheimer's disease: Neuroprotection mediated by proinflammatory molecules). Ramírez, G., von Bernhardi, R. Facultad de Medicina, U. de los Andes, Santiago, Chile. Patrocinante: Eugenín, J.

La enfermedad de Alzheimer se caracteriza por la neurodegeneración y la formación de placas seniles, las cuales están constituidas principalmente por el péptido beta-amiloide (AB). Estrechamente asociadas a las placas, se observan microglías y astrocitos. Esta característica neuropatológica nos condujo a investigar el papel de la activación glial en la neurotoxicidad inducida por AB. Con este objetivo, cultivos primarios de hipocampo fueron expuestos a: 1) AB 2 mM , 2) medio condicionado (MC) de microglías tratadas con AB, 3) MC de cultivos mixtos (50% microglías+50% astrocitos) tratados con AB. El efecto neurotóxico del AB se evaluó por el ensayo TUNEL, reducción del MTT e inmunocitoquímica. Los resultados indican que en cultivo de hipocampo: a) el AB induce apoptosis, 3.5% de las células control son apoptóticas y 16% de las expuestas a AB, p<0.01. b) El MC de microglías tratadas con AB induce apoptosis, efecto no observado con el MC de cultivos mixtos tratados con AB. c) La exposición a AB+moléculas proinflamatorias (1mg/mL LPS+10 ng/mL IFNg) disminuyó la apoptosis, siendo similar al control, y mejoró la capacidad reductora de MTT en glías expuestas a AB. Sugerimos que las moléculas proinflamatorias podrían tener un efecto neuroprotector, probablemente mediado por la activación de los astrocitos, los que podrían modular la actividad citotóxica de la microglía.
Financiamiento: Med006-2000 U.de los Andes, Fondecyt 1971132.

AUTOANTICUERPOS ASOCIADOS A PSICOSIS LUPICA RECONOCEN UNA PROTEINA DE MEMBRANA DE VESICULAS SINAPTICAS. (Autoantibodies associated to lupus psychosis recognize a synaptic vesicle membrane protein). Matus, S., Faúndez, V. y González A., Depto de Inmunología Clínica y Reumatología, Facultad de Medicina. Depto. Biología Celular y Molecular y Centro de Regulación y Patología Celular FONDAP. P. Universidad Católica de Chile. Dept. Biochemistry and Biophysics, Hormone Research Institute, UCSF

El Lupus Eritematoso Generalizado (LEG) es el prototipo de enfermedad autoinmune. Se caracteriza por presentar una variedad de autoanticuerpos y manifestaciones clínicas, entre las que se incluyen desórdenes neuropsiquiátricos, tales como psicosis y depresión. Por largo tiempo ha sido enigmática la asociación observada entre autoanticuerpos contra proteínas P ribosomales (anti-P) y psicosis lúpica. Con la hipótesis de que estos anticuerpos deben reconocer proteínas en la superficie de células neuronales, especialmente en la región sináptica, rastreamos proteínas en sinaptosomas aislados de cerebro de rata utilizando sueros anti-P de pacientes con LEG con y sin manifestaciones psicóticas. Encontramos una proteína de aproximadamente 120 kDa reconocida, mediante inmunoblot e inmunoprecipitación, exclusivamente por sueros de pacientes que presentaron crisis psicóticas. Esta proteína es integral de membrana, está presente en vesículas sinápticas altamente purificadas y aparece en la superficie sinaptosomal durante despolarización, con un patrón que sugiere endocitosis y reciclaje. Su identificación y caracterización funcional ayudará a clarificar la patogenia de la psicosis lúpica
Financiado en parte por FONDECYT #1980974; #2990025, FONDAP 13980001 y Cátedra Presidencial en Ciencias.

EXPRESION DE PPARs EN ASTROCITOS Y MICROGLIA (PPARs expression in astrocytes and microglia). Martínez, S.F. , Angerstein, P. y Bronfman M. Unidad de Bioquímica Celular y Genética, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile.

Los PPARs (a, b y g) son factores de transcripción activados por ligando (proliferadores peroxisomales, ácidos grasos de cadena larga y eicosanoides, entre otros). PPAR g media la diferenciación de adipocitos y la activación de macrófagos, mientras que PPAR a está implicado en la regulación del metabolismo lipídico, sin embargo no se conoce la función de PPARb.

Poco se sabe del rol de los PPARs en sistema nervioso central (SNC), particularmente en astrocitos y microglia. En este contexto nos ha interesado estudiar su presencia en dichas células, aisladas de cerebro de rata, y determinar el efecto de diversos ácidos grasos esenciales.

Vimos expresión de las tres isoformas de PPAR en astrocitos y microglia. Para determinar el efecto de ácidos grasos esenciales y dada la dificultad inherente a la preparación de microglia, utilizamos la línea celular HL60, (células promielocíticas humanas) que expresa las tres isoformas de PPAR y es capaz de diferenciar a macrófagos por acción de ésteres de forbol, asemejándose en función a microglia. Al incubar estas células con ácido docosahexaenoico (DHA), éste se incorpora preferencialmente a triglicéridos e inhibe la proliferación celular, en cambio, los ácidos eicosapentaenoico (EPA) y araquidónico (AA) se incorporan preferentemente a fosfolípidos y no tienen efecto sobre la proliferación celular, situación que no cambia al diferenciar las células a macrófagos.

Futuros estudios nos indicarán si estos resultados se asemejan a lo que sucede en SNC.
Agradecimientos: Proyectos FONDECYT 1990155, FONDAP 13980001, MILENIO P99-007-F.

ZOOLOGIA-BOTANICA

CAMBIO ONTOGENETICO EN EL AUTO-RECONOCIMIENTO QUIMICO DE LIOLAEMUS BELLII. (Ontogenetic change in chemical self-recognition of Liolaemus bellii). Cortez, S1.; Labra, A1,2. ; Niemeyer, H. M1. 1. Lab Química Ecológica. Universidad de Chile, Casilla 653. 2. Depto Ecología. Universidad Católica de Chile. Casilla 114-D.. Patrocinante: Antonieta Labra

Se realizaron pruebas experimentales con el objeto de determinar si la conducta de auto-reconocimiento químico en la lagartija vivípara Liolaemus bellii, previamente reportada en individuos adultos, presenta cambios o permanece invariable en las diferentes etapas de desarrollo. El auto-reconocimiento se verifica cuando un individuo ejecuta una menor cantidad de lamidos en su territorio propio que en territorio nuevo o de conespecíficos.

Se colectaron individuos de diferentes tamaños (largo hocico-cloaca = 29 _ 79 mm). En el laboratorio, los lagartos fueron mantenidos individualmente en terrarios (temperatura y fotoperíodo natural). Luego de una semana de aclimatación, se registró la conducta de cada lagarto durante 10 minutos, en distintos terrarios (tratamientos): propio y control (no usado). Las variables registradas fueron número de lamidos, tiempo de movimiento y tiempo de latencia. Los resultados indican una relación negativa entre tamaño corporal y capacidad de auto-reconocimiento (i.e. individuos más pequeños son incapaces de discriminar entre su terrario y uno control). Estas diferencias pueden atribuirse a cambios fisiológicos (diferentes grados de desarrollo de glándulas secretoras de compuestos implicados en el reconocimiento químico), desarrollo diferencial de conexiones nerviosas, y/o a la necesidad de un período de aprendizaje.
Financiamiento: IFS 2933-1 a AL, Cátedra Presidencial en Ciencias a HMN.

COMPOSICION QUIMICA DE LAS SECRECIONES PRECLOACALES DE LAGARTOS Liolaemus. (Chemical composition of precloacal secretions of Liolaemus lizards). Escobar, C.A.1, Labra, A.1,2 & Niemeyer, H.M.1; 1 Lab Química Ecológica, Universidad de Chile, Casilla 653; 2 Depto Ecología, Universidad Católica de Chile, Casilla 114-D. Patrocinante: Hermann M. Niemeyer

Las secreciones de los poros precloacales participan en la comunicación química entre lagartos. Se analizó la composición química de las secreciones precloacales de 20 especies de lagartos Liolaemus de Chile. Las variaciones intraespecíficas se estudiaron considerando separadamente las secreciones de diez individuos de L. bellii, y en el caso del estudio interespecífico, se utilizaron mezclas de las secreciones de tres individuos de la misma especie. Los análisis se realizaron en un cromatógrafo de gases equipado con un detector de masas. Se registró un total de 50 compuestos, que pertenecen a tres categorías: n-alcanos, ácidos carboxílicos y esteroides. A pesar de la variabilidad interespecífica, todas las especies comparten seis compuestos: colesterol y los ácidos mirístico, palmítico, palmitelaídico, esteárico y oleico. El análisis de similitud de la presencia y ausencia de los distintos compuestos, muestra una separación de los individuos de L. bellii, que se diferencian claramente de las otras especies. Los resultados sugieren que cada individuo dentro de una especie tendría su propio patrón de señal química, lo cual probablemente permite el auto-reconocimiento individual. Las especies también tendrían un patrón de señal química propio, lo cual permitiría el reconocimiento de conespecíficos.
Financiamiento: IFS 2934-1 (CAE), IFS 2933-1 (AL) Cátedra Presidencial en Ciencias a HNM.

PREDICTORES MORFOLOGICOS DEL DESEMPEÑO LOCOMOTOR EN MAMIFEROS TERRESTRES (Morphological predictors of locomotor performance in mammals). Iriarte-Díaz, J., Canals, M. Departamento de Ciencias Ecológicas, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. E-mail: josdiiri@icaro.dic.uchile.cl

Tradicionalmente se han usado diferentes características morfológicas (e.g. la longitud de las extremidades traseras o la relación entre los miembros de las extremidades), como indicadores del desempeño locomotor en vertebrados, entendido como la máxima velocidad que pueden alcanzar en carrera. Existen estudios relacionando individualmente estos indicadores con la velocidad de carrera, pero no hay trabajos donde se evalúen conjuntamente para ver el aporte parcial de cada uno de ellos. En este trabajo se analiza mediante regresión múltiple cómo se relacionan estos indicadores de desempeño (longitud de las extremidades traseras, Lp, y un índice de la relación de los miembros, la proporción entre longitud del fémur y longitud del metatarso, F/MT) y la masa corporal (Mc) con la velocidad máxima de carrera estandarizada por longitud corporal (Vmax/Lc), sobre los datos transformados logarítmicamente. El análisis de regresión entregó como resultado que las variables que mejor predicen la velocidad relativa de carrera son la longitud de la extremidad trasera y la masa corporal, mientras que la relación fémur/metatarso no aporta significativamente al modelo. Haciendo un análisis solamente con las variables significativas, se observa que a medida que aumenta la masa corporal disminuye la velocidad relativa (Vmax/Lc a Mc-0.55±0.06; pendiente±SE), pero inversamente, a medida que aumenta la longitud de las extremidades posteriores aumenta la velocidad en forma prácticamente lineal (Vmax/Lc a Lp0.91±0.21).

VALOR SISTEMATICO DE LA MICROMORFOLOGIA DE LA LA LEMMA EN TRISETUM PERS. Y HELICTOTRICHON SCHULT. (POACEAE, AVENEAE). (Systematic value of the lemmatal micromorphology in Trisetum Pers. and Helictotrichon Schult. (Poaceae, Aveneae). Finot, V.L. & Matthei, O. Universidad de Concepción, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, Departamento de Botánica. Casilla 160-C.

La sistemática del género Trisetum en América fue estudiada por Louis-Marie (1928-29). En el concepto de este autor el género Trisetum aparece como un grupo artificial, constituido por especies frecuentemente poco relacionadas entre sí. Es así que varias de ellas han sido transferidas a otros géneros. Entre ellas se encuentra Trisetum bulbosum Hitchc., endémica de Chile y Argentina, que fue transferida a Helictotrichon por Parodi (1949). Como parte de la revisión sistemática del género Trisetum, hemos reconsiderado la sistemática de esta especie cuya posición en Helictotrichon no es universalmente aceptada (i.e. Soreng et al. 2000). En la búsqueda de nuevos caracteres que permitan dilucidar las relaciones intergenéricas, se comparó la micromorfología de la epidermis abaxial de la lemma, mediante microscopio electrónico de barrido, de H. bulbosum con 10 especies europeas de Helictotrichon y 20 especies americanas de Trisetum. Los caracteres observados se analizaron utilizando métodos fenéticos, en conjunto con otros caracteres morfológicos y anatómicos. En base a los resultados obtenidos se discute la posición de H. bulbosum (Hitchc.) Parodi y la posible transferencia de algunas especies de Trisetum.

VARIABILIDAD GENETICA ENTRE LAS POBLACIONES DE ARAUCARIA ARAUCANA (MOL.) K. KOCH EN CHILE, EVIDENCIADA A TRAVES DE ISOENZIMAS. (Genetic variability among Chilean populations of Araucaria araucana (Mol.) K. Koch. evidence from isozymatic diversity). Torres C.*, Ruiz E.*, González F.**, Becerra J.* y Silva M.*. *Departamento de Botánica, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas, U. de Concepción. Casilla 160-C. **Departamento de Biología Molecular, Fac. de Ciencias Biológicas, U. de Concepción. Casilla 160-C.

Araucaria araucana, es una conífera endémica de los bosques Subantárticos de Chile y Argentina. Esta especie se distribuye en forma discontinua en la Cordillera de los Andes y de Nahuelbuta.

Se realizó un estudio de variabilidad genética basado en análisis isoenzimático de varias poblaciones de Araucaria araucana: una de Nahuelbuta (colectadas en 5 localidades cercanas entre sí), y cuatro de Los Andes (Malalcahuello, Conguillio, Villarrica, Icalma). Se analizaron 19 loci correspondientes a 10 sistemas enzimáticos. La variabilidad e identidad genética entre las poblaciones fueron medidas a través de los estadísticos de Nei, usando el programa Genestat-PC versión 3.31. Se observó mayor diversidad genética en las poblaciones de los Andes, con una heterocigosidad de 0,135 versus 0,060 de Nahuelbuta. El número de loci para las poblaciones de los Andes fue mayor que para las poblaciones de Nahuelbuta. Los loci SKD-2 y PGD-2, sólo están presentes en las poblaciones de La Cordillera de los Andes las que tienen un promedio de 1,1 alelos por locus versus 1,4 observado en Nahuelbuta. La población de Nahuelbuta resultó más similar a las poblaciones de Conguillio y Malalcahuello, (identidad genética de Nei = 0,8557 y 0,8850, respectivamente). El máximo valor de identidad genética fue entre las poblaciones de Icalma y Villarrica, lo cual es concordante con la proximidad geográfica de las poblaciones. Se discutirán los resultados desde una perspectiva evolutiva y fitogeográfica.
Financiado por DIUC. Proyecto Nº99.111.011-1.1

PALEOFLORA DEL TRIASICO SUPERIOR DEL BAJO BIOBIO (LOCALIDAD CERRO CALQUINHUE), VIII REGION, CHILE. (Upper Triassic Paleoflora of Biobío basin (Calquinhue Hill Locality), VIII region, Chile). M. Leppe1, E. Abad2 y S. Palma-Heldt2. (1) Depto. de Botánica, Fac. de Cs. Naturales y Oceanográficas, Universidad de Concepción. Casilla 160-C, Concepción. E-mail: mleppe@udec.cl. (2) Depto. Cs. de la Tierra, Universidad de Concepción. Patrocinio: Matthei, O.

La Formación Santa Juana ha sido definida informalmente para afloramientos de edad Triásico Superior, ubicados en la cuenca del Río Biobío (72°40'-73°05'W y 36°01'-36°30'S), VIII Región de Chile. Constituye uno de los escasos depósitos triásicos del margen occidental del Gondwana, con vegetación fósil tradicionalmente asociada al Triásico Superior. Los autores han demostrado previamente la existencia de paleoflora de rango Cárnico-Nórico en el margen sur del Río Biobío (Localidad Patagüal), y Nórico-Rético para el norte. Este trabajo presenta los primeros estudios paleobotánicos detallados de la Localidad Cerro Calquinhue, en la ribera norte del Biobío, a unos 7 Km de Quilacoya. Litológicamente se caracteriza por la presencia de sedimentitas y lutitas carbonosas con gran cantidad de improntas de plantas. De su diversidad paleoflorística destacan la presencia de: Gontriglossa verticillata Anderson&Anderson 1989, Dicroidium crassinervis forma trilobitum And.&And. 1983, D. elongatum Archangelsky 1968, D. odontopteroides Gothan 1912, D. zuberi Archangelsky 1968, Astheroteca fuchsii Herbst 1998, Dictyophyllum tenuifolium Bonetti y Herbst, Saportea dichotoma Stipanicic y Bonetti 1965, Linguifolium steinmanii Frenguelli 1941, L. lilleanum Arber 1913, Heidiphyllum elongatum Retallack 1981 y Pseudoctenis Seward 1911. Se analiza la situación de esta flora en el contexto de la Región Chilena, la Superregión Sudamericana y el Gondwana en general.

CONGRUENCIA ENTRE DISTINTAS PARTICIONES Y RELACIONES FILOGENETICAS EN LAS ESPECIES CHILENAS DEL GRUPO spinulosus (ANURA: BUFONIDAE). (Character congruence of multiple data partitions and the phylogenetic relationships of Chilean species of spinulosus'group (Anura:Bufonidae). Méndez M. 1,2 y A. Veloso2 1.-Departamento de Ecología, P. Universidad Católica de Chile. 2.- Departamento de Ciencias Ecológicas, Universidad de Chile, Santiago, Chile.

El grupo del Bufo spinulosus corresponde a uno de los ocho grupos del género Bufo reconocidos en Sudamérica. En Chile las especies pertenecientes a este grupo son: B. atacamensis, B. chilensis, B. rubropunctatus, B. spinulosus y B. papillosus. En este trabajo se estudiaron las relaciones filogenéticas de este grupo utilizando tres distintas particiones de datos: a) caracteres morfológicos y cromosómicos, b) el gen 12S y c) el gen 16S. Cuatro métodos de estimación filogenética fueron usados: Máxima Parsimonia, Máxima Verosimiltud, Neighbor Joining y Evolución Mínima. En todos los análisis se utilizó como grupos externos a Bufo arenarum y Bufo variegatus.

La partición morfológica no mostró resolución al interior del grupo interno. En tanto que, las dos particiones moleculares mostraron una buena resolución. El análisis combinado de los genes 12S y 16S y el de evidencia total (todas las particiones consideradas conjuntamente) mostraron la misma topología y valores semejantes de bootstrap e Indice de decaimiento. La hipótesis filogenética más parsimoniosa fue: (arenarum, (variegatus, (rubropunctatus, ((chilensis, atacamensis),(spinulosus, papillosus)))). Se discute las implicancias de esta hipótesis filogenética en relación con la sistemática y el origen austral del grupo spinulosus.
Financió: FONDECYT 2960012/97; 3000048/2000; Becas CONICYT y DAAD.

MORFOESPECIES Y ADN EN EL ORDEN CORALLINALES (RHODOPHYTA): UNA APROXIMACION MAS ALLA DE DARWIN. (Morphospecies and DNA in the order Corallinales (Rhodophyta): an approach beyon Darwin.). Vidal, R., Meneses, I. & Smith, M. Dept. De Ciencias Biológicas, Facultad de Biología. Pontificia Universidad Católica. Alameda 340, Santiago. Proyecto Fondecyt 1000751.

El orden Corallinales (Rhodophyta) comprende un grupo complejo de especies de algas marinas que deposita calcio en sus paredes celulares. Un considerable número de estas especies presenta una morfología crustosa que dificulta el reconocimiento a nivel tanto genérico como específico de los representantes presentes en las costas de Chile. La distinción de taxa se basa en caracteres anatómicos observados al nivel de microscopía electrónica de barrido (SEM). Sin embargo, esta distinción no es tan clara a niveles específicos y subespecíficos dónde se advierte variabilidad morfológica que puede ser atribuible tanto a plasticidad fenotípica entre individuos como a diversidad de especies. Con el propósito de discernir entre 2 tipos de estrategias alternativas del grupo: especiación y plasticidad fenotípica, este estudio compara los resultados de SEM con análisis moleculares (secuenciación) del gen ribosomal 18S en los especímenes colectados en varias localidades de Chile central y Norte. Los resultados obtenidos tales como, diseño de partidores específicos y las dificultades encontradas en los métodos de extracción de ADN genómico, debido a la estructura calcificada, insuficiencia de material disponible y fauna acompañante son discutidos en este trabajo.

Paneles

ECOLOGIA - BOTANICA - ZOOLOGIA

1 - ESPECIES VEGETALES QUE PROSPERAN SOBRE RESIDUOS SOLIDOS DERIVADOS DEL PROCESO PRODUCTIVO DE PLANTAS DE CELULOSA, DE TIPO "KRAFT". (Plant species that develop on solid residues derived from de kraft pulp and cellulose industry). Jordan, M. y Peña, R. Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Univ. Católica de Chile. Email: mjordan@genes.bio.puc.cl

Diferentes residuos sólidos derivados del proceso de producción de la celulosa y del papel son por hoy depositados en vertederos. Dado los altos volúmenes de producción de dichos residuos, que representan valores de 40.000 - 100.000 m3/Planta/por año, la disposición en vertederos implica un alto costo vinculado a las normas de su construcción y prescindir gradualmente de pérdidas en el uso de superficies para plantación forestal. De acuerdo a las fases del proceso industrial, se distinguen Cenizas, Dregs, Escoria, Grits, Lodos y Rechazos de Cocción presentando según cada tipo en general pH alto, gran capacidad de retención de agua y diversidad en composición química, cuya aptitud para uso agroforestal, adicionados al suelo, está bajo estudio (Jordan et. al 2000). Lo anterior depende del grado de tolerancia de las especies asociada a cada tipo de residuo. En esta perspectiva, si bien dichos residuos son considerados tradicionalmente como de gran toxicidad para el desarrollo vegetal, se ha evidenciado por contrario, que varias especies pioneras tienen la capacidad de colonizar y desarrollarse directamente sobre dichos residuos, ya sea sobre acopios frescos y/o estabilizados. En este trabajo se ha caracterizado en forma inicial un conjunto de especies que aparecen capaces de prosperar sobre dichos substratos. Estas especies, asociadas a diferentes géneros o familias pueden constituir un material de interés en el estudio de mecanismos de tolerancia de estrés originadas en substratos (Fondef D97/1012).

2 - VARIABILIDAD DEL INDICE DE ESTRES LEUCOCITARIO EN AVES (Variability of leukocyte stress index in birds). Ruiz, G., Rosenmann, M., Novoa, F.F. y Arredondo, A. Facultad de Ciencias, Universidad de Chile, y Depto. de Biología, Universidad Metropolitana de Ciencias de la Educación.

Trabajos clásicos de hematología comparada indican que a diferencia de la mayoría de los mamíferos, los linfocitos son las células predominantes en las aves. Sin embargo, otros autores han encontrado que en grullas, cigüeñas, garzas, águilas y gallinetas, los heterófilos (neutrófilos en mamíferos) son las formas que predominan (> 50 %). Debido a que en aves la razón Heterófilos / Linfocitos, (H/L) es un indicador del grado de estrés en respuesta a diversos factores nocivos, es de singular importancia conocer la relación H/L en condiciones libres o de mínimo estrés. Más aun, si se considera que varias de las especies citadas, fueron mantenidas en cautiverio. En este trabajo intentamos explicar, o ayudar a resolver la controversia sobre la fórmula leucocitaria en aves. De aquí que un segundo objetivo es evaluar el efecto de cautiverio sobre dicho índice. Los resultados en muestras de sangre obtenidas minutos después de la captura y hasta tres semanas más tarde, indican que la razón H/L cambia significativamente con el tiempo de cautiverio, aumentando H y disminuyendo L. En chincoles (Zonotrichia capensis), este efecto puede causar hasta una inversión del diagnóstico cuantitativo de estrés. Se concluye que los patrones leucocitarios normales deben ser necesariamente establecidos en ejemplares recién capturados.
PROYECTO FONDECYT 199 0708

3 - ESTUDIOS CITOLOGICOS EN HYPOCHAERIS APARGIODES HOOK. ET ARN. Y H. RADICATA L. (ASTERACEAE) DE CHILE (Cytogenetic studies in Hypochaerisapargioides Hook. et Arn. and H. radicata L. (Asteraceae) from Chile). Baeza, C.M1., J. Grau2, E. Vosyka2, T. Stuessy3 y H. Weiss3. 1Departamento de Botánica, Casilla 160-C, Universidad de Concepción, Concepción, Chile. 2Institut für Systematische Botanik, LMU, Menzingerstr. 67, 80638 München, Deutschland. 3Institute of Botany, University of Vienna, Rennweg 14, A-1030 Wien, Austria.

El género Hypochaeris L. (Asteraceae) está representado en el mundo por alrededor de 50 especies, de las cuales más o menos 40 viven en América del sur. Las especies restantes viven en Eurasia, sobretodo en la región mediterránea. En Sudamérica, este género tiene grandes dificultades taxonómicas, ya sea por el gran número de especies nativas como también por el alto grado de variabilidad morfológica que presenta. El objetivo de este estudio es entregar información acerca del número, tamaño y forma de los cromosomas y tinción diferencial de la heterocromatina de H. apargioides, especie endémica de Chile y de H. radicata, especie adventicia de Europa, utilizando puntas de raices. Las raices fueron tratadas con una solución 0,002 M de 8-hidroxiquinolina durante 3 h a 5°C. La fijación se realizó en una solución 3:1 de etanol-ácido acético a temperatura ambiente, luego se almacenaron a -20°C. La hidrólisis se hizo a 60°C en HCl 0,5 N durante 10 minutos, la tinción se hizo con orceína acética. La técnica de Giemsa fue desarrollada de acuerdo a Schwarzacher et al. (1980) y Busch et al. (1994). Todas las poblaciones de H. apargioides presentaron un cariotipo 2n= 8, lo que es muy uniforme dentro de la especie. Además, presentaron un set de cromosomas 4m + 4st. La otra especie estudiada fue H. radicata, originaria de Europa y naturalizada en Chile, la cual presentó un 2n= 8 y un set de cromosomas 4m + 2m-sat + 2sm. La técnica de Giemsa revela presencia de heterocromatina en la región del centrómero y en las constricciones secundarias del segundo y tercer par de cromosomas en H. apargioides, en cambio en H. radicata sólo hay presencia de heterocromatina a nivel del centrómero y en los satélites del tercer par de cromosomas.
Financiado por DAAD, Proyecto Flora de Chile y Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas.

4 - ECOFISIOLOGIA DE PLANTAS EN LA RECUPERACION Y EN SUELOS DE VERTEDEROS EN CHILE  (Native plants ecophysiology in revegetation and soils of landfills in Chile). Cabrera, H.M. y Andrade, M.V. Inst. Biología, Fac. Cs. Bs. y Mat., Univ. Católica de Valparaíso, Valparaíso.

Diversos estrés limitan el establecimiento de plantas en suelos de áreas impactadas por el vertido de residuos sólidos (microorganismos, nemátodos, nutrientes, déficit de agua, gases y elementos tóxicos, etc.). Para recuperar estas áreas con una cubierta vegetal, es necesario estudiar la fisiología y diferencias de las respuestas en las plantas frente a estos estrés. Se evaluó con plantas en invernadero y en un vertedero el efecto del estrés hídrico, líquidos percolados y emisión de gases en especies nativas Cryptocaria alba (Peumo), Senna candoleana (Quebracho), Schinus latifolius (Molle), Quyllaja saponaria (Quillay), Schinus molle (Pimiento) e introducidas Eucaliptus spp. (Eucalipto). Se caracterizó la fotosíntesis, la fluorescencia de la clorofila a, así como parámetros microbiológicos, físicoquímicos y emisión de gases de los suelos.
La máxima tasa de fotosíntesis son, en orden decreciente, entre 20 a 3 µmol de CO2 m-2s-1 en los controles de E.spp., S.m., S.c., Q.s., S.l. y C.a.. En invernadero, el estrés hídrico provocó una disminución mayor en la fotosíntesis que un riego con líquidos percolados (lixiviado) o sin nutrientes. C. a. y S. l. presentan mayor sensibilidad a estos tratamientos, mientras que en las otras especies, el riego con lixiviado no presentó efectos importantes. En vertedero, todas presentan limitación estomática (cierre) frente a sequía y C. a. es la especie más afectada por lixiviados. La fluorescencia (similar para controles y tratamientos en invernadero) en los vertederos con la luz solar directa del verano, muestra una menor eficiencia del Fotosistema II y en las plantas se presentan los efectos complementarios del estrés hídrico o de los lixiviados con un exceso de luz (fotoinhibición).
Proyecto DI-UCV 202.780/1999

5 - SELECCION DE PRESAS Y SU EFECTO SOBRE LA FISIOLOGIA OSMOREGULATORIA EN dos especies de Cinclodes. (Prey selection and their effect on the osmoregulatory physiology in two Cinclodes species). Soto-Gamboa M., Fariña J.M. y 1Sabat P. Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile. 1Facultad de Ciencias, Universidad de Chile.

El género Cinclodes (Paseriformes: Furnaridae) posee especies estrechamente asociadas a sistemas acuáticos. El objetivo de este trabajo es determinar la dieta natural de dos especies en ambientes marinos, su relación con la capacidad de excreción, y con la disponibilidad de alimento y agua. Para ello se determinó la composición de la dieta, la osmolaridad del contenido estomacal y de la orina de dos poblaciones de C. nigrofumosus (El Quisco y Tal-tal) y de C. oustaleti de El Quisco. Además, se estimó la disponibilidad de presas en el intermareal. Se encontraron diferencias interespecíficas en la proporción de las distintas presas incorporadas a la dieta. Cinclodes nigrofumosus de ambas poblaciones se alimenta mayoritariamente de crustáceos (75 %), mientras que en Cinclodes oustaleti sobre el 60 % de la dieta esta compuesta por insectos. La osmolaridad del contenido estomacal fue significativamente menor en C. oustaleti que en C. nigrofumosus de Tal-tal. La osmolaridad de la orina presentó una correlación con el porcentaje de crustáceos en el contenido estomacal, lo que se asocia a la alta carga de sales de este tipo de presas. Los resultados se discuten en relación con las capacidades renales de ambas especies y la disponibilidad de agua en los sitios de estudio.
FONDECYT 3980027.

6 - ESTRUCTURA Y DINAMICA DEL ENSAMBLE DE AVES DEL BOSQUE RELICTO DE FRAY JORGE: LA INTERACCION DEL AREA Y EL TIEMPO. (Structure and dynamics of the bird assemblage of the Fray Jorge relict forest: The interaction between time and area) Barbosa, O., Cornelius, C. Reid, S., Meynard, C. & Marquet, P.A.Departamento de Ecología, P. Universidad Católica de Chile.

El bosque templado de Chile no ha escapado a los efectos de la fragmentación y pérdida del hábitat. A este respecto, el bosque relicto de Fray Jorge representa un experimento natural y extremo, en fragmentación y aislamiento. Para este bosque sabemos que el área de los fragmentos es el principal determinante de la distribución, abundancia y número de especies en el ensamble, sin embargo desconocemos que tan dinámico es este efecto y como se manifiesta a otras escalas espaciales. En este estudio analizamos la dinámica temporal de: 1)la distribución de la abundancia en función del área del fragmento y 2) el efecto del área sobre el número de especies. Adicionalmente, analizamos el efecto del área del fragmento sobre 3) la tasa de extinción, y 4) las fluctuaciones poblacionales. Nuestros resultados confirman la existencia de un efecto del área y demuestran una alta variabilidad temporal en los patrones estudiados.
Financiado por FONDECYT 1990144.

7 - EL ENSAMBLE DE AVES DEL BOSQUE TEMPLADO RELICTO CERRO SANTA INES, IV REGION, CHILE  (The bird assemblage of the Santa Inés relict temperate forest, IV region, Chile.) Reid, S., Barbosa, O., Cornelius, C. & Marquet, P.A. Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile.

El bosque del Cerro Santa Inés (32º10'S, 71º30'O) ha sido reconocido como sitio prioritario para la conservación biológica y en 1996 el Sistema Nacional de Areas Silvestres Protegidas le asigna la prioridad II (su protección es importante). Su carácter relicto implica que posee características de un hábitat insular inmerso en una matriz predominantemente semiárida. En este trabajo presentamos una caracterización del ensamble de aves, en base a conteos estacionales de aves en distintos microhábitats de bosque y en el matorral circundante entre abril de 1999 y agosto de 2000 y discutimos su importancia para la conservación. Nuestros resultados señalan que al igual que para Fray Jorge, la composición de especies de aves del Co. Santa Inés es más similar a la de localidades de bosque templado, que a sitios de vegetación arbustiva más cercanos. Un total de 33 especies fueron registradas para la zona, de las cuales 21 se observaron en el bosque. Durante todas las estaciones hubo mayor abundancia y diversidad de aves en quebradas más que en hábitats de laderas. La observación de Pygarrhichas albogularis y Sylviorthorhynchus desmursii en el bosque es el registro más septentrional existente hasta la fecha para estas especies. Las características espaciales de este hábitat aislado y la diversidad del ensamble presente, sugieren que este bosque es de gran importancia para mantener la conectividad del hábitat a macroescala.
Financiado por FONDECYT 1990144.

8 - PATRONES DE DISTRIBUCION DE PLANTAS EN LOS BOSQUES RELICTOS DE LA CORDILLERA DE LA COSTA DE CHILE CENTRAL. (Plant distribution patterns in relict forest across the coastal Range of central Chile). Figueroa, J.A., Samaniego, H. & Marquet, P.A. Departamento de Ecología, P. Universidad Católica de Chile.

En la Cordillera de la Costa (30-35º S) de Chile central, se distribuyen fragmentos de dos tipos forestales. El tipo relicto Fray Jorge que presenta similitudes florísticas con el bosque valdiviano (39-43º S)y el tipo pantanoso presente sobre fosas tectónicas saturadas de agua. Nuestro objetivo fue determinar el efecto del aislamiento de estos bosques sobre la distribución de las especies fanerófitas bajo la hipótesis de que la composición de especies presentes en las comunidades relictas ha sido moldeada por eventos selectivos de extinción dando origen a un patrón de distribución no-aleatorio y anidado, tal que las especies presentes en comunidades de menor riqueza son un subset de aquellas presentes en comunidades más diversas. Para estimar si la distribución de especies en ambos tipos forestales combinados presentaba un patrón aleatorio o determinista se realizó un análisis de anidamiento. Los datos de 20 fragmentos se obtuvieron desde colectas publicadas. La distribución de especies fue no-aleatoria (Monte Carlo P << 0.0001). En esta región, la extinción sería el proceso más simple para explicar esta distribución. Las especies que más contribuyeron al anidamiento del sistema fueron: Baccharis marginalis, Mutisia latifolia, Escallonia illinita, Myrceugenia ovata y Sophora macrocarpa. Los fragmentos que más contribuyeron al anidamiento fueron: 1 relicto,Zapallar y 2 bosques pantanosos, Quebrada los Manantiales y de Magdalena. Hay evidencias que en archipiélagos dominados por extinciones, las especies con frutos dispersados por aves no contribuyen a un patrón de distribución determinista. Un resultado similar encontramos en ambos tipos forestales combinados.
Trabajo financiado por proyectos Fondecyt 1990144 y Fondecyt 3980020.

9 - Influencia del pH de las cortezas de ForOfitos de Nothofagus en la diversidad liquEnica y briofItica, Chile Central. (Influence of pH of the barks of phrophytes of Nothofagus in the lichenic and bryophytic diversity, Central Chile). Pereira, I1; Müller F.2 y M. Moya1 . 1Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología, Universidad de Talca, Casilla 747, Talca, Chile. 2Institut für Botanik, Fachrichtung Biologie, Fakultät Mathematik und Naturwissenschaften,Technische Universität Dresden, Mommsenstrasse 13, 01062 Dresden. Alemania. Patrocinio: José San Martín

Uno de los factores que determina, la diversidad liquénica y briofítica en los diversos forófitos es el pH de las cortezas. Como una forma de validar esta hipótesis, se estudió la influencia del pH en cortezas de dos especies arbóreas de Nothofagus sobre la diversidad liquénica y briofítica. Estas especies fueron N dombeyi y N. macrocarpa de dos localidades de la zona precordillerana, de las Reservas Nacionales Altos de Lircay y Radal Siete-Tazas, Chile Central. En cada localidad, se muestrearon 20 ejemplares, 10 de N. dombeyi y 10 de N. macrocarpa, En cada uno, se inventarió la totalidad de líquenes y briófitos, midiéndose el diámetro DAP y con extracción de 10 g de corteza. En las muestras, se determinó el pH por el método de Mezger (1996). Más tarde, se relacionaron los valores del pH con la diversidad liquénica y briofítica
En la localidad de Radal Siete-Tazas (Parque Inglés), las cortezas de N. dombeyi registran un pH marcadamente más bajo que las de N. macrocarpa, en cambio en Altos de Vilches, estas determinaciones indican lo contrario. Sin embargo, y de acuerdo a la diversidad liquénica y briofítica observada en estos forófitos y en ambas localidades, se aprecia una tendencia que se favorece diferencialmente sobre Nothofagus dombeyi y no en N. macrocarpa, así como: Platismatia glauca, Parmotrema chinense, Cetraria sp.. Por otra parte, un número elevado de especies, son indiferentes en la elección del sustrato. Así como también, existen especies que muestran una marcada preferencia por las cortezas de N. macrocarpa, como por ejemplo, Haemathomma nothofagi, Collema sp.. Hasta ahora los resultados, no permiten afirmar una afinidad selectiva de especies epífitas por uno u otro forófitos, ya que las determinaciones de pH no se correlacionan de la misma forma en los forófitos de las dos localidades estudiadas, lo cual nos sugiere que se debería considerar una muestra mayor de ejemplares. Dado la baja diversidad de briófitos, observada en ambos forófitos y en ambas localidades y su falta de selectividad por un forófito determinado, sugiere que las especies encontradas parecen tener un rango de tolerancia de pH mucho mayor que las especies liquénicas.
Agradecimientos: Convenio entre Universidad de Talca, Chile y Universidad Técnica de Dresden, Alemania.

10 - COMPOSICION DE ACIDOS GRASOS POLINSA-TURADOS EN UNA CEPA CHILENA DE  Spirulina subsalsa OERST., (CYANOPHYCEAE) CULTIVADA A DIFERENTES INTENSIDADES LUMINOSAS. (Composition of polyunsaturated fatty acids in a chilean strain of Spirulina subsalsa Oerts. (Cyanophyceae) cultivated at different light intensities). Barriga, A., González, M., Cifuentes, A. y Becerra, J1. Laboratorio de Ficología. 1Laboratorio de Fitoquímica y Productos Naturales. Departamento de Botánica, Facultad de Ciencias Naturales y Oceanográficas. Universidad de Concepción. Patrocinante: Rivera P.

La cianobacteria Spirulina se cultiva en varias partes del mundo como suplemento alimenticio, por su alto contenido proteico y vitamínico. Además, acumula altos niveles de ácidos grasos polinsaturados (AGPIs) de cadenas largas (C16 -C18), cuyo contenido varia dependiendo de la especie, cepa y condiciones de cultivo. Los AGPIs, derivados de fuentes naturales, constituyen biomoléculas de alto valor agregado ya que son esenciales para el crecimiento de organismos animales. Se estudió la composición lipídica de una cepa de Spirulina subsalsa, aislada del Norte de Chile, cultivada a dos densidades de flujo fotónico (35 y 70 µmol m-2s-1) y en fases de crecimiento exponencial y estacionaria. La identificación y cuantificación de los AGPIs mediante cromatografía GLC y Gas-Masa, mostró que la mayor síntesis de ácidos grasos insaturados, se registró a menor densidad de flujo fotónico y en fase de crecimiento exponencial. El más abundante fue el ácido 9-octadecanoico (5% p/p) y el de mayor grado de insaturación, el ácido 9,12- octadecadienoico o ácido linoleico (4%p/p). Así como otras cepas de Sp. subsalsa, la cepa chilena estudiada, no sintetizaría AGPIs con más de dos dobles enlaces y aún cuando esta cepa produce AGPIs de interés comercial, el crecimiento observado fue muy bajo.

11 - EFECTO DEL TAMAÑO DE LA SEMILLA SOBRE EL reclutamiento y biomasa de plAntulas en Cryptocarya alba (LAURACEAE): UNA COMPARACION A DOS ESCALAS (The effect of seed size on seedling recruitment and biomass in Cryptocarya alba (Lauraceae): a two scales comparison) M. Sepúlveda, R.O. Bustamante & J. A. Simonetti (Facultad de Ciencias, Universidad de Chile).

El tamaño de la semilla afecta el desempeño y reclutamiento de plántulas. Semillas grandes germinan más, reclutan más y generan plántulas más grandes que semillas pequeñas. Estos efectos diferenciales entre semillas grandes y pequeñas pueden ser más intensos bajo condiciones desfavorables para la regeneración. Esta hipótesis se puso a prueba en Cryptocarya alba, con experimentos de campo, comparando biomasa y reclutamiento entre semillas grandes y pequeñas a escala local, en borde (condición desfavorable) e interior (condición favorable) de bosque, y a escala geográfica, en poblaciones del norte (condición desfavorable, P.N. La Campana, V Región) y poblaciones del sur (condición favorable, Hualpén, VIII Región).
El tamaño de semillas no afectó el reclutamiento de plántulas a las dos escalas de análisis. Sin embargo, las semillas grandes produjeron plántulas más grandes que las pequeñas tanto a nivel de microhábitat como poblacional. Se rechaza la hipótesis de efectos diferenciales de semillas grandes vs semillas pequeñas en el reclutamiento de plántulas bajo condiciones ambientales desfavorables. Se corrobora parcialmente la predicción de diferencias en biomasa de plántulas entre semillas grandes vs semillas pequeñas, pues tanto en ambientes desfavorables como favorables, las semillas grandes generaron plántulas de mayor tamaño.
FONDECYT 1980750

FISIOLOGIA
NEUROBIOLOGIA - BIOLOGIA DE LA REPRODUCCION

12 - ANALISIS ISOBOLOGRAFICO DEL EFECTO ANTINOCICEPTIVO DE ASOCIACIONES DE AGONISTAS OPIOIDES Y ANTAGONISTAS DEL RECEPTOR NMDA EN RATAS MONONEUROPATICAS. (Isobolographic analysis of the antinociceptive effect of associations of opioid agonists and NMDA receptor antagonists in mononeuropathic rats). Laurido, C1., Paeile, C2., Pinardi, G2., Pelissier, T2. 1Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile, 2Instituto de Ciencias Biomédicas, Facultad de Medicina, Universidad de Chile. (Patrocinio: H. Pérez).

El tratamiento del dolor crónico incluye actualmente la administración de agonistas opiaceos y antagonistas del receptor NMDA. Esto hace interesante estudiar el tipo de sinergia resultante en el efecto antinociceptivo de asociaciones de fármacos que se unen a estos receptores. Se estudió mediante análisis isobolográfico la naturaleza de la asociación de dosis equianalgésicas de ketamina con metadona (KET/MET) y con morfina (KET/MOR) en un modelo de dolor crónico de ratas mononeuropáticas. La mononeuropatía se produjo realizando cuatro ligaduras constrictivas de catgut alrededor del nervio ciático. A las dos semanas se evaluó el efecto antinociceptivo de las asociaciones en el test de Randall-Selitto. Los resultados mostraron por una parte que las asociaciones KET/MET y KET/MOR son sinérgicas y corresponden al tipo supraaditivo y por otra, que la asociación KET/MOR es más efectiva en la pata mononeuropática comparada con la asociación KET/MET. Se sugiere que el marcado efecto sinérgico supraaditivo de la asociación KET/MOR se debe a la selectividad de cada uno de los fármacos por receptores diferentes, mientras que la asociación KET/MET sería redundante al nivel de receptores NMDA.
Financiado por proyectos FONDECYT 1000695 y DICYT 2000.

13 - ALTERACIONES DE LA POTENCIACION DE LARGO PLAZO TRANSCALLOSAL EN RATAS SOMETIDAS A MALNUTRICION PRENATAL. EFECTO DE LA ADMINISTRACION CRONICA DE CLONIDINA DURANTE LA GESTACION. (Changes of transcallosal long-term potentiation in rats submitted to prenatal malnutrition. Effect of chronic administration of clonidine during gestation). Hernández, A1., Pérez, H2, Ruiz, S3. 1Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile, 2INTA, Universidad de Chile, 3Escuela de Medicina Veterinaria, Universidad Santo Tomás.

La restricción proteica a ratas preñadas (dieta 8% caseína) compensada calóricamente con carbohidratos no induce cambios en los pesos corporal y cerebral de las crías al nacimiento. Sin embargo, esta forma de malnutrición induce en las crías aumentos significativos de la liberación de noradrenalina y de la densidad neuronal en la corteza occipital, así como alteraciones del campo de proyección de las respuestas transcallosas en esta misma región cortical. Algunas de estas alteraciones son prevenidas por la administración crónica de clonidina durante la gestación. Se estudió en ratas adultas jóvenes normalmente alimentadas durante la gestación y la lactancia (G+L+) y malnutridas durante la gestación pero rehabilitadas durante la lactancia (G-L+), las propiedades de potenciación sináptica de largo plazo (PLP) en la comunicación callosal. Los resultados mostraron que en el grupo G-L+ la PLP está significativamente disminuída en relación al grupo G+L+, efecto que es prevenido por la administración crónica de clonidina durante la gestación.
Proyecto FONDECYT 1950253.

14 - LA POTENCIACION DE LARGO PLAZO TRANSCALLOSAL ES ABOLIDA POR LA ADMINISTRACION DE MELATONINA EN LA RATA. (Transcallosal long-term potentiation is abolished by melatonin administration in the rat). Flores,F1., Valladares,L2., Hernández, A1, Soto-Moyano, R2. 1Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile, 2INTA, Universidad de Chile.

Melatonina posee propiedades citoprotectoras a través de mecanismos que incluyen su capacidad de atrapar radicales libres, de aumentar los niveles de GABA cerebral, de incrementar la actividad de enzimas antioxidantes así como de inhibir enzimas pro-oxidantes. En la actualidad existen protocolos clínicos y experimentales que evalúan la eficacia de melatonina frente a enfermedades neurodegenerativas. En el contexto del efecto citoprotector de melatonina frente a un modelo de neurodegeneración inducido en la rata por ácido kaínico, interesó conocer el efecto de melatonina per se en las propiedades de potenciación sináptica de largo plazo (PLP) en la comunicación callosal. Los resultados mostraron que la PLP transcallosal inducida mediante shock tetánico es completamente abolida por la administración de 10mg/kg de melatonina i.p., dosis utilizada para la prevención de alteraciones morfológicas inducidas en la corteza cerebral e hipocampo de rata por administración sistémica de ácido kaínico.
Proyecto de Desarrollo, INTA, Universidad de Chile.

15 - EFECTO DEL COITO SOBRE LA EXPRESION GENICA DE CALBINDINA-D, GM-CSF, COX-2 Y MATRILISINA EN EL UTERO DE LA RATA. (Efect of mating on the expression of calbindin-D 9K, GM-CSF, cox-2 and matrilisin mRNA in the rat uterus). Müller A. y Croxatto HB. Unidad de Reproducción y Desarrollo, Facultad de Ciencias Biológicas, PUC.

El coito puede modificar la expresión de genes en el tracto reproductivo debido a la transferencia al útero de material biológico contenido en el semen. La expresión de ARNm de matrilisina, calbindina-D, cox-2 y GM-CSF es alta en el primer día de preñez en el útero del ratón y disminuye en los días siguientes. El objetivo del presente trabajo fue determinar, por RT-PCR, si esto último ocurre también en la rata. Se obtuvo la razón entre el contenido de ARNm de cada uno de los genes y el de b-actina. Esta razón fue mayor para los cuatro genes en el primer día después del coito en comparación con el día 1 de ciclo, aunque la diferencia no alcanzó significancia estadística para un n=3. Se encontró diferencia significativa para matrilisina entre los días 1 y 2 de preñez y para calbindina-D entre los días 1 y 2 de ciclo. Estos resultados muestran variaciones en la expresión de los genes estudiados al comienzo del ciclo y la preñez, pero no confirman, ni descartan que el coito modifica la expresión génica en el útero de la rata. Se aumentará el n. Financiado por RF98024#98 Cátedra Presidencial Dr. Croxatto y Fondecyt Líneas Complementarias Nº8980008.

16 - MODULACION POR OXIDO NITRICO DE LAS RESPUESTAS CAROTIDEAS INDUCIDAS POR NICOTINA Y NaCN.(Modulatory effect of nitric oxide on carotid chemosensory responses induced by nicotine and NaCN). Valdes, V., Villanueva, S., Iturriaga, R. Laboratorio de Neurobiología, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.

Se ha propuesto que el óxido nítrico (NO) producido en el cuerpo carotídeo (CC) es un modulador inhibitorio de la respuesta hipóxica, pero su acción sobre respuestas a otros estímulos es menos conocida. In situ, encontramos que la inhibición de la NO sintasa con L-NAME aumentó la presión arterial, la frecuencia de descarga quimiosensorial (ƒx) basal y potenció los aumentos de ƒx inducidos por nicotina y NaCN. Sin embargo, el generador de NO, nitroprusiato de sodio, produjo hipotensión y aumentó ƒx. Para descartar la participación de cambios de la presión de perfusión, estudiamos los efectos de L-NAME, L-arginina y SNAP sobre las respuestas inducidas por nicotina y NaCN (0.01-100 µg) en CCs de gato perfundidos in vitro a presión constante con una solución Tyrode(aire-CO2 5%, pH 7.40 a 38°C). L-arginina (6-60 mM) no modificó ƒx basal pero disminuyó la amplitud de las respuestas a nicotina y NaCN. L-NAME (5-50 mM) aumentó ƒx basal, potenció levemente la amplitud y notablemente la duración de las respuestas a nicotina y NaCN. SNAP (1-100 mM) redujó en forma dosis-dependiente la amplitud y duración de las respuestas estudiadas.
Estos resultados sugieren que el NO en concentraciones bajas es un modulador inhibitorio de las respuestas carotídeas quimiosensoriales
Financiamiento FONDECYT 1980965.

17 - Sensibilidad ESPECTRAL y ABSOLUTA en Octodon degus y Octodon Lunatus: ESTUDIO ELECTROFISIOLOGICO (Spectral and absolute sensitivity in Octodon degus y Octodon lunatus: A physiological determination). Chávez A1., Bozinovic F. 1Dep Fisiología, ICBQ, Fac Ciencias, U Valparaíso, Centro Neurociencia Molecular y Celular de Valparaíso. Dep Ecología, Fac Ciencias, Pontifica U Católica de Chile.

Con el objetivo de caracterizar el sistema visual de roedores y así poder establecer su adecuación al microhabitat, se compara la sensibilidad escotopica de dos roedores endémicos de Chile del genero Octodon, Octodon degus, un animal de hábito diurno, y Octodon lunatus, un animal nocturno. Mediante electroretinografía, se caracterizo la sensibilidad absoluta y espectral del ojo. Nuestros resultados muestran en degus adultos (9 meses) y en infantiles (1-2 meses) una sensibilidad máxima (lmax) de la banda-a en el rango 514 ± 7.7 (n=13) nm. En lunatus (n=2, adultos) el lmax encontrado fue 520 ± 7.4 nm. Ambos presentan sensibilidad en el rango Azul-UV lo cual podría explicarse por la absorción del retinal (banda-b) en esa región del espectro. El ojo de lunatus es casi dos unidades logarítmicas más sensible que el degus, lo que se acuerda con un sistema visual mejor adaptado a baja luminosidad. Por otro lado, resultados de nuestro laboratorio indican que los muridos nocturnos como Rattus norvegicus son un mas sensible que los Octodontidos degus y lunatus.
Financiamiento Fondecyt # 197097, 1000396, Fundación Andes, Iniciativa Milenio Mideplan P99-037-F

18 - EXPRESION RENAL DE COX-2: RECLUTAMIENTO DE CELULAS DEL ASA DE HENLE. (Renal Expression of COX-2: Recruitment of Loop of Henle's Cells). León CG, Marchetti J, Vio CP. Departamento de Fisiología, Universidad Católica de Chile, INSERM U367, Paris, Francia.

Las prostaglandinas (PGs) participan en la regulación renal de la excreción de agua y sodio. Las PGs son producto de prostaglandina G2/H2 sintetasa (ciclooxigenasas, COX) que existen en dos formas, la constitutiva (COX-1), y la "inducible" (COX-2). Previamente demostramos la presencia de ciclooxigenasa-2 (COX-2) en el asa ascendente de Henle (TAL) en ratas adultas normales (Vio, Hypertension 1997), su regulación durante el desarrollo postnatal (Vio, Immunopharmacol 1999), por glucocorticoides (Vio, J Am Soc Nephrol 2000). Con la hipótesis que la COX-2 se expresa reclutando células TAL, en este trabajo se estudió la expresión de COX-2 en segmentos microdisecados de nefrón bajo diferentes estímulos. Se microdisecaron nefrones de ratas adultas normales y se compararon con nefrones de ratas adrenalectomizadas y de 5, 10 y 15 días de edad postnatal (Sprague-Dawley, n= 5 cada grupo). Los túbulos se tiñieron contra COX-2, los resultados confirmaron la presencia de COX-2 exclusivamente en TAL y mostraron, a lo largo del segmento TAL, sobrexpresión de COX-2 en el período postnatal (30% células COX-2+), represión de la expresión a niveles basales en adultas (2-3% células COX-2+), e inducción de la expresión post adrenalectomía (20-30% células COX-2+).
Nuestros resultados sugieren que el aumento de COX-2 observado, ocurre reclutando células TAL que en el estado basal carecen de esta enzima.
Fondecyt 1980951

MICROBIOLOGIA - VIROLOGIA

19 - ANALISIS DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTORIANA DEL 13-EPI-ESCLAREOL. (Analysis of the antibacterial activity of 13-epi-esclareol). Tapia, L.*, Urzúa, A. ** , Mendoza, L. *** y Wilkens, M.*. *Depto. de Cs. Biológicas, ***Depto. de Qca. de los Materiales, **Lab. de Qca. Ecológica. Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile. (Patrocinio: Dra. I. Llona).

Los diterpenos son una familia de compuestos naturales interesantes desde el punto de vista de sus propiedades biológicas y por su amplia variedad estructural. El 13-epi-esclareol es un diterpeno bicíclico de la serie del labdano aislado de la resina de las especies Pseudognaphalium cheiranthifolium y P. heterotrichium. En este trabajo se estudió la actividad antibacteriana del 13-epi-esclareol en medio sólido y líquido. Además, se estudió el efecto del compuesto en la respiración bacteriana mediante la determinación del consumo de oxígeno y el cambio de pH en el medio extracelular.El compuesto presentó actividad en medio sólido frente a bacterias Gram positivo (B. cereus, B. subtilis, S. aureus) y fue inactivo frente a bacterias Gram negativo (E. coli, K. pneumoniae). La actividad antibacteriana en medio líquido fue bacteriolítica a una concentración de 30 mg/mL frente a B. cereus, mientras que no mostró efecto frente a E. coli hasta una concentración de 100 mg/mL. Finalmente este diterpeno, a una concentración de 30 mg/mL, produjo un 50% de inhibición del consumo de oxígeno de B. cereus y no mostró efecto en el transporte de protones asociado a la respiración. Frente a E. coli, el compuesto no tuvo efecto en el consumo de oxígeno ni en el transporte de protones.
Financiado por proyectos FONDECYT 1990209 y DICYT, Universidad de Santiago.

20 - NUEVO BROTE DE VIRUS EBOLA, VARIANTE SUDAN EN EL NOROESTE DE LA REPUBLICA DEMOCRATICA DEL CONGO (Ex ZAIRE). (Anew outbreak of de Sudan variety of Ebola virus in the northwest of Congo Democratic Republic.). *Molina-Montenegro,MM. **Molina,H. ***Lusangui,R. *Depto. De Microbiología, U. Concepción, Concepción, Chile. **Depto.de Enfermedades Tropicales, Hospital Mama Yemo, Kinshasa,(RDC). ***Laboratorio de Epidemiología hospital Misión de Yambuku, Kinshasa, (RDC).

El virus Ebola es un agente infeccioso perteneciente a la familia filoviridae causante de un síndrome conocido como fiebre hemorrágica por Ebola (FHE).
Este nuevo brote afectó a 11 personas . Todos presentaron cuadro febril, deshidratación aguda , acumulación de sangre en la retina, fuerte dolor toráxico y rash eritematoso.De los 11 pacientes fallecieron 6 lo que nos arrojó un brote con 54,5 % de letalidad, estos últimos presentaron acumulación de fibrina en los tubulos renales, aumento de la transaminasa glutamicoxaloacetica , sero negatividad a exámenes de tetraciclina y cloranfenicol. Las muestras de suero y cortes de hígado de los pacientes se hicieron crecer en células de riñón de mono (Cercophitecus aethiops)y en medio liquido rico en sales y vitaminas para su posterior trato con microscopia electrónica, espectrometría de fluorescencia y espectrometría de absorción que arrojo máximos de absorción electromagnéticas y coeficientes de extinción molar dadas para virus Ebola. Basados en un test específicos de interacción AB-AG y bajo acción de rayos U.V se determino que pertenecía ala variante Sudan. Los pacientes que sobrevivieron se les trato con 6x106 unidades de interferón de leucocitos, heparina endovenosa y 450ml de plasma de pacientes convalecientes además de medidas de aislamiento extremo. Los resultados serán discutidos y desarrollados en términos y fundamentos clínicos.

21 - UN MICOVIRUS CON UN GENOMA DE RNA DE DOBLE HEBRA BISEGMENTADO EN Botrytis cinerea (A mycovirus with a bisegmented double-stranded RNA genome in Botrytis cinerea). Villablanca, C., Castro, M., Morales, A., Ortiz, S. y Castillo, A. Laboratorio de Virología de Hongos, Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad de Química y Biología, Universidad de Santiago de Chile, Casilla 40, Correo 33, Santiago, Chile. E-mail: acastill@lauca.usach.cl

El análisis de la composición de ácidos nucleicos de cepas silvestres de B. cinerea nos permitió detectar que una de ellas, la cepa 380, posee dos moléculas extracromosómicas cuyos tamaños aproximados determinados por electroforesis en geles de agarosa son 6,4 y 5,2 kilopares de bases. Dichas moléculas se degradan completamente cuando se incuban con RNasa A en un amortiguador de baja fuerza iónica, sin embargo, son resistentes al tratamiento con esta enzima en un amortiguador de alta fuerza iónica y son retenidas específicamente en columnas de celulosa CF11, lo que demuestra que se trata de moléculas de RNA de doble hebra.
Para determinar la posible asociación de los dsRNAs con partículas virales, se realizaron centrifugaciones en gradientes de sacarosa con material particulado obtenido de extractos libres de micelio. El análisis de las fracciones de la gradiente permitió determinar que los dsRNAs copurifican con partículas virales isométricas de alrededor de 40 nm de diámetro, con dos polipéptidos estructurales principales de 110 y 120 kilodaltons. Por lo tanto, los resultados experimentales indican que B. cinerea 380 posee un micovirus de RNA de doble hebra bisegmentado.
Financiado por FONDECYT 1000077 y DICYT-USACH.

22 - PREVALENCIA DE INTEGRONES EN ENTEROBACTERIAS. RELACION CON LA RESISTENCIA A ANTIBIOTICOS AMINOGLICOSIDOS. (Prevalence of integrons. among enterobacterial isolates. Relationship with aminoglycoside resistance)Reyes, A., González, G., Bello, H., Domínguez, M., Mella, S. y Zemelman, R. Departamento de Microbiología. Facultad Cs. Biológicas. Universidad de Concepción
Socio Patrocinante: Raúl Zemelman.

Los antibióticos aminoglicósidos (AA) constituyen la terapia de elección en muchas infecciones intrahospitalarias causadas por diversas especies de enterobacterias. Sin embargo, su amplio uso ha seleccionado cepas con elevados niveles de resistencia, debido a la síntesis de enzimas modificantes de aminoglicósidos (EMAs), principal mecanismo de resistencia para estos antibióticos. Por otra parte, se ha definido una nueva estructura genética denominada integrón, asociada a cassettes genéticos de resistencia a antibióticos que, principalmente, codifican para EMAs.
En este trabajo se determinó la prevalencia de integrones clase 1, 2, 3 en 200 cepas intrahospitalarias de enterobacterias. Se investigó la actividad de 7 AA mediante difusión en agar (NCCLS, 1998). La presencia de integrones se estudió por hibridación en colonia con sondas específicas para cada clase de integrón y se confirmó por PCR.
Integrones clase 1 son prevalentes en cepas de Escherichia coli y Klebsiella spp., en cambio en cepas de Serratia spp., Proteus spp. y Shigella spp. la clase 2 es más frecuente. No se detectó integrones clase 3. La mayoría de las cepas resistentes a los AA poseen alguna clase de integrón.
Estos resultados permiten concluir que los integrones podrían ser responsables de la resistencia a los AA.
Trabajo financiado por Proyecto FONDECYT 1000352

23 - POLIFOSFATOS, ACTIVIDAD POLIFOSFATO QUINASA (PPK) Y GEN ppk EN LA BACTERIA EXTREMOFILA  Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC19859 (Polyphosphates, Polyphosphate Kinase activity and ppk gene in the extremophilic bacterium Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC19859).Vera M., Alvarez S., Guiliani N. y Jerez C. A. Laboratorio de Microbiología Molecular y Biotecnología, Dpto. de Biología, Instituto Milenio CBB; Facultad de Ciencias; Universidad de Chile. cjerez@uchile.cl.

El entendimiento de los mecanismos por los cuales las bacterias acidofílicas quimiolitotróficas se adaptan y responden a la variación de su medio ambiente tiene relevancia debido a su participación en los procesos de biominería. Recientemente, se han implicado los polifosfatos (poliP) en los mecanismos de respuesta ante cambios ambientales y estrés. Los poliP, polímeros lineales de centenas de residuos de ortofosfato unidos por enlaces fosfoanhídrido, son sintetizados por la enzima polifosfato quinasa (PPK). Frecuentemente, los poliP forman gránulos en bacterias y están asociados con cationes. Son ubicuos en la naturaleza, pero su papel no ha sido claramente establecido: reserva de fosfato, fuente de energía, quelante de iones metálicos y en la regulación de la respuesta frente al estrés.
A partir de estos antecedentes, iniciamos el estudio del metabolismo de los polifosfatos en A. ferrooxidans. Detectamos la presencia de poliP mediante las técnicas de microscopía electrónica de transmisión y EDAX. Paralelamente, caracterizamos la presencia de una actividad PPK en la fracción proteica asociada a la membrana. Estos primeros antecedentes experimentales, apoyados por los datos del genoma de A. ferrooxidans ATCC23270, nos llevaron a la búsqueda del gen ppk, la cual se realizó exitosamente mediante las técnicas de DOP-PCR y CODEHOP-PCR.
Financiado por los proyectos FONDECYT 1000-679 e ICM P99-031-F.

24 - EVALUACION DE LA EXPRESION DEL GEN prb1 EN AISLADOS NATIVOS DE Trichoderma spp., CONFRONTADOS AL HONGO FITOPATOGENO Rhizoctonia solani. (Evaluation of prb1 gene expression of wild-type Trichoderma spp., confronted to the fungal phytopathogen Rhizoctonia solani). García1, P., Bastías1, G., Gutiérrez1, A., Pérez2 L.M. y Gidekel1, M. 1Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular Vegetal, Instituto de Agroindustria, Universidad de La Frontera; 2Escuela de Química y Farmacia, Universidad Nacional Andrés Bello.

Algunas especies del género Trichoderma presentan un alto grado de antagonismo hacia diversos hongos fitopatógenos, por lo que pueden ser utilizadas como agentes biocontroladores en el combate de enfermedades forestales. Entre los mecanismos de antagonismo utilizados por este hongo figura la excreción de enzimas hidrolíticas que destruyen las paredes celulares del hongo huésped. Una de ellas es la proteinasa básica Prb1, la cual está directamente involucrada en el micoparasitismo de Trichoderma. En el presente trabajo se evaluaron diez aislados nativos de Trichoderma spp. de acuerdo a su capacidad para expresar el gen prb1, utilizando análisis de tipo Northern blot. Para ello, el mRNA de la zona de interacción de cada cepa confrontada al patógeno R. solani, y de los respectivos controles de Trichoderma, fue hibridado con un fragmento de la región codificante del gen prb1. Las cepas estudiadas no mostraron diferencias significativas en cuanto a su capacidad de sobrecrecer al patógeno; sin embargo, la expresión del gen prb1 fue diferente entre los distintos aislados. Estos resultados aportan nuevos antecedentes para seleccionar los mejores aislamientos de Trichoderma para el control de fitopatógenos.

25 - SELECCION DE BIOANTAGONISTAS DE PATOGENOS DE TOMATE. (Selection of bioantagonist of tomato pathogens) Reyes, M., Lespinasse, M., Pérez, L. M. Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Andrés Bello. E-mail: lperez@abello.unab.cl

La selección de bioantagonistas para hongos fitopatógenos que atacan el sistema radical del tomate, requiere que los biocontroladores sean capaces de crecer y competir en las mismas condiciones en que los patógenos atacan a las plantas. Estas condiciones son humedad, temperatura, pH y salinidad en los rangos que presentan los suelos de cultivo.
Se seleccionaron aislamientos de Trichoderma y se cultivaron a diferentes temperaturas, pH y salinidad; además se enfrentaron a Fusarium solani, Rhizoctonia solani y Pyrenochaeta lycopersici, patógenos de tomate, en cultivos duales. Se cultivaron los patógenos en medios sólidos: a) que contenían metabolitos difusibles excretados por los aislamientos de Trichoderma; b) donde patógenos y bioantagonistas compartían una atmósfera cerrada (excreción de compuestos volátiles por el antagonista); analizando la capacidad de Trichoderma para inhibir el crecimiento de los fitopatógenos. La excreción de enzimas hidrolíticas por los bioantagonistas se analizó a través de zimogramas luego de separar las proteínas excretadas a medios de cultivo líquido, por page nativo.
Una mayor excreción de compuestos difusibles y volátiles como de enzimas hidrolíticas se correlacionó con una mayor capacidad de los Trichoderma para antagonizar a los patógenos de tomate. Adicionalmente, su capacidad para crecer en los diferentes rangos de temperatura, pH y salinidad, como su capacidad para antagonizar permite seleccionar los mejores bioantagonistas de estos fitopatógenos.
Financiamiento FONDECYT 1990785.

26 - LA EXPRESION DE IL-12, Y NO DE IL-10, MODULA LA EVOLUCION DE LA INFECCION POR HELICOBACTER PYLORI EN NIÑOS (IL-12 expression, but not IL-10, modulate the outcome in Helicobacter pylori-infected children). Arenillas S.D., Harris P. Centro de Investigaciones Médicas y Departamento de Pediatría, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. Patrocinador: Felipe Aguilera Valpuesta

Los mecanismos por los cuales la infección por Helicobacter pylori (Hp) lleva al desarrollo de gastritis crónica (GC) y úlcera péptica (UP), son controversiales. La expresión local en la mucosa gástrica de IL-12 e IL-10 podría modular la activación preferencial de una vía Th1 o Th2, respectivamente. El objetivo de este estudio fue evaluar como la respuesta inmune Th1 vs Th2 en la infección precoz por Hp (niños), podría modular la evolución hacia GC vs UP. Biopsias gástricas de niños sometidos a endoscopía fueron homogenizadas para determinación del contenido proteico (método BCA) y citoquinas regulatorias (ELISA con anticuerpos monoclonales). Los resultados fueron expresados en pg de citoquina/mg de proteína total. De 47 niños estudiados, 15 no mostraron infección, 21 infectados presentaron GC y solo 11 UP. Los niños infectados exhiben mayores niveles de IL-12 (p=0.002) que de IL-10, con respecto a los no infectados. Mientras que aquellos que desarrollan UP exhiben menores niveles de IL-10 que de IL-12 (p=0.009) que los con GC. Estos resultados sugieren que la respuesta inmune local de niños frente a Hp sigue una vía predominante Th1 y que la expresión de IL-12 podría modular el desarrollo de UP.
Agradecimientos a FONDECYT #1000734

BIOLOGIA CELULAR - BIOQUIMICA - BIOLOGIA MOLECULAR

27 - ACTIVIDAD NUCLEOLAR DURANTE LA ADAPTACION ESTACIONAL DEL PEZ Cyprinus carpio. (Nucleolar activity during the seasonal adaptation of the fish Cyprinus carpio) Quezada, C., Pinto, R., Alvarez, M., Navarro, C., Vera M. I., Laboratorio de Biología Celular y Molecular, Universidad Andrés Bello y MIFAB. República 237, Santiago, Chile.

La reprogramación fisiológica inducida por los cambios estacionales del medio ambiente implica cambios en la expresión génica a nivel transcripcional y traduccional que, en el pez C. carpio, se reflejan en transformaciones fenotípicas. Una de las más sobresalientes es la segregación de los componentes nucleolares en los peces aclimatizados a invierno contrastando con lo observado en verano. El nucléolo proporciona el marco estructural en el cual se produce la biogénesis de ribosomas y su segregación indica la interrupción temporal y reversible de esta función.
Con el propósito de comprender los mecanismos que regulan la adaptación estacional de la actividad nucleolar en la carpa, hemos estudiado la expresión de algunos de los factores implicados en ésta. Actualmente, y continuando con nuestros objetivos, hemos aislado y secuenciado el cDNA de la proteína ribosomal L41, derivado su secuencia aminoacídica y realizado estudios de homología que muestran su alta conservación evolutiva.
Al mismo tiempo, estamos estudiando nucleolina ya que postulamos que puede estar comprometida en los cambios de actividad nucleolar de la carpa.
Proyectos FONDECYT 1000-061, DI-UNAB 52-A/99 DI-UNAB 58-A/99

28 - TIPOS PSICOLOGICOS Y ESTILOS COGNETIVOS DE LOS ESTUDIANTES QUE INGRESAN A ESTUDIAR MEDICINA EN LA PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATOLICA  DE CHILE. (Psychological types and cognitive styles of students admitted to medical school at the P. Universidad Católica de Chile) Bitran, M.; Zuñiga, D.; La Fuente, M., Marshall, G. and Mena, B. Oficina de Educación Médica, Escuela de Medicina, P. Universidad Católica de Chile.

Con el objeto de conocer los perfiles psicológicos y estilos cognitivos de los estudiantes que ingresan a estudiar Medicina, se administró el Indicador de Tipos Psicológicos de Myers y Briggs (MBTI) a los 106 estudiantes de Admisión Ordinaria 2000. El MBTI distingue 16 tipos psicológicos, de acuerdo a las preferencias en 4 dimensiones bipolares: Extraversion-Introversion (E-I); Sensing-Intuition (S-N); Thinking-Feeling (T-F) y Judging-Perceiving (J-P). De ellas, las dimensiones S-N y T-F se relacionan con funciones cognitivas de percepción y utilización de la información, respectivamente
Los estudiantes se distribuyeron de manera desigual entre los 16 tipos del MBTI, de acuerdo a un modelo interdependiente, con interacciones entre la dimensión S-N y las T-F y J-P. El 51 % de los estudiantes presentó preferencias Thinking y Judging, mientras que sólo el 12 % Feeling y Perceiving. Con respecto a las funciones cognitivas, el 43 % prefirió la combinación Sensing y Thinking, en tanto que sólo el 11 % la Sensing y Feeling. La dimensión T-F presentó diferencias significativas entre hombres y mujeres, con una mayor proporción de mujeres con preferencia F (52% de las mujeres v/s 20 %de los hombres).
El conocer la diversidad de tipos psicológicos y estilos cognitivos de nuestros estudiantes nos permitirá a futuro estudiar las asociaciones entre estas variables psicológicas y el desempeño académico y desarrollo vocacional de nuestros estudiantes.

29 - LITIO PROTEGE LA MEMORIA ESPACIAL DE RATAS INYECTADAS CON ACIDO IBOTENICO EN EL HIPOCAMPO DORSAL (Lithium protect spatial memory of ibotenate injected rats in dorsal hippocampus). Chacón M.A., Barría M.I. e Inestrosa N.C. Centro de Regulación Celular y Patología, Departamento de Biología Celular y Moleclular, Facultad de Ciencias Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.

Desde hace medio siglo el tratamiento con el ión litio ha sido efectivo en atenuar diversos trastornos del sistema nervioso central, sin embargo su mecanismo de acción no ha sido dilucidado. Estudios in vitro muestran su efecto neuroprotector frente a agentes citotóxicos como glutamato o péptido b amiloide (Ab), sin embargo su efecto terapéutico requiere de una administración crónica. En este trabajo evaluamos la protección in vivo que ejerce el tratamiento crónico con litio en ratas inyectadas con ácido iboténico, un agonista de receptores glutamatérgicos, en el hipocampo dorsal (una estructura responsable del aprendizaje espacial). Para esto, los animales fueron tratados crónicamente con litio y luego fueron inyectados intracerebralmente con ibotenato. Luego de dos semanas de post-tratamiento con litio, las ratas fueron entrenadas utilizando el paradigma de aprendizaje espacial Morris water maze. A nivel histológico se evaluó tanto la morfología del sitio inyectado como la astrogliosis desarrollada. Los resultados indican que litio protege del daño producido por ibotenato y que además potencia el aprendizaje espacial en animales control. En estudios futuros se evaluará la protección que ejercería el ión litio frente a la toxicidad producida por el péptido Ab in vivo.
Financiado por: FONDAP en Biomedicina (N° 13980001) y Cátedra Presidencial en Ciencias a N.C.I.

30 - UN METODO SIMPLE PARA MICROINYECTAR TRAZADORES NEURALES SOLIDOS EN ESTRUCTURAS PROFUNDAS DEL CEREBRO. (A simple method to microinject solid neural tracers into deep structures of the brain). Letelier,J.C., Cecchi,C. Farfán, G. y Mpodozis,J. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. Casilla 653, Santiago, Chile.

Hemos desarrollado un instrumento que permite microinyectar cristales de trazadores neurales en estructuras profundas del cerebro. El instrumento consiste en una aguja hipodérmica delgada, que contiene en su interior un pistón, ambos conectados a una cámara de presión. Cuando un pulso de aire a presión es aplicado a la cámara, el pistón se mueve hacia adelante, expulsando un cristal de trazador previamente cargado en la punta de la aguja. Adosando un microlelectrodo al exterior de la aguja es posible tener un control electrofisiológico del trayecto y sitio de la inyección. Para probar el método, hemos practicado inyecciones del trazador lipófilico DiI en varias estructuras profundas del sistema visual de aves. Los resultados muestran sitios de inyección pequeños y bien definidos, localizados precisamente en las estructuras deseadas, asi como un buen desarrollo de transporte anterogrado y retrogrado, originado especificamente desde la estructura inyectada. El uso de trazadores sólidos, en general ventajoso respecto del uso de trazadores en solución, ha estado restringido hasta ahora a estructuras superficiales del cerebro, debido a la falta de una técnica para microinyectar sólidos en estructuras profundas. El método que hemos desarrollado aquí, subsana esta limitación.
Financiado por Fondecyt 1990045.

31 - EXPRESION DE PPARs EN LA LINEA NEURAL PC12 Y EL EFECTO DE ACTIVADORES DE PPARs SOBRE SU DIFERENCIACION. (Expression of PPARs in the neural line PC12 and the effect of PPARs activators on their differentiation). Aguilera, M.A. Unidad de Bioquímica Celular y Genética, Facultad de Cs. Biológicas. Pontificia Universidad Católica de Chile. Patrocinante: Dr.Miguel Bronfman

Los PPARs (peroxisome proliferators activated receptors: a,b & g) son receptores nucleares activados por ácidos grasos y sus metabolitos (ei:eicosanoides) y proliferadores peroxisomales, moléculas de estructura similar a ácidos grasos, que comprenden drogas de uso médico y contaminantes ambientales (herbicidas y plastificantes). PPARa regula la expresión de genes del metabolismo lipídico en el hígado mientras que PPARg participa en procesos de diferenciación celular. Hasta ahora, la función de PPARb no ha sido definida con claridad. La función de estos receptores en el Sistema Nervioso Central (SNC) es desconocida, pero, dada su expresión y el importante metabolismo lipídico del SNC es posible que participen en la regulación del metabolismo o en procesos de diferenciación celular en este sistema.
La línea celular PC12, clonada desde un feocromacitoma de rata, responde al factor de crecimiento neural (nerve growth factor (NGF)) sufriendo un cambio fenotípico donde adquieren muchas de las propiedades caracteríticas de neuronas simpáticas.Utilizando este modelo, determinamos que las células PC12 expresan las tres isoformas de PPARs, y que agonistas del PPARg (troglidazona) producen cambios morfológicos sugerentes de diferenciación en esta línea celular.
(Financiado por FONDECYT 1990155, FONDAP 13980001 y Milenio P-99-007-F)

32 - CONTROL COLINERGICO DE LA RESPIRACION FICTICIA EN EL RATON NEONATO IN VITRO (Cholinergic control of fictive respiration in mouse neonate in vitro) Ampuero, E., Llona, I., Eugenín, J. Laboratorio de Sistemas Neurales, USACH.

La contribución de acetilcolina al control respiratorio y la localización de neuronas colinérgicas troncoencefálicas se estudió en la preparación de troncoencéfalo-médula espinal aislada desde ratones CF1 neonatos (P0-P5).
El troncoencéfalo y la médula espinal se superfundieron en cámaras separadas con líquido céfalorraquídeo artificial equilibrado con CO2: O2 5%:95%, pH 7,4. La respiración ficticia se registró con electrodos de succión desde las raíces ventrales C3-C5 a temperatura ambiente. Los agonistas y antagonistas colinérgicos se administraron mediante superfusión o pulsos de 100ml.
La administración troncoencefálica de carbacol (10-9 - 10-6 M) aumentó la frecuencia y disminuyó la amplitud respiratoria en forma dosis-dependiente y reversible. La superfusión con atropina (100 mM), y en menor grado con hexametonio (100 mM), redujeron la frecuencia respiratoria basal y la respuesta respiratoria al carbacol, la que incluso se abolió cuando ambos bloqueadores se administraron simultáneamente. La enzima colinoacetiltransferasa (ChaT) se detectó por inmunohistoquímica en los núcleos hipogloso y dorsal del vago, y en la región bulbar ventrolateral. En esta última, somata localizados a 100mm de profundidad emiten proyecciones hacia la superficie bulbar sobre regiones quimiosensoriales.
Nuestros resultados revelan un control tónico del ritmo respiratorio principalmente ejercido por receptores muscarínicos y sugieren que, al menos parte de éste, está íntimamente relacionado a los mecanismos de quimiorrecepción central.
Proyectos Fondecyt 1980819 y Dicyt (USACH) 029743EL.

33 - DISTRIBUCION ESPACIAL DE LAS GLICOPROTEINAS DE LA FIBRA DE REISSNER EN EL FILUM TERMINAL DE MAMIFEROS. (Spacial distribution of the Reissner´s fiber glycoproteins in the terminal filum of mammals). Molina, B1., Peruzzo, B2., Caprile, T2. Rodríguez, EM2. 1Depto. de Ciencias Básicas, Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera. 2Instituto de Histología y Patología, Universidad Austral de Chile.

El órgano subcomisural (OSC) es una estructura glandular ubicada en el techo del tercer ventrículo cerebral. Sus células ependimarias secretan glicoproteínas al líquido cefalorraquideo donde se condensan para formar la fibra de Reissner (FR). La FR crece continuamente atravesando el canal central de la médula espinal. En la parte final del canal central, las glicoproteínas de la FR forman una masa irregular que se conoce como masa caudalis. Se desconoce si en mamíferos las glicoproteinas de la massa caudalis alcanzan la sangre, aspecto fundamental para poder inferir un posible rol periférico para esta secreción.
Se estudió la región caudal de la médula espinal de 10 ratas y 12 conejos, para establecer, en forma exacta, la posición de la massa caudalis. La región lumbo-sacra de la columna vertebral fue fijada en Bouin e incluída en Paraplast. Cortes seriados de 7 µm fueron utilizados para realizar un análisis inmunocitoquímico con un suero anti-FR o histoquímico con diferentes lectinas. Además, se realizó un análisis inmunocitoquímico ultraestructural. En la rata la massa caudalis se localizó en la región lumbar, sin embargo en conejo, se observó distribuida entre la vertebra coccigea 2 y 4. En ambas especies las glicoproteinas de la FR difunden fuera del canal central utilizando espacios generados entre las células ependimarias. La secreción alcanza el lumen de los vasos sanguíneos o linfáticos presentes en los espacios peri-ependimarios. Los resultados indican que la secreción del OSC puede alcanzar la sangre a nivel caudal de la médula espinal.

34 - DOS SISTEMAS DE AUTOAGREGACION EN GRANULOS CROMAFINES (Two systems for self-aggregation of chromaffin granules). Sepúlveda, C., De la Fuente, M. Programa de Fisiología, Instituto de Ciencias Biomédicas, Universidad de Chile

Los estudios descritos en este trabajo demuestran que los gránulos cromafines pueden autoagregarse a pH's ácidos (bajo 6.5), o coagregar con liposomas de fosfatidil serina (PS), (pero no con liposomas de fosfatidil colina). Estas actividades requirieron iones calcio (80 µM) y una sal como KCl, se inactivaron cuando los gránulos se trataron por 5 min con tripsina o proteinasa K a pH 7.4, y no se deben a la presencia de anexinas endógenas. Los resultados sugieren que los gránulos contienen una proteína que puede unir fosfolípidos en presencia de calcio, causando agregación de las vesículas. La tripsina activa (pero no la enzima inactivada con PMSF ni la quimotripsina) puede inducir agregación de gránulos y coagregación con liposomas de PS a pH 6 (pero no a pH 7.4). Estas actividades requirieron bajas concentraciones de calcio (2 µM), pero no KCl, y se inactivaron cuando los gránulos se trataron exhaustivamente con tripsina o proteinasa K a pH 7.4. Concluimos que los gránulos contienen dos distintas proteínas que pueden unir fosfolípidos y promover la agregación de los gránulos a pH ácido.
Trabajo soportado por Proyectos Fondecyt 19701975 y 1000691.

35 - ELIMINACION DEL ETILENO PRODUCIDO POR DAÑO CELULAR EN POROTO VERDE (Phaseolus vulgaris cv. Win). (Ethylene elimination produced by cellular damage on green beans (Phaseolus vulgaris cv. Win). Monsalve, A., Scheuermann, E., Ojeda, M., Bifani, V., Ihl, M. Departamento Ingeniería Química, Universidad de La Frontera, Temuco

El poroto verde cortado, como cualquier tejido vegetal dañado, produce gran cantidad de etileno en las primeras 24 horas, el cual a pesar que disminuye posteriormente, se relaciona con pérdida del aspecto del poroto recién cosechado; por eso se estudian maneras de eliminar el etileno producido. Experimentalmente, se cortan los porotos, se guardan en bolsas selladas de polietileno baja densidad y se estudia la eliminación del etileno oxidándolo con KMnO4 pegado sobre papel filtro (KMnO4-PF) o incorporado en un gel de carboximetilcelulosa (KMnO4-CMC), y las consecuencias de su eliminación: color, contenido de pigmentos clorofílicos, actividad de polifenoloxidasa (PPO), ácido ascórbico y beta caroteno. Se midió etileno por CG (detector FID), clorofilas y betacaroteno por HPLC (detector UV/visible), color por reflexión, ácido ascórbico por fosfomolibdeno, la PPO usando pirocatecol, eliminando los polifenoles preexistentes con polivinilpirrolidona. La pérdida de peso en KMnO4-PF a 21 días es 0.5%, mientras que en KMnO4-CMC es 0.7% en sólo 14 días; se pierde 25% de ácido ascórbico en KMnO4-PF y 39% en KMnO4-CMC, y la PPO se mantiene a un nivel bajo constante en KMnO4-PF, en cambio en KMnO4-CMC aumenta su actividad. Se concluye que KMnO4-PF es más efectivo para eliminar el etileno, pues incide en las mejores características del poroto.
Proyecto FONDECYT 1980392

36 - ANALISIS DE UNA MUTACION EN PEZ CEBRA QUE PRESENTA DEFECTOS EN EL DESARROLLO DE LA RETINA. (Analysis of a zebrafish mutation with defects in retinal development). Vidal, J., Reyes, A.E., y Allende, M.L. Departamento de Biología y Millennium Nucleus in Developmental Biology, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. Casilla 653, Santiago.

El ojo de los vertebrados es una estructura altamente compleja que se desarrolla a partir de la interacción entre el sistema nervioso central (la vesícula óptica) y la placoda ectodérmica que formará el lente. El componente neural del ojo corresponde a la retina, formada por varios tipos celulares, entre ellas fotorreceptores, neuronas bipolares, células horizontales y ganglionares. Todos estos tipos celulares se originan a partir de células progenitoras comunes. Para estudiar los procesos de especificación y diferenciación celular en la retina, estamos analizando mutantes generados por inserciones retrovirales que presentan defectos en el desarrollo del ojo. Uno de estos mutantes presenta un fenotipo de "ojo pequeño" visible desde el día 5 post-fertilización. Estos animales mueren al día 12 de vida por razones desconocidas. En secciones histológicas, se observa una degeneración en la capa de fotorreceptores y un retraso en el crecimiento de las demás capas celulares. Los animales mutantes presentan hipertrofía en la capa de células pigmentarias lo que sugiere que no perciben información visual. Para determinar si el defecto visual se debe a defectos en la retina o en las proyecciones hacia el tecto óptico, estamos efectuando tinciones de nervio óptico con el trazador DiI.
Financiado por Fondecyt 1000879 e Iniciativa Científica Milenio ICM P99-137-F.

37 - ANALISIS FUNCIONAL DE GENES INVOLUCRADOS EN LA DIFERENCIACION DE FOTORRECEPTORES EN LA GLANDULA PINEAL DE PEZ CEBRA. (Functional analysis of genes involved in pineal photoreceptor differentiation in zebrafish). Sarrazín, A., d'Alençon, C., Young, R. y Allende, M.L. Departamento de Biología y Millennium Nucleus in Developmental Biology, Facultad de Ciencias, U. de Chile. Casilla 653, Santiago.

En la glándula pineal del pez cebra se diferencian dos tipos de células: los fotorreceptores y las neuronas de proyección; ambos tipos celulares surgen a partir de un progenitor común. Nos interesa identificar genes involucrados en la decisión del destino celular y diferenciación en la pineal. Hemos seleccionado algunos genes candidatos, basándonos en su participación en procesos similares en la retina, los cuales sobreexpresaremos en la pineal previo a la diferenciación neuronal. Para este objetivo, hemos aislado fragmentos de DNA genómicos correspondientes al gen flh de pez cebra, que se expresa desde muy temprano en el desarrollo en el territorio que formará la pineal. Hemos clonado el promotor del gen flh río arriba del gen reportero GFP y embriones de pez cebra fueron inyectados con estos constructos. En ensayos de expresión transientes se observó expresión restringida de GFP. El siguiente paso es generar constructos similares en que se expresen los genes de diferenciación en las células presuntivas de la pineal.
Financiado por FONDECYT 1000879 e Iniciativa Científica Milenio #P99-137-F.

38 - EXPRESION TEMPRANA DE LA EXORODOPSINA EN FOTORRECEPTORES DE GLANDULA PINEAL DE PEZ CEBRA (Early expression of Exorhodopsin in zebrafish pineal organ photoreceptors). Nuñez, V., y Allende, M.L. Departamento de Biología y Millennium Nucleus in Developmental Biology, Facultad de Ciencias, Universidad de Chile. Casilla 653, Santiago.

El órgano pineal en los peces consiste en células fotorreceptoras y neuronas que proyectan al diencéfalo ventral. Los fotorreceptores de pineal expresan opsinas, las proteínas que, junto con el 11-cis-retinal, forman los pigmentos visuales. Recientemente se describió una nueva opsina, la exorodopsina, que no se detecta en retina pero sí en la pineal de peces adultos. Por constituir potencialemente un marcador util de fotorreceptores en el desarrollo del órgano pineal, examinamos la expresión de la exorodopsina durante la embriogénesis del pez cebra (Danio rerio). Inesperadamente, el gen de exorodopsina se expresa en células de la pineal desde las 24 horas post-fertilización, un dia antes que se detecten otros marcadores de diferenciación en éste órgano. Por marcaciones dobles usando anticuerpos específicos, hemos determinado que las células que expresan la exorodopsina son los fotorreceptores pineales y no otros tipos celulares. Paralelamente hemos iniciado un proyecto de identificación de elementos regulatorios de la transcripción que conduzcan a la expresión génica específica en pineal. Usando secuencias genómicas del gen de la exorodopsina correspondientes a regiones promotoras deseamos efectuar experimentos in vivo para aislar aquellos elementos cis que unan factores de transcripción específicos del órgano pineal.
Financiado por FONDECYT 1000879 e Iniciativa Científica Milenio #P99-137-F.

39 - DETECCION DEL VIRUS DE LA NECROSIS PANCREATICA INFECCIOSA (IPNV) MEDIANTE ELISA-PCR. (Detection of the Infectious Pancreatic Necrosis Virus by ELISA-PCR). Aguayo, J., Miquel, A., Valenzuela, P. y Burzio, L.O., Bios Chile I.G.S.A., Fundación Ciencia para la Vida e Instituto Milenio MIFAB. Avenida Marathon 1943, Santiago

El virus de la necrosis pancreática infecciosa es responsable de severas mortalidades de salmonídeos en Europa y América del Norte, y recientemente se ha detectado en Chile. Pertenece a la familia Birnaviridae y su genoma esta constituido por dos fragmentos de RNA de 3.200 y 2.300 pares de bases. En Chile se ha detectado tanto el serotipo Sp como el VR-299, aunque el primero tiene un mayor prevalencia. Para disponer de un procedimiento diagnóstico de alta sensibilidad y especificidad hemos desarrollado un método de amplificación del gen de VP2 del virus mediante RT-PCR. La amplificación se realizó en presencia de digoxigenina-11-dUTP nucleótido que se incorpora al amplicón durante la etapa de PCR. Para detectar los amplicones correspondiente desarrollamos un método de ELISA consistente en la unión a una placa de microtítulo de un óligo de captura biotinilado mediante el uso de estreptavidina. Para unir esta proteína, los pocillos de la placa se activaron con un adhesivo de moluscos.
El producto de amplificación denaturado se hibrida a la sonda de captura unido a la placa a 50º C y en presencia de formamida. Para detectar el producto amplificado hibridado se realiza un ensayo de ELISA con un anticuerpo especifico anti-digoxigenina. El método detecta una o mas partículas virales, y permite la detección del patógeno en tejidos de salmón así como en fluido seminal, fluido celómico y ovas. En sangre, el virus solo es detectable en la fracción celular y su concentración muestra marcadas variaciones en peces infectados. (Financiado en parte por un Convenio entre Bios Chile I.G.S.A. y Fundación Chile).

40 - CASPASE-8 IS DELETED OR SILENCED IN CHILDHOOD NEUROBLASTOMA Teitz,T; Wei, T.; Valentine,M; Vanin,E; Grenet,J; Valentine,V; Behm,F; Look,A.T.; Lahti,J.M.; Kidd,V.J. Departments of Tumor Cell Biology, Experimental Oncology, Experimental Hematology and Pathology, St. Jude Children's Research Hospital, Memphis TN 38105, USA.

Caspase-8 is a cysteine protease regulated by the formation of a death-inducing signaling complex (DISC).When activated by ligand,FAS recruits and activates caspase-8, which in turn activates a proteolytic cascade resulting in cell death.Here we report that caspase-8 is frequently deleted or silenced in neuroblastoma,a common tumor of the peripheral sympathetic nervous system in young children.Caspase-8 was inactivated through silencing of both alleles by methylation,as well as heterozygous deletion coupled with silencing of the remaining allele by methylation and homozygous deletion.Complete inactivation of CASP8 occurred almost exclusively in stage four and MYCN gene amplified neuroblastoma tumors,whereas partial methylation was associated with other stages of the disease.
Caspase-8-null NB cells were resistant to death receptor-mediated apoptosis,a deficit that was corrected by programmed expresion of the enzyme. Thus,caspase-8 acts as a tumor suppressor whose inactivation through epigenetic silencing appears to contribute a survival advantage during malignant transformation in neuroblastoma.

41 - LA INDUCCION DE LA APOPTOSIS POR ANISOMICINA ES DEPENDIENTE DEL ONCOGEN H-Ras EN LA PROGRESION TUMORAL DE LA CARCINOGENESIS DE PIEL DE RATON (Anisomicyn-dependent apoptosis is related with H-ras oncogen in the tumoral progression of mouse skin carcinogenesis) Hurtado, C.(1), Espada J(2), Martìnez, J.(1), Santibáñez, JF (1). Laboratorio de Biología Celular, INTA, Universidad de Chile y (2) Instituto de investigaciones Biomédicas, Madrid, España

Se ha propuesto que durante el proceso de malignización la célula tumoral adquiere una resistencia a la muerte celular programada atribuyéndosele a la activación oncogénica de H-Ras un importante papel en la adquisición de resistencia a la apoptosis. En el presente trabajo hemos estudiado la inducción de la apoptosis por anisomicina, un activador de las MAP quinasa JNK y p-38 e inhibidor de la síntesis de proteínas, sobre 4 líneas celulares representativas de distintos estadios de la carcinogénesis de piel de ratón caracterizadas por expresar distintos grados de activación oncogénica de H-Ras. Para analizar la apoptosis utilizamos el ensayo de escalera en geles de agarosa, y de sub-diploidía por citometría de flujo. Al tratar las líneas celulares con Anisomicina se observó que queratinocitos inmortalizados que poseen H-Ras normal (MCA3D), no fueron inducidos a la Apoptosis aun a altas concentraciones del agente apoptótico. En cambio las líneas celulares transformadas mostraron una gran sensibilidad al tratamiento, que fue tiempo y dosis dependiente e independiente de la dosis genética de H-ras mutado. Una de estas líneas celulares transfectada con el dominante negativo de H-Ras mostró una parcial resistencia a la apoptosis inducida por Anisomicina. Al transfectar mediante un vector retroviral la línea celular MCA3D con una versión de H-Ras mutacionalmente activo, se observó una significativa inducción de la Apoptosis por Anisomicina en relación a la línea celular parental. Los datos obtenidos sugieren que la Apoptosis, inducida por Anisomicina, es dependiente de la activación mutacional del oncogén H-Ras en la progresión tumoral de la carcinogénesis de piel de ratón.

Financiamiento: FONDECYT 3000045 y DID I00-99/2

42 - IDENTIFICACION DE LAS REGIONES REGULADORAS DE LA TRANSCRIPCION DEL RETROTRANSPOSON TLC1.1 DE LYCOPERSICON CHILENSE. (Identification of transcriptional regulator regions of TLC1.1 retrotransposon from Lycopersicon chilense). Tapia, G.; González, E. y Ruiz-Lara, S. Instituto de Biología Vegetal y Biotecnología, U. de Talca. Patrocinado por Elízabeth Hubert.

Los retrotransposones están ampliamente distribuidos en eucariontes, donde son la principal fuente de remodelación de sus genomas. Estos elementos requieren para su transposición un RNA intermediario, el que es transcrito inversamente a DNA, y como tal es inserto en un nuevo sitio en el genoma. En plantas, la actividad transcripcional de los elementos activos, está restringida a ciertos tejidos de la planta tanto durante su desarrollo y como en la respuesta de defensa frente a diferentes agentes bióticos y abióticos. El retrotransposón TLC1.1 de L. chilense, pertenece a la familia de los retrotransposones LTR Ty1/copia, el cual es transcripcionalmente activo durante la obtención de protoplastos y cuando la planta es sometida estrés por heridas y congelamiento. Aquí presentamos, los estudios realizados para identificar las regiones del LTR 5' responsables de la inducción de la transcripción del retrotransposón TLC1.1. Estos análisis se realizaron mediante ensayos de expresión transitoria en protoplastos electroporados con diferentes construcciones génicas del LTR 5' y secuencias parciales de él, fusionadas al gen reportero GUS. Los resultados obtenidos muestran que las 270 pares de bases del extremo 5' del LTR son suficientes para conferir una alta actividad transcripcional, la que es hasta dos veces superior a la exhibida por el promotor CaMV35S.
Financiado por Fondecyt Nº 1980387

43 - GENOTIPIFICACION DE APOLIPOPROTEINA E POR ELECTROFORESIS CAPILAR EN GEL-UV (Apolipoprotein E genotyping by gel capillary electrophoresis-UV) Cruzat, F; Durán, D; Calvo C; Silva V. Departamento de Bioquímica Clínica e Inmunología, Facultad de Farmacia, Universidad de Concepción.

La Apolipoproteina E (ApoE) es un importante constituyente de varias lipoproteínas plasmáticas. Su principal función es la redistribución de lípidos hacia el hígado, además de estar implicada en el crecimiento y reparación de neuronas dañadas. Apo E se ha asociado con el riesgo de desarrollo de enfermedades cardiovasculares y, recientemente, con la enfermedad de Alzheimer.
Se estandarizó la determinación del genotipo para apolipoproteína E mediante el uso de técnicas de PCR, mapeo con enzimas de restricción y electroforesis capilar en gel a través de detección UV. A partir de sangre venosa de sujetos control se extrajo ADN total de leucocitos, seguido por la amplificación y posterior corte con enzima de restricción HhaI del exón 3 del gen codificante de ApoE. Los fragmentos obtenidos, cuyo tamaño varió entre 48 y 91 bp, fueron analizados por electroforesis capilar en gel y detección UV a 260nm. Se determinaron 3 genotipos (E2/E3; E3/E3; E3/E4), con tiempos de análisis menores a 10 minutos, usando una matriz de Hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) de alta viscosidad y un voltaje de corrida de 15 kV. Estos resultados fueron confirmados usando electroforesis en geles de poliacrilamida al 20%.
Los resultados obtenidos permiten concluir que fue posible estandarizar una técnica de genotipificación de ApoE usando la técnica de Electroforesis Capilar en Gel con detección UV. Por su rapidez y reproducibilidad es una técnica factible de ser utilizada en estudios poblacionales de gran volumen.
Financiamiento obtenido a través del Proyecto ABA "Analítica Biomédica Avanzada", Dirección de Investigación, Universidad de Concepción, Chile.

44 - CUANTIFICACION DE LA EXPRESION DE LA SUBUNIDAD b DE CK2 DURANTE LA ACLIMATIZACION DEL PEZ C. carpio. (Quantification of the expression of CK2 b subunit during the acclimatization of the fish C. carpio) Leal, S., Kausel, G.*, Figueroa, J.*, Escobar, J., Pinto, R., San Martín, R. y Vera M.I. Laboratorio de Biología Celular y Molecular, Universidad Andrés Bello y MIFAB, República 217, Santiago, *Inst. Bioquímica, Univ. Austral de Chile, Valdivia, CHILE

En organismos ectotermos el medio ambiente condiciona cíclicamente la modulación transcripcional de una amplia variedad de genes. La adaptación del pez C. carpio a la estación invernal afecta la actividad del nucléolo provocando la segregación de sus componentes lo que se refleja en la disminución temporal de los transcritos de los genes ribosomales. En verano, en cambio, estos genes son transcritos más activamente. La maquinaria transcripcional de los genes ribosomales está conformada por numerosos factores, algunos de los cuales son fosforilados por proteína quinasa CK2. La estrecha relación existente entre la regulación transcripcional de los genes nucleolares y la actividad quinasa de CK2 nos orientó a cuantificar el transcrito de este gen y de su producto, durante el proceso de aclimatización de la carpa.
Con este propósito se realizaron experimentos de hibridación in situ e inmunocitoquímica, cuyos resultados sugieren la expresión diferencial de la subunidad b en condiciones de aclimatización. Experimentos de RT-PCR competitivo confirman estos resultados.
Proyectos FONDECYT 1000-061, DI-UNAB 59-A/99

45 - CAMBIOS GENETICOS TEMPRANOS EN PIEL HUMANA NORMAL CON EXPOSICION SOLAR CRONICA (Early genetic changes in normal human skin with chronic sun exposure). Ruiz, F., Brown, N., Carvallo, C., Graumann, R., González, S., Molgó, M., Alvarez, M., y Ziegler, A. Programa de Cáncer, P. Universidad Católica de Chile (Patrocinio: L. Velásquez).

En cáncer de piel no-melanocítico, 23% de los carcinomas de células escamosas (CCE) y 31% de las queratosis actínicas premalignas (QA), presentan pérdida de heterocigosidad en el cromosoma 3p. La mutación del gen supresor de tumores p53 es frecuente en ambas lesiones (>60%) y constituye un cambio genético temprano. Para estudiar las alteraciones tempranas que llevan al desarrollo de CCE y QA, analizamos 33 pares de biopsias de piel humana normal tomadas de una zona expuesta y de una protegida del sol, respectivamente. El análisis de pérdida de heterocigosidad reveló deleciones sólo en piel expuesta: 5/23 (22%) muestras tuvieron pérdida en 3pter-p24.2, y 2/15 (13%) en 3p24.2-p22. Se midió la actividad de telomerasa en extractos de cada biopsia por la posible existencia de un gen represor de telomerasa en 3p. No hubo una diferencia significativa entre la actividad en pieles expuestas y no expuestas, ni una correlación entre actividad y pérdidas cromosomales en 3p. Finalmente, la sobreexpresión de p53 en los tejidos fue observada 3 veces más en piel expuesta que en piel no expuesta, concordante con una mayor frecuencia de mutación de p53. Los datos sugieren que en cáncer de piel no-melanocítico, las pérdidas cormosomales en 3p son un evento temprano que puede preceder la mutación de p53. Fondecyt 1980926.

46 - ANALISIS DEL DESTINO MOLECULAR DEL T-KG SECRETADO IN VIVO Y EN CELULAS EN CULTIVO. (Analysis of the molecular fate of secreted T-KG molecules in vivo and in vitro) *Silva, F., *Miño B., *Leiva E. y *#Sierra F. *Instituto de Ciencias Biomédicas (ICBM), Facultad de Medicina, Universidad de Chile,, Santiago, Chile. # The Lankenau Medical Research Center, Wynnewood, PA, USA. Patrocinio: Dr. Edio Maldonado.

Ratas senescentes sobreexpresan cininógeno T (T-KG) en el hígado. De ahí, parte de la proteína es secretada al torrente sanguíneo. La sobreexpresión de T-KG en fibroblastos murinos lleva a inhibición de la proliferación celular e inhibición de la vía ERK de transducción de señales. Parte de estos efectos parecen ser mediados por el T-KG secretado al medio de cultivo. Para elucidar el posible rol fisiológico del T-KG secretado, hemos investigado dos parámetros: 1. El destino molecular del T-KG ha sido evaluado mediante el uso de proteínas de fusión con GFP o con un tag de c-Myc. 2. El estado de asociación del T-KG con otras proteínas séricas ha sido medido por filtración a través de filtros Microcon. Nuestros resultados sugieren que al menos parte de las moléculas de T-KG sufren proteólisis de su extremo carboxilo terminal, posiblemente mediante liberación de cininas, ya sea en el extracelular asociado a receptores membranarios, o en forma intracelular, posiblemente a nivel de lisosomas. Por otro lado, hemos determinado que el suero de animales senescentes contiene una mayor proporción de T-KG libre (no asociado a otras proteínas) que el suero de animales jóvenes. Considerando que los efectos fisiológicos del T-KG extracelular dependerán de su asociación con otras proteínas, y la capacidad del T-KG libre de interactuar con receptores celulares, estos resultados sugieren un rol para el T-KG extracelular durante el envejecimiento.
Financiamiento: Proyecto Fondecyt #1981064 y NHI AG-13902.

47 - ANALISIS DEL CARIOTIPO MOLECULAR Y LOCALIZACION CROMOSOMICA DE GENES EN ESPECIES PATOGENAS Y NO PATOGENAS DE TRYPANOSOMA. (Analysis of molecular karyotype and gen cromosomal localization in pathogenic and non-pathogenic species of Trypanosoma). 1Marchant, C.; 2Colombo, A.; 2Ferreira, A.; 3Repetto, Y. y 1Galanti, N. Programas de 1Biología Celular y Molecular, 2Inmunología y 3Farmacología Molecular y Clínica ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

La enfermedad de Chagas es una parasitosis causada por Trypanosoma cruzi, que afecta principalmente a centro y sur América. T.cruzi comparte vectores triatóminos y reservorios con su contraparte no patogénica para el hombre, T.rangeli, parásito que infecta a una amplia variedad de mamíferos en Latinoamérica.
El conocimiento sobre los factores genéticos implicados en la patogenicidad de T.cruzi, ausentes o modificados en T.rangeli, son muy escasos. En este trabajo se presenta un análisis comparativo del cariotipo molecular entre estas dos especies de Trypanosoma.
Se prepararon cromosomas a partir de epimastigotes en cultivo de T.cruzi y T.rangeli. Los parásitos fueron inmovilizados en agarosa LMP y digeridos con proteinasa K por 48 hrs a 50º C. El cariotipo molecular se obtuvo mediante separación de los cromosomas por PFGE y la localización cromosómica de varios genes por southern blot..
Los resultados muestran marcadas diferencias en el cariotipo molecular y la localización cromosómica de genes entre T.cruzi y T.rangeli, lo cual podría indicar una relación entre la variabilidad genética y la patogenicidad observadas en estas dos especies de Trypanosoma.
Financiado por Proyecto SIDA/SAREC

48 - COMPLEMENTACION DEL DESPLAZAMIENTO VIRAL MEDIANTE UNA PROTEINA DE MOVIMIENTO HETEROLOGA.(Complementation of viral movement by means of a heterologous movement protein) Espinoza, C., Díaz, F., Medina, C., Arce-Johnson, P. Departamento de Genética Molecular y Microbiología. Facultad de Ciencias Biológicas. Pontificia Universidad Católica de Chile.

TMV-U1 y TMV-Cg son dos tobamovirus que codifican para al menos cuatro proteínas, dos relacionadas con replicación, una proteína de la cápside (CP) y una proteína de movimiento (MP). Esta última es necesaria para el movimiento local durante la infección. TMV-U1 y TMV-Cg infectan tabacos resistentes generando respuesta hipersensible. También TMV-U1 infecta tabacos sensibles generando infección sistémica y mosaico apical. TMV-Cg, en cambio, induce lesiones locales en la hoja inoculada en tabacos resistentes y necrosis local sistémica en plantas sensibles. Además, TMV-Cg infecta eficientemente A.thaliana a diferencia de TMV-U1. Nosotros hemos producido plantas transgénicas de tabaco con el gen de la MP-Cg y evaluado en estas plantas la complementación heteróloga del virus mutante TMV-U1DMP carente en su MP. Líneas que expresan mRNA de la MP-Cg se complementaron con TMV-U1DMP. La evaluación se realizó midiendo la aparición de lesiones locales en tabacos MP-Cg resistentes o la acumulación de CP en hojas apicales de tabacos sensibles. Los tabacos resistentes de las líneas A3 y E presentaron lesiones locales, mientras que las líneas sensibles 3.2 y 3.3 acumularon CP en hojas inoculadas y apicales no inoculadas. También evaluamos complementación con el virus híbrido TMV-U1-DMP-CPCg, carente en su MP pero que porta la CP del TMV-Cg y la replicasa del TMV-U1, la que resultó positiva. Se concluye que las plantas transgénicas producidas, expresan una MP-Cg funcional y que los virus mutante e híbrido utilizan eficientemente la proteína heteróloga MP-Cg para su desplazamiento.
Agradecimiento:Proyecto Fondecyt en Líneas Complementarias 8980005

49 - MODULACION DE b-CATENINA (Vía Wnt) POR PROTEINA QUINASA C. (Modulation of b-catenin ( wnt pathway) by protein kinase C). Garrido, JL ; Bronfman, M e Inestrosa, N.C. Centro de Regulación Celular y Patología, Departamento de Biología Celular, Facultad de Ciencias Biologicas, Pontificia Universidad Católica de Chile.

La proteína quinasa C (pkC) cumple un papel fundamental en la transducción de las señales involucradas en proliferación, diferenciación y desarrollo celular. PkC fosforila residuos de serina/treonina y su actividad es dependiente de Ca+2, diacilglicerol y fosfatidilserina, pudiendo ser activada por ésteres de forbol. Estudios recientes sugieren que la pkC estaría relacionada con la activación de una nueva vía de transducción de señales intracelulares, la vía Wnt. Para estudiar si esta relación ocurre en el sistema nervioso se utilizaron cultivos primarios de hipocampo de rata evaluando la localización de b-catenina, un componente típico de la vía Wnt. Los cultivos fueron tratados por 1,5 h con esteres de forbol (PMA), observandose un aumento de la b-catenina citoplasmática; al realizar tratamientos por 8 h con litio se observó similar comportamiento, sin embargo, al pretratar los cultivos con litio (10 mM ), y luego tratar por 1,5 h con PMA 1 mM se observó un gran aumento en los niveles de b-catenina citoplasmáticos. Por el contrario, al tratar los cultivos con Calfostina C ( 10 mM ), un inhibidor de pkC, por 1,5 h se observó una disminuciòn de los niveles de b-catenina citoplasmaticos. Estos resultados sugieren que en células neuronales existe un sinergismo entre la señal de Wnt y la señal vía pkC, lo que implica la estabilización de b-catenina citoplasmática. En estudios futuros se evaluará el papel de pkC y Wnt en la neurotoxicidad de las fibras de amiloide.
Financiado por Catedra Presidencial y FONDAP en Biomedicina Nº 13980001 (N.C.I.).

50 - POLIMORFISMO DEL PROMOTOR DEL FACTOR DE NECROSIS TUMORAL ASOCIADO A ARTRITIS REUMATOIDE. (Polymorphism in the tumor necrosis factor promoter region associated to rheumatoid arthritis). Cuenca, J1., Ferreira,L1,3., Schiattino, I2., Cuchacovich, M3., Ferreira, A1. y Aguillón, J.C1. Programa Disciplinario de Inmunología1, ICBM, Escuela de Salud Pública2, Facultad de Medicina. Hospital J.J. Aguirre3, Universidad de Chile.

El TNF, citoquina pleiotrópica que participa en la respuesta inmune innata y específica, tiene importancia en la patogénesis de variadas infecciones y enfermedades inflamatorias, así como la artritis reumatoide(AR).
De los polimorfismos del promotor del TNF, el intercambio G/A en la posición -308, genera los alelos TNF1 y TNF2, presencia de G y A, respectivamente. El alelo TNF2 se relaciona, in vitro con una mayor producción de TNF frente al estímulo con lipopolisacárido, mientras in vivo, con la severidad de algunas enfermedades. El objetivo de este estudio es determinar la asociación entre el polimorfismo -308, la sobre-expresión y actividad citotóxica ex vivo del TNF, y la presencia y/o severidad de la AR. Para esto, se reclutaron 29 enfermos y 22 controles. El 21% de los pacientes y el 18% de los controles presentó el polimorfismo. El odds ratio fue 1.17, no significativo (p= 0.82). La producción de TNF y la actividad citotóxica, a concentraciones equivalentes de la citoquina, varía entre los individuos. La relación de éstas con la presencia del polimorfismo, no fue significativa para individuos con AR y controles.
Financiado por FONDECYT 1990936.

51 - PURIFICACION Y CARACTERIZACION DE FICOBILISOMAS DE GRACILARIA CHILENSIS (Purification and characterisation of phycobilisomes from Gracilaria chilensis). Bruna, C.; Contreras-Martel, C.; Martínez-Oyanedel, J; Bunster, M. Laboratorio de Biofísica Molecular. Departamento de Biología Molecular. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad de Concepción.

Los ficobilisomas (PBS) son macrocomplejos proteicos encargados de la captación y conducción de luz hacia los centros fotoactivos, actuando como un sistema auxiliar de fotosíntesis en algas eucarióticas y cianobacterias.
Están formados por proteínas fluorescentes denominadas ficobiliproteínas (PBPs), asociadas mediante proteínas de unión, las que se organizan formando dos tipos de estructuras morfológicamente distinguibles: un núcleo de anclaje a la membrana del tilacoide, y varillas que irradian desde dicho núcleo. Para realizar su función, las PBPs poseen varios grupos cromóforos, consistentes en anillos tetrapirrólicos enlazados covalentemente a sus residuos de cisteína. La alta eficiencia que caracteriza a los ficobilisomas implica una necesaria orientación espacial de dichas bilinas.
Hasta la fecha, sólo se han descrito ficobilisomas de cianobacterias y de algunas algas rojas unicelulares. Debido a esta razón, se estandarizó una técnica para purificar ficobilisomas del alga roja pluricelular Gracilaria chilensis.
Los agregados purificados fueron caracterizados morfológicamente mediante microscopía electrónica. Por otra parte, se determinó el número y peso molecular de las cadenas polipeptídicas no ficobiliproteicas que participan en el complejo utilizando PAGE-SDS.
La fracción de PBS se caracterizó espectroscópicamente. De acuerdo al espectro de absorción, los ficobilisomas obtenidos contienen tres PBPs: ficoeritrina, ficocianina y aloficocianina. La espectroscopía de fluorescencia indica que aloficocianina es el aceptor terminal de energía.
Proyecto DIUC 99081084-1.0

52 - MICROPROPAGACION A PARTIR DE MATERIAL EMBRIONARIO DE Pinus radiata D. DON. (Micropropagation of Pinus radiata D. Don from mature embryos culture). Zapata, J., Ríos, D. Lab. Biotecnología Forestal, Depto. Silvicultura, Facultad Cs. Forestales, Universidad de Concepción. msanche@udec.cl

Las técnicas de propagación in vitro ofrecen la alternativa de un mayor control y homogeneidad en la producción de las plantas, aumentando la tasa de multiplicación, ahorrando la fuente de material inicial de cultivo y entregando plantas de genotipos mejorados y/o seleccionados.
El objetivo del estudio es desarrollar un protocolo de regeneración de material zigótico de Pinus radiata D. Don a través de la vía organogénica que comprende las siguientes etapas: establecimiento de embriones maduros optimizando el medio de cultivo empleado (MS, DCR y QL); proliferación de brotes con empleo de distintas concentraciones de citoquininas y auxinas; elongación de microtallos en medio sin hormonas; enraizamiento de los explantos en medio conteniendo distintas concentraciones de auxina y carbón activo.
Los resultados preliminares indican que QL es el medio de cultivo donde se expresan mejor las variables macromorfológicas analizadas (porcentaje de sobrevivencia y número de brotes nuevos de los explantos, entre otros), debido probablemente a la reducida composición de macronutrientes respecto a los medios MS y DCR.
Proyectos DIUC 99.142.008-1.0 y FONDEF D97-F1059.

53 - INDUCCION DE LINEAS DE CALLO PROEMBRIOGENICO EN Eucalyptus globulus. (Induction of proembryogenic callus lines in Eucalyptus globulus Labill.). Gómez, C.; Ríos, D.; Uribe, M.y Sánchez-Olate, M. Laboratorio de Biotecnología Forestal, Facultad de Ciencias Forestales. Universidad de Concepción. msanche@udec.cl

Se estudió la capacidad de inducir la formación de líneas embriogénicas en Eucalyptus globulus Labill. Como explantos iniciales se emplearon semillas, ejes embrionarios, hojas de plantas micropropagadas, hipocótilos y cotiledones maduros en 4 tratamientos de inducción: I1=B5 + 2,4-D 2,0 mg/L + BAP 0,5 mg/L; I2= B5 + ANA 0,5 mg/L + BAP 1,0 mg/L; I3= MS + 2,4-D 2,0 mg/L + BAP 0,5 mg/L; I4= B5 + 2,4-D 2,0 mg/L + Kn 1,0 mg/L. Los resultados preliminares indican formación de callo sobre el 70% en todos los tratamientos para los tres primeros tipos de explantos y sobre el 50% en cotiledones e hipocótilos, además de marcadas diferencias en las respuestas macromorfológicas entre tratamientos y explantos. También se observaron respuestas rizogénicas en I1, I3 e I4 al utilizar semillas, ejes embrionarios y cotiledones maduros y respuestas caulogénicas en I2, para semillas y ejes embrionarios. Por otra parte, los análisis citológicos indican presencia de células suspensoras y cabezas proembriogénicas en I1 y fases iniciales de suspensores en I3. El tratamiento I2 no mostró características embriogénicas. Los estudios citológicos evidenciaron que los callos proembriogénicos mantienen sus características al ser repicados a medio base.

Los autores agradecen a los proyectos DIUC Nº 99.142.008-1.0 y FONDEF D97-F1059.

54 - ASPECTOS MACROMORFOLOGICOS DE LA MICROPROPAGACION DE CASTAÑO (Castanea sativa Mill.). (Macromorphological aspects of the micropropagation of chetnuss (Castanea sativa Mill.). Ríos, D., Hasbún, R., Escobar, R. Laboratorio de Biotecnología Forestal, Depto. Silvicultura, Facultad de Ciencias Forestales, Universidad de Concepción. drios@udec.cl

Castanea sativa es una especie fruto-forestal que esta adquiriendo una gran importancia en nuestro país como una especie doble propósito. Su reproducción vegetativa, cuenta con grandes inconvenientes, ya que como especie recalcitrante, es difícil de propagar. La micropropagación, es una de las alternativas viables para la producción de individuos selectos de alto valor económico. El objetivo del presente trabajo es establecer los medios nutritivos y las cadenas proliferativas para la producción de microtallos y su posterior enraizamiento en dos variedades seleccionadas de castaño, B9 y CHAC. Se utilizaron los medios de cultivo Heller, Quorin, Gresshoff y DKW, en los cuales fueron cultivadas zonas nodales de microplántulas provenientes de ejes embrionarios desarrollados en medio DKW. Los resultados muestran, en general, que la variedad B9 presenta mayor respuesta en número de yemas y longitud de brotes que la variedad CHAC, en todos los medios analizados, siendo el medio DKW donde se generó la mayor tasa de proliferación. Estos resultados indican que la respuesta in vitro es dependiente de las condiciones de cultivo y por ende de la variedad. Por otro lado, también se observaron diferencias en el numero de brotes dependiendo si la zona nodal cultivada proviene de la zona basal o apical de la microplántula.
Proyectos DIUC 99.142.007-1.0 y FONDEF D97-F1059.

55 - TC45, UN ANTIGENO DIMORFICO DE Trypanosoma cruzi CON LOCALIZACIÓN CROMOSICA VARIABLE, ES CALRETICULINA. (Tc45, a dimorphic Trypanosoma cruzi immunogen with variable chromosomal localization, is calreticulin). Pérez, C., Aguillón, J. C., Molina, M. C. Ferreira, A. Programa de Inmunología, ICBM, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.

Tc45 es una proteína de Trypanosoma cruzi, citoplasmática, inmunodominante e inmunogeneticamente definida en el par congénico murino ASW / ACA. Esta proteína fue purificada y parcialmente microsecuenciada lo que permitió descartar homología con otras proteínas descritas.
En este trabajo reportamos el clonamiento, secuenciación y expresión del gen de Tc45. El análisis de la secuencia reveló un 98 % de homología con la proteína de tipo calreticulina de Trypanosoma cruzi. Además, cinco péptidos obtenidos por microsecuenciación de Tc45 fueron ubicados en la secuencia de calreticulina. Por otro lado, rastreamos el gen de calreticulina en la cepa Tulahuén de T. cruzi y el clon CL Brener demostrando su localización cromosómica variable. Además, la proteína fue detectada en diferentes cepas de T. cruzi y también en Trypanosoma rangeli presentando formas alternativas de 43 y 46 kDa.
La identificación de Tc45 como calreticulina plantea nuevos desafíos acerca del papel de esta proteína parasitaria como posible agente para evadir la respuesta inmune del huésped, desarrollo potencial de autoinmunidad, así como también evaluarla en diagnostico o como posible blanco inmunoterapéutico para la enfermedad de Chagas.

56 - EVALUACION PRECLINICA DE UNA VACUNA SINTETICA MAP DE PLASMODIUM FALCIPARUM PARA MALARIA EN MONOS AOTUS Y MODELO MURINO. (Preclinical evaluation of a synthetic Plasmodium falciparum MAP malaria vaccine in Aotus monkeys and mice). Ferreira, V.a; Moreno, A.b; Rodriguez, R.b; Oliveira, G.c; Nussenzweig, R c; Moya-Castro, R.c; Calvo-Calle, M.c; Nardin, E.c. a) Programa de Inmunología, Facultad de Medicina, ICBM, Universidad de Chile, Independencia 1027 b) Instituto de Inmunología, Hospital San Juan de Dios, Santafé de Bogotá, Colombia. c) Department of Medical and Molecular Parasitology, New York University School of Medicine, 341 E. 25th Street, New York, NY 10010, USA.

Péptidos múlti-antigénicos ("múltiple antigen peptides" o MAPs) conteniendo epitopos de la principal proteína de superficie del esporozoíto de malaria, la proteína circumsporozoítica (CS), generan protección contra el desafío con esporozoítos en ratones y monos, mediado por anticuerpos. Para la preparación de un ensayo clínico de fase I de un MAP (T1B)4 de P. falciparum, el cual contiene epitopos de células T y B de la región repetitiva de la proteína CS, se realizaron estudios pre-clinicos sobre la inmunogenicidad y formulación de los adjuvantes en ratones y monos Aotus. El MAP (T1B)4 resultó ser inmunogénico en tres especies diferentes de monos, Aotus nancymae, A. vociferans y A. negriceps. La injección de la combinación MAP/alum, sin embargo, aumenta significativamente la respuesta de anticuerpos en monos previamente expuestos a esporozoítos por infección natural, sugiriendo que la administración de la vacuna MAP podría ser una manera efectiva para aumentar los bajos niveles de anticuerpos presentes en individuos viviendo en un área endémica de malaria. La adición de QS-21, una saponina purificada, significativamente aumenta la inmunogenicidad del MAP adsorbido a alum en ratones y monos, constituyendo una adecuada formulación de la vacuna para ensayos de fase I en voluntarios humanos.

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