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versión On-line ISSN 0718-0764

Inf. tecnol. vol.25 no.2 La Serena  2014

http://dx.doi.org/10.4067/S0718-07642014000200016 

ALIMENTOS

EFECTO DEL ÁCIDO ASCÓRBICO DURANTE MADURACIÓN IN VITRO DE OOCITOS BOVINOS EN LA PRODUCCIÓN DE ESPECIES REACTIVAS DE OXÍGENO (ERO) Y COMPETENCIA PARA EL DESARROLLO EMBRIONARIO

 

EFFECT OF ASCORBIC ACID DURING BOVINE OOCYTES IN VITRO MATURATION ON REACTIVE OXYGEN SPECIES (ROS) PRODUCTION AND EMBRYO DEVELOPMENTAL COMPETENCE

 

Neil A Vásquez(1)*, Viviana Torres(1), Benjamín A Rojano(2).

(1) Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias, Posgrado de Biotecnología, Grupo de Biotecnología Animal. Bloque 11-220, carrera 59A N° 63-20, Medellín-Colombia (e-mail-nvasquez@unal.edu.co).

(2) Universidad Nacional de Colombia Sede Medellín, Facultad de Ciencias, Grupo de Investigación en Productos Naturales y Ciencias de los Alimentos. Bloque 16-211, carrera 59A N° 63-20, Medellín-Colombia.


Resumen

En el presente estudio se evalúo el efecto del suero bovino fetal (SBF), la albúmina bovina (BSA) y los antioxidantes alfa tocoferol (AT) y ácido ascórbico (AA), sobre la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO) en medio de cultivo, oocitos bovinos madurados in vitro (MIV) y la tasa de desarrollo embrionario. Las condiciones de cultivo fueron 38.5°C, 5%CO2 y 95% de humedad. Los resultados mostraron que la mayor producción de ERO fue observada en medio suplementado con SBF (P<0.05), mientras que en los medios que contenían BSA y SBF-BSA fue similar (p>0.05). El AA y AT mostraron efecto antioxidante en los medios que contenían suero y en los oocitos MIV, pero solo el AA mejoró la competencia para el desarrollo de los oocitos. Estos resultados aportan evidencia sobre la importancia de la disminución de ERO durante la MIV para mejorar la producción in vitro de embriones bovinos.

Palabras clave: albúmina sérica, antioxidantes, especies reactivas de oxígeno, suero bovino.


Abstract

In this study the effects of fetal calf serum (FCS), bovine serum albumin (BSA), and the antioxidants alpha tocopherol (AT) and ascorbic acid (AA), on the production of reactive oxygen species (ROS) in culture media, in vitro matured (IVM) bovine oocytes and the rate of embryo development were evaluated. The culture conditions were as follows: incubation at 38.5°C, with 5%CO2 and 95% of humidity. The results showed higher production of ROS in culture media supplemented with FCS (p<0.05), while ROS production was similar in culture media containing BSA and FBS-BSA (p>0.05).AA and AT showed antioxidant effect on culture media containing serum and in success rate of IVM oocytes, but AA only improved the developmental competence of oocytes. This result provides evidence on the importance of reducing ROS production during IVM for improvement of in vitro bovine embryo production.

Keywords: antioxidants, bovine serum, reactive oxygen species, serum albumin.


 

INTRODUCCIÓN

El uso de la producción in vitro de embriones (PIVE) por compañías comerciales ha aumentado, y actualmente representa un considerable porcentaje del número total de embriones de ganado vacuno producidos en todo el mundo (Thibier, 2009). Sin embargo, en los procedimientos de producción in vitro de embriones, las condiciones de maduración del oocito afecta la proporción de embriones (Rizos et al., 2002), planteando que la calidad del oocito es fundamental para alcanzar una buena eficiencia de desarrollo embrionario hasta el estado de blastocisto (Lonergan et al., 2003; Sirard et al., 2003).Varios factores influyen en la calidad del oocito como son la concentración de oxígeno (Correa et al., 2008), la exposición a la luz (Takenaka et al., 2007), la composición del medio (Guérin et al., 2001; Martín-Romero et al., 2008), el suplemento proteico (Rizos et al., 2003; Tetzner et al., 2011) y energético (Geshi et al., 2000; Krisher et al., 2007). Sin embargo uno de los factores más importantes es el estrés oxidativo, debido a que los procesos de producción in vitro de embriones bovinos son llevados a cabo en ambientes de mayores concentraciones de oxigeno (20%) en relación al ambiente in vivo (3-5%) (Park et al., 2005), posiblemente conduciendo a un aumento en los niveles de especies reactivas de oxigeno (EROs), las cuales tienen un efecto perjudicial en diferentes biomoléculas como lípidos, ácidos nucléicos y proteínas, afectando el desarrollo embrionario (Correa et al., 2008; Valko et al., 2006)yla tasa de preñez (Bedaiwy et al., 2010).

En los medios de cultivo para maduración in vitro de oocitos (MIV), los suplementos proteicos más utilizados son el suero bovino fetal (SBF) (Sudano et al., 2011) y la albúmina sérica bovina (BSA) (Ali y Sirard, 2002). Sin embargo, el suplemento de SBF altera algunos parámetros de calidad embrionaria tales como, el perfil de expresión génica, la criotolerancia, acumulación de lípidos citoplasmática e índice apoptótico, mientras que el suplemento de albúmina mejora estas características embrionarias (Rizos et al., 2003; Sudano et al., 2011).Por otro lado, los antioxidantes más evaluados en los protocolos de producción in vitro de embriones son el ácido ascórbico (AA) y el alfa tocoferol (AT). Sin embargo, los resultados son inconsistentes, mientras en unos trabajos no encuentra efecto del ácido ascórbico sobre la tasa de clivaje y blastocistos (Córdova et al., 2010), en otros, se describen efectos protectores que mejoran las tasas de blastocistos y la celularidad (Jeong et al., 2006).

En este trabajo se determinó el efecto de los suplementos proteicos SBF, BSA y los antioxidantes alfa tocoferol (AT) y ácido ascórbico (AA), en el medio de maduración de oocitos bovinos, sobre los niveles de producción de ERO, a través de técnicas espectrofluorimétricas. Además se determinó el efecto de los antioxidantes sobre la producción intracelular de especies reactivas de oxígeno en oocitos madurados in vitro y su competencia para el desarrollo embrionario.

MATERIALES Y METODOS

Sitio de estudio. La preparación de medios de cultivo con los suplementos proteicos, la visualización de la fluorescencia en los oocitos y la producción de embriones bovinos in vitro, se realizó en el Laboratorio de Biotecnología Animal. Las técnicas de espectrofluorimetría se realizaron en el Laboratorio de Ciencia de los Alimentos de la Universidad Nacional de Colombia, sede Medellín.

Medio de cultivo y suplementos proteicos. Para determinar el efecto del suplemento (SBF y BSA) en el medio de cultivo sobre la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO), el medio utilizado fue el M 199 (Gibco 11150-067, Life Technologies Corporation; USA, Grand Island, NY), suplementado con 0.33mM de Piruvato de sodio (Sigma P4562), 1 μg/mL de Estradiol (Sigma E2758), 1X de solución antibiótica (penicilina 100UI/mL; estreptomicina 100mg/mL; anfotericina B 0.25mg/mL) (Sigma A5955), 5 μg/mL rhLH (Luveris) y 1 μg /ml pFSH (Sigma F2293). Este medio fue designado TCM y se suplementó de tres maneras diferentes: Grupo A: TCM + 10% de suero bovino fetal (SBF, Sigma N4887), Grupo B: TCM + 6 mg/mL de albúmina sérica bovina libre de ácidos grasos (BSA, Sigma A6003), Grupo C: TCM + 6 mg/ml de BSA + 3% de SBF (SBF+BSA) y Como grupo control TCM sin suplemento proteico. Las condiciones de incubación fueron a 38.5°C, 5% CO2 en aire con 90% de humedad relativa, por un periodo de 24 horas. Todos los suplementos del medio de maduración son de Sigma-Aldrich Inc., USA, Spruce St. St. Louis, MO, excepto la rhLH (Luveris, Merck Serono S.A, Germany, Darmstadt)

Suplementos antioxidantes en el medio de cultivo. Para determinar el efecto de los antioxidantes alfa tocoferol y ácido ascórbico, sobre la producción de ERO en medios de cultivo, a cada medio con los diferentes suplementos proteicos (grupos A, B y C), se le adicionó alfa tocoferol 100 μM y ácido ascórbico 100 μM. Los grupos controles fueron los medios A, B y C sin antioxidante.

Cuantificación de ERO en los medios de cultivo. Cumplidas las 24 horas de incubación, se colocó en una caja multipozos de 300 μl (BD Falcon Microtest Plates 353241, BD USA, Franklin Lakes, NJ), Buffer Fosfato Salino (PBS) 75mM, el fluorocromo 2,7-Diclorodihidrofluoresceina diacetato (H2DCFDA, Sigma D6883) (40μM) y el medio a evaluar. Se midió la tasa de oxidación de la sonda fluorescente H2DCFDA, a través de la cinética de emisión durante 3500 segundos. Las mediciones se realizaron en un espectrofluorímetro Perkin-Elmer S5 (Perkin-Elmer, Inc., USA, San Jose, California) a 38.5°C (Martín-Romero et al., 2008).

Recuperación de oocitos y maduración in vitro (MIV). Ovarios de hembras bovinas sacrificadas en la planta de beneficio, fueron transportados al laboratorio en PBS, en donde se procedió a la aspiración de los folículos con un diámetro de 3 a 6 mm y el líquido recolectado fue decantado por gravedad a 35°C en tubos cónicos de 15 ml. El precipitado se re-suspendió en 1 ml de medio de lavado, el cual consiste en TCM-199 con sales de Hank y bajo visión con estereomicroscopio se seleccionaron los complejos oocito-cúmulo (COCs) de buena calidad según los criterios previamente establecidos (de Wit et al., 2000; López et al., 2008). Los COCs seleccionados fueron cultivados en grupos de 10-12 COCs a 38.5°C en medio SBF-BSA y 100 μM de antioxidante (ácido ascórbico o alfa tocoferol), y el grupo control sin antioxidante. Las condiciones de cultivo fueron de 38.5°C, 5% de CO2 y 90% de humedad relativa por 24 horas.

Determinación de la producción de ERO en oocitos. Cada oocito individual fue incubado por 15 minutos con 40 μM de la sonda fluorescente H2DCFDA en la oscuridad. Luego fueron lavados con buffer fosfato salino Dulbecco(DPBS) (Invitrogen Corporation) yen gotas de 10 μl se observó la fluorescencia utilizando un microscopio de epifluorescencia (Nikon eclipse 80i) con filtros B-2E/C. La intensidad de fluorescencia de los oocitos fue analizada por el software ImageJ (Version 1.41; National Institute of Health, Bethesda, MD, USA) y normalizada con la media de fluorescencia de los oocitos control (sin antioxidante) (Kwak et al, 2012; You et al, 2010).

Determinación de la competencia para el desarrollo embrionario. Cumplidas las 24 horas de maduración in vitro, los oocitos fueron transferidos a gotas de 50 μl de medio de fertilización TALP suplementado con 10 μg/ml de heparina, 1mM de hipotaurina, 250 mM de Epinefrina, 2 mM de penicilamina y 1x de solución antibiótica (Sigma A5955). Se utilizó semen proveniente del mismo ejemplar, descongelado a 37ºC por 30 segundos, y luego se seleccionaron los espermatozoides viables y móviles mediante gradiente de AllGradient® (45 y 90%) a 400 xg por 8 minutos. Se determinó la concentración de espermatozoides y se ajustó a una concentración final de 2 x 106/ml de espermatozoides en el medio de fertilización y se incubaron durante 18 horas (Dode et al, 2002). Al finalizar este tiempo, los presuntos cigotos fueron cultivados en medio EVOLVE® suplementado con 6mg/ml de BSA-FAF, 3% de SBF y 1x de solución antibiótica (Sigma A5955) por 7 días, bajo las mismas condiciones de cultivo descritas anteriormente. Durante el cultivo se determinó a las 48 horas, la tasa de clivaje, y al día 7 la tasa de blastocistos, sobre el total de oocitos inseminados y de embriones en etapa de clivaje.

Análisis estadístico. El diseño experimental de este trabajo fue un diseño de bloques completo al azar. Para la evaluación del efecto de los suplementos proteicos (SBF y BSA) y antioxidantes (AT y AA) en el medio de cultivo sobre la producción de EROs, los datos fueron obtenidos de cuatro repeticiones diferentes, los cuales fueron ajustados a un análisis de regresión exponencial utilizando el programa Statgraphics Plus versión 2.0 (Statistical Graphics Corp. Rockville, MD), y la pendiente de intensidad fue normalizada con la obtenida en cada grupo control. Los datos son expresados como pendientes (Promedio ± ES) de fluorescencia de H2DCFDA sobre el control de cada grupo experimental.

Las pendientes normalizadas de cada medio, la intensidad de fluorescencia normalizada de cada oocito y los porcentajes de clivaje y blastocistos, fueron sometidas a un análisis de varianza y posteriormente a un análisis de comparación de medias por el Test de Tukey, utilizando el programa STATISTICA 12.0 (StatSoft, Inc. Tulsa, OK). Las diferencias fueron consideradas significantes si el valor p<0.05

RESULTADOS

Efecto del suplemento proteico sobre la producción de EROs en medio de cultivo. Al evaluar el efecto del suplemento proteico sobre la producción de EROs, el valor del promedio de pendientes de fluorescencia de H2DCFDA más alto se presentó en el medio de cultivo suplementado con SBF (1.47), presentando diferencia estadística significativa (p<0.01) con respecto al suplemento BSA (1.17), SBF-BSA (1.19) y con el control TCM (1.00), mientras que los medios suplementados con BSA o SBF-BSA mostraron los valores más bajos de producción de EROs, sin presentar diferencia estadística entre ellos (p>0.05) (figura.1).

Fig 1: Efecto del suplemento proteico sobre la producción de EROs en medio de cultivo. Cada medio de cultivo fue suplementado con suero bovino fetal al 10% (SBF), Albúmina Sérica Bovina 6mg/ml (BSA) y SBF 3% + BSA 6mg/ml (SBF-BSA). Letras diferentes indican diferencia estadística significativa (p<0.05).

Efecto del alfa tocoferol y el ácido ascórbico sobre la producción de EROs en medios de cultivo. Al determinar el efecto antioxidante del alfa tocoferol (AT) y el ácido ascórbico (AA) sobre la producción de EROs, en el medio de cultivo con cada uno de los diferentes suplementos proteicos (SBF, BSA y SBF-BSA), se encontró que cuando el medio fue suplementado con SBF, los antioxidantes AA y AT disminuyeron la producción de ERO (0.844 y 0.879, respectivamente) con respecto al control (p<0.05), mientras que en el medio suplementado con BSA, los antioxidantes no disminuyeron la producción de EROs con respecto al control (p>0.05). Por último, la adición de los antioxidantes al medio suplementado con SBF-BSA disminuyó la producción de EROs (p<0.05), encontrando un valor de pendiente menor (p<0.05) con AA (0.734) que con AT (0.882) (Figura.2). Este último medio de cultivo suplementado con SBF-BSA fue elegido para la evaluación de los antioxidantes sobre la producción intracelular de EROs en los oocitos madurados in vitro y su competencia para el desarrollo embrionario.

Fig. 2: Efecto del ácido ascórbico (AA) y alfa tocoferol (AT) sobre la producción de EROs en el medio de cultivo con diferentes suplementos proteicos (SBF, BSA y SBF-BSA). Letras diferentes indican diferencia estadística significativa (p<0.05).

Efecto de antioxidantes sobre la producción intracelular de EROs en oocitos bovinos madurados in vitro. Al cuantificar la producción de EROs en los oocitos madurados en presencia de ácido ascórbico y alfa tocoferol, se encontró que ambos antioxidantes presentaron menor intensidad de fluorescencia (AA: 0.47, AT: 0.40) con respecto a los oocitos madurados sin antioxidante (p<0.01). Sin embargo, no se encontró diferencia entre los dos antioxidantes (p>0.05) (Figura.3).

Fig. 3: Efecto de los antioxidantes ácido ascórbico (AA) y alfa tocoferol (AT) sobre la producción intracelular de EROs en oocitos bovinos madurados in vitro. Letras diferentes indican diferencia estadística significativa (p<0.01).

Efecto de la maduración de oocitos con antioxidantes sobre la competencia para el desarrollo embrionario. Al evaluar la capacidad de los oocitos madurados con los antioxidantes, para el desarrollo embrionario, se determinó el porcentaje de clivaje a las 48 horas de cultivo, y al día 7 se determinó el porcentaje de blastocistos a partir de oocitos inseminados y a partir de embriones en etapa de clivaje. Con respecto al porcentaje de clivaje, no se encontró efecto de los suplementos antioxidantes (p>0.5), pero al evaluar los demás parámetros de desarrollo embrionario, el AA presentó los porcentajes más altos (p<0.05) de blastocisto, tanto a partir de oocitos inseminados como de embriones clivados(36.19% y 42.91%, respectivamente), mientras que los porcentajes de blastocistos obtenidos con AT (25.91% y 29.63%, respectivamente), fueron similares al control (27.78% y 31.36%, respectivamente) (p>0.05) (Figura.4).

Fig. 4: Competencia para el desarrollo embrionario de oocitos bovinos madurados in vitro en presencia de los antioxidantes alfa tocoferol (AT) y ácido ascórbico (AA). Letras diferentes indican diferencia estadística significativa (p<0.05).

DISCUSIÓN

En las técnicas de reproducción asistida existen varios factores que pueden generar la producción de especies reactivas de oxígeno (EROs), entre los cuales se destacan la concentración de oxígeno, la exposición a la luz, la formulación del medio de cultivo (Combelles et al., 2009; Gupta et al., 2010a) y constituyentes como el aceite mineral (Otsuki et al., 2009). Aunque se ha demostrado la importancia de la EROs en procesos fisiológicos como la señalización celular en gametos y embriones, y su participación en eventos particulares como fertilización y eclosión, el desarrollo embrionario temprano se lleva a cabo a niveles muy bajos de EROs (Covarrubias et al., 2008). Sin embargo, las EROs pueden inducir un envejecimiento del oocito, reflejado en varios aspectos, tales como el tiempo de disolución de la zona pelúcida, alteraciones de los microtúbulos del ooplasma y de los gránulos corticales (Goud et al., 2008). Adicionalmente, la formulación de los medios de cultivo utilizados en los procesos de maduración y fertilización in vitro de oocitos, y desarrollo embrionario, pueden acelerar o disminuir la producción de EROs (Guérin et al., 2001), demostrando que el medio cultivo genera más EROs que el oocito (Martín-Romero et al., 2008), por lo que se han planteado modificaciones en los medios de cultivo que mejoren la calidad de los oocitos y su competencia para el desarrollo embrionario.

Entre los suplementos proteicos más utilizados está el suero bovino fetal (SBF) (Sudano et al., 2011) y la albúmina sérica bovina (BSA) (Ali y Sirard, 2002; Ancioto et al., 2004; Mingoti et al., 2009, 2011), por lo tanto estos suplementos fueron evaluados para determinar su efecto sobre la producción de EROs en medio de maduración del oocito M-199 (TCM 199) por espectrofluorimetría. En el medio suplementado con SBF al 10%, se registró el valor más alto de producción de EROs determinado mediante la pendiente de fluorescencia de H2DCFDA, que los medios suplementados con albúmina (BSA y SBF+BSA) y el control, posiblemente estos niveles de EROs se deben a la presencia de la enzima amino oxidasa en el suero (Göktürk, 2004), que participa en la oxidación de aminas primarias, generando como producto secundario el peróxido de hidrógeno (Stites et al., 2000), lo cual podría asociar el efecto de la concentración del suero sobre el aumento del índice de apoptosis (Sudano et al., 2011), la baja criotolerancia y la alteración del patrón de expresión génica en embriones bovinos producidos in vitro (Rizos et al., 2003).

Por el contrario, la producción más baja de EROs se registró en los medios que contenían suplemento de albúmina (BSA y SBF+BSA (Figura.1), lo que puede relacionarse con las propiedades antioxidantes que posee la albúmina, entre las cuales está el grupo sulfidrilo de la cisteína (Cys 34) que atrapa el radical hidroxilo conduciendo a la formación de ácido sulfénico (RSOH) y la capacidad de unión a iones metálicos (Cu2+ y Fe2+) (Roche et al., 2008), disminuyendo la disponibilidad de estos iones para participar en reacciones generadoras de radicales libres como la reacción de Fenton, en la cual se forma el radical hidroxilo (Guérin et al., 2001).

Aunque los oocitos, espermatozoides y embriones poseen un sistema de defensa antioxidante natural, que les permite protegerse contra las EROs (Du Plessis et al., 2008), se ha demostrado que la fuente principal de la generación de EROs en los sistemas de producción in vitro de embriones, son los medios de cultivo (Martín-Romero, 2008). Esto ha conducido a implementar el uso de antioxidantes, tanto durante la maduración de los oocitos (De Matos et al., 2002; Gupta et al., 2010b) como en el desarrollo embrionario (Ali et al., 2003), por lo tanto en este trabajo se evalúo el efecto del alfa tocoferol y el ácido ascórbico sobre la producción de EROs en el medio de maduración con diferentes suplementos proteicos (SBF, BSA y SBF+BSA), donde se encontró que el AA y AT disminuyeron la producción de EROs en los medios de cultivo con SBF, sin embargo la actividad antioxidante del AA fue mayor que la del AT cuando el medio fue suplementado con SBF-BSA. Mientras que cuando el medio de cultivo fue suplementado con BSA, no se observó un efecto antioxidante significativo al suplementar con estos antioxidantes (AA y AT) (Figura.2).

Este efecto antioxidante dependiente del suplemento proteico pudo ser debido a la alta contribución de EROs por el SBF, mientras que el suplemento BSA al poseer propiedades antioxidantes (Roche et al., 2008), no permite visualizar una disminución de la producción de Eros mediada por AA y AT (Figura.2).

Debido a que el medio suplementado con SBF-BSA posee factores de crecimiento suministrados por el suero y genera una baja producción de EROs (Figura.1), se eligió para la maduración de los oocitos bovinos, a los cuales se les determino la producción intracelular de EROs y su competencia para el desarrollo embrionario.

Como parámetro de calidad del oocito, se implementó la determinación de la producción de ERO intracelular por fluorescencia. De esta manera, los oocitos madurados con los antioxidantes presentaron una menor producción de ERO con respecto al control (Figura.3). La producción de EROs puede estar asociada al estrés oxidativo, al deterioro del citoplasma y envejecimiento del oocito (Goud et al., 2008; Gupta et al., 2010a). Sin embargo, se ha utilizado la tinción con fluoresceína diacetato como un indicador de la viabilidad de los oocitos (Kakkassery et al., 2012), pero estos niveles de fluorescencia varían cuando las células son sometidas a diferentes tipo de estrés como son la concentración de oxígeno o procedimientos de vitrificación (Somfai et al., 2007), lo cual sugiere que la medición de ERO debe estar asociada con la evaluación de otros parámetros fisiológicos para dar una acertada interpretación de la función de las ERO en el sistema celular evaluado.Por consiguiente, se ha tenido en cuenta como el mejor parámetro de la calidad del oocito, su competencia para el desarrollo (Rizos et al., 2002).

Al determinar la competencia para el desarrollo de los oocitos madurados en presencia de los antioxidantes, se encontró que el AA favorece la producción de embriones en etapa de blastocisto (36.19%) comparado con el AT (25.91%) y el control sin antioxidante (27.78%) (Figura.4). Este efecto del ácido ascórbico puede ser debido a su característica hidrosoluble, que facilita su acción antioxidante sobre radicales acuosos, los cuales son la principal fuente en medios de cultivo (Martín-Romero et al., 2008). Este efecto también se descrito al suplementar el medio de cultivo con beta-mercaptoetanol (Feugang et al., 2004), polifenoles de té verde (Wang et al., 2007a, 2007b) y el ácido ascórbico 2-O-a-Glucósido (Tatemoto et al., 2001), los cuales mejoran algunos parámetros de calidad embrionaria como los niveles de glutation, la celularidad y el porcentaje de desarrollo embrionario.

La combinación de factores proteicos como el suero y la albumina, y moléculas antioxidantes como el ácido ascórbico, permite mejorar las condiciones de maduración de los oocitos para la producción in vitro de embriones. Particularmente se ha demostrado el efecto deletéreo de los altos niveles de ERO sobre el desarrollo embrionario y que al suministrar moléculas antioxidantes mejoran las tasas de desarrollo (Covarrubias et al., 2008). Por otro lado, la adición de albúmina y la disminución del suero, se han utilizado durante la maduración in vitro de oocitos (Ancioto et al., 2004) o el cultivo de embriones (Mingoti et al., 2011), mejorando la tasa de producción de blastocistos (Ali y Sirad, 2002; Mingoti et al., 2009), la tolerancia a la crio preservación y mejor calidad reflejada en el patrón de expresión génica (Rizos et al., 2003).

CONCLUSIÓN

Los medios suplementados con albumina y ácido ascórbico presentan la menor producción de EROs en el medio de maduración, disminuyen la producción intracelular de ERO en los oocitos bovinos y mejora su potencial para el desarrollo embrionario, lo cual valida la importancia de la disminución de ERO durante la maduración del oocito para mejorar la producción in vitro de embriones bovinos.

AGRADECIMIENTOS

A la Universidad Nacional de Colombia sede Medellín, los laboratorios Ciencias de los Alimentos y Biotecnología Animal por proporcionar la infraestructura necesaria para la realización de este trabajo.

REFERENCIAS

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Recibido Ago. 19, 2013; Aceptado Oct. 3, 2013; Versión final recibida Dic. 2, 2013