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Revista de biología marina y oceanografía

versión On-line ISSN 0718-1957

Rev. biol. mar. oceanogr. vol.54 no.3 Valparaíso dic. 2019

http://dx.doi.org/10.22370/rbmo.2019.54.3.2007 

Artículo

Diferenciación morfológica y molecular en el complejo Rhodymenia corallina (Rhodymeniaceae, Rhodophyta) de Perú central

Morphological and molecular differentiation in the Rhodymenia corallina complex (Rhodymeniaceae, Rhodophyta) from Central Peru

Melissa Perez-Alania1 

Natalia Arakaki2 

Patricia Gil-Kodaka1 

Florence Tellier3  4 

María Eliana Ramírez5 

1Facultad de Pesquería, Universidad Nacional Agraria La Molina, Avenida La Universidad s/n, La Molina, Lima, Perú

2Banco de Germoplasma de Organismos Acuáticos, Instituto del Mar del Perú, Esquina Gamarra y General Valle s/n, Chucuito, Callao, Perú

3Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias, Universidad Católica de la Santísima Concepción, Alonso de Ribera 2850, Concepción, Chile

4Centro de Investigación en Biodiversidad y Ambientes Sustentables (CIBAS), Universidad Católica de la Santísima Concepción, Alonso de Ribera 2850, Concepción, Chile

5Área Botánica, Museo Nacional de Historia Natural, Parque Quinta Normal, Santiago, Chile

Resumen:

Siete especies de Rhodymenia han sido registradas para la costa de Perú, donde seis de ellas crecen en la costa central: R. corallina, R. howeana, R. multidigitata, R. flabellifolia, R. skottsbergii y R. californica. La más conflictiva taxonómicamente es R. corallina, de la cual se han segregado R. howeana y R. multidigitata, solo en base a caracteres morfológicos externos (forma del estipe y hábito de la fronda). Recolecciones recientes e intensivas de este complejo de especies en la costa central del Perú (9°S hasta 15°S) han permitido reunir varios morfotipos, evidenciando la alta variabilidad morfológica presente, que dificulta el poder diferenciar cada uno de los taxones involucrados. El objetivo del presente trabajo fue esclarecer la taxonomía de este complejo mediante la combinación de datos morfológicos, tanto vegetativos como reproductivos, y de secuencias genéticas utilizando los marcadores rbcL y COI-5P. Especímenes de Callao, localidad tipo de R. howeana y R. multidigitata, fueron analizados molecularmente junto con material de la costa central (Casma hasta Marcona, 9-15°S) y norte de Perú (Piura, 6°S), así como del norte chico de Chile (Coquimbo, 30°S), resolviendo dos grupos de Rhodymenia: un primer grupo filogenético asociado a R. corallina de Chile (Coquimbo, 30°S), distribuido a lo largo de toda la costa central peruana (Casma hasta Marcona, 9-15°S) y un segundo grupo restringido a la costa norte de Perú (Piura a Casma, 6-9°S). Estos grupos se diferencian en caracteres de la morfología externa y reproductiva. Basado en características del soro tetrasporangial, se reconoce a R. howeana para el norte del Perú.

Palabras clave: COI-5P; filogenia; Rhodymenia howeana; Rhodymenia multidigitata; rbcL

Abstract:

Seven species of Rhodymenia have been recorded for the coast of Peru, where six of them grow on the central coast: R. corallina, R. howeana, R. multidigitata, R. flabellifolia, R. skottsbergii and R. californica. The most controversial taxonomically is R. corallina, from which R. howeana and R. multidigitata have been separated, only on the basis of external morphological characters (stipe form and frond habit). Recent and intensive collections of this species complex in the central coast of Peru (9°S to 15°S) have allowed gathering several morphotypes, evidencing high morphological variability, which makes difficult to differentiate each of the taxa involved. The aim of this work was to clarify the taxonomy of this complex by combining morphological data, both vegetative and reproductive, and genetic sequences through the use of rbcL and COI-5P markers. Specimens from Callao, type locality of R. howeana and R. multidigitata, were molecularly analyzed together with material from the central (Casma to Marcona, 9-15°S) and northern coast of Peru (Piura, 6°S), as well as northern Chile (Coquimbo, 30°S), solving two Rhodymenia groups. A first phylogenetic group, associated to R. corallina from Chile (Coquimbo, 30°S), is distributed along the entire Peruvian central coast (Casma to Marcona, 9-15°S), and a second group is restricted to the northern coast of Peru (Piura to Casma, 6-9°S). These groups differ in characters of external and reproductive morphology. Based on features of the tetrasporangial sori, R. howeana is recognized for northern Peru.

Keywords COI-5P; phylogeny; Rhodymenia howeana; Rhodymenia multidigitata; rbcL

Introducción

Rhodymenia corallina (Bory) Greville es una de las siete especies del género registradas para la costa peruana (Guiry & Guiry 2019), distribuida desde Paita (5°S) en el norte, hasta Bahía Independencia (14°S) en el sur (Ramírez & Santelices 1991). Esta especie tiene como localidad tipo Concepción, en Chile central (36°S), y presenta registros en Sudamérica temperada (Perú y Chile, Ramírez & Santelices 1991) y en el Pacífico Tropical Oriental, específicamente en el Indo-Pacífico Oeste (Tanzania, Silva et al. 1996), Indo-Pacífico central (Indonesia y Papúa Nueva Guinea, Verheij & Prud’homme van Reine 1993, Littler & Littler 2003, Atmadja & Prud'homme van Reine 2012), e Indo-Pacífico Este (Polinesia Francesa, N’Yeurt & Payri 2010, Tsuda & Walsh 2013). En la costa central del Perú (9°S hasta 15°S) se registran además las especies Rhodymenia multidigitata E. Y. Dawson, Acleto & Foldvik, endémica de Perú, Rhodymenia howeana E. Y. Dawson y Rhodymenia skottsbergii E. Y. Dawson, presentes en Perú y Chile, Rhodymenia flabellifolia (Bory) Montagne, con distribución desde Ecuador hasta Chile, y Rhodymenia californica Kylin, distribuida en las costas del Pacífico Norte y en Sudamérica desde Ecuador hasta Chile (Taylor 1945, Ramírez & Santelices 1991, Silva & Chacana 2005). La especie Rhodymenia peruviana J. Agardh fue descrita en 1852 sin especificar una localidad tipo (“al sur de Perú”) (Howe 1914).

Bory de Saint-Vincent (1828) describió Rhodymenia corallina (como Sphaerococcus corallinus), en base a especímenes recolectados en Concepción, Chile. Los especímenes muestran un estipe bien desarrollado y ramificado, con frondas planas y dicótomas, linealmente elongadas y ápices obtusos. Trabajos posteriores (Howe 1914, Dawson 1941, Dawson et al. 1964, Etcheverry 1986) complementan la caracterización de esta especie, describiendo la morfología de sus estructuras reproductivas (soro tetrasporangial y cistocarpo).

La forma y tamaño del estipe, así como el patrón de ramificación y forma de los ápices en las especies de Rhodymenia han sido utilizados por Dawson (1941) y Dawson et al. (1964) como caracteres diagnósticos para la delimitación de las especies de este género en Perú, indicando que R. corallina forma parte del “complejo morfológico de especies de Rhodymenia en el área de la costa central del Perú, junto con R. flabellifolia, R. howeana y R. multidigitata”. Rhodymenia flabellifolia es una especie claramente reconocida y separada del resto de especies del complejo por presentar un talo arbustivo, con frondas insertas en ejes erectos semi-rígidos que se ramifican simpodialmente (Dawson 1941, Dawson et al. 1964). En consecuencia, el complejo morfológico involucraría sólo a tres especies. R. multidigitata y R. howeana han sido descritas en base a ejemplares de Perú, R. multidigitata con ejemplares de Callao (12°S, Perú central) y el caso particular de R. howeana descrita en base a 2 recolectas, con 2 ejemplares de Callao (12°S, Perú central) y un ejemplar de Piura (6°S, norte del Perú).

Las especies de Rhodymenia presentan una amplia variabilidad en el hábito y grosor del talo (Hawkes & Scagel 1986, Womersley 1996, Filloramo & Saunders 2016a), por lo cual la naturaleza del estipe y características morfológicas de estructuras reproductivas, como la morfología de los soros, su ubicación respecto al ápice y grado de modificación de los tetrasporangios en la corteza, han sido importantes en la clasificación de especies de este género (Agardh 1876, Dawson 1941, Guiry 1977). De esta forma, la ausencia de estas estructuras de importancia taxonómica en muestras recolectadas, la plasticidad del hábito y la convergencia evolutiva dificultan la determinación de especies en el complejo de especies R. corallina. El uso de herramientas moleculares integrado a la taxonomía tradicional ha permitido resolver la identidad de algunos taxones al delimitarlos en base a diferencias en las secuencias genéticas y un análisis morfológico (Cianciola et al. 2010, Saunders & McDonald 2010, Filloramo & Saunders 2016a, Filloramo & Saunders 2018).

Estudios de diversidad alfa en Rhodymenia y la familia Rhodymeniaceae han demostrado la utilidad del uso de marcadores moleculares en la delimitación de especies dentro de complejos morfológicos que resultan de la monotonía morfológica o la plasticidad fenotípica, especies crípticas, o especies ampliamente distribuidas (Ballantine et al. 2010, Saunders & McDonald 2010, Schneider et al. 2012, Filloramo & Saunders 2016a, 2018). A pesar de que no existen en la literatura trabajos filogenéticos de Rhodymenia de Perú, R. corallina ha sido representada con 2 secuencias rbcL incluidas en el alineamiento de trabajos recientes, ambas obtenidas de especímenes recolectados en Coquimbo, Chile (Gavio & Fredericq 2003, Schmidt et al. 2016). También, una secuencia COI-5P de R. corallina de Chile (Chiloé) ha sido generada para un estudio sobre diversidad del género Rhodymenia y su distribución en las costas australianas (Filloramo & Saunders 2016a).

La clasificación de los especímenes del complejo morfológico Rhodymenia corallina de Perú se dificulta por la presencia de morfologías intermedias entre las formas reconocidas y la ausencia de caracteres estables de importancia taxonómica que ayuden en su diferenciación. En un esfuerzo por generar información filogenética y morfológica acerca del complejo morfológico R. corallina de Perú central, se analizaron muestras procedentes de localidades de la costa central con el objetivo de diferenciar la especie R. corallina de las especies R. howeana y R. multidigitata, mediante análisis morfológico y de secuencias rbcL y COI-5P.

Materiales y métodos

Recolección de material

En la costa central del Perú, entre Casma (Ancash, 9°S) y Marcona (Ica, 15°S), se recolectaron 47 especímenes de Rhodymenia, provenientes principalmente de material varado o recolectados mediante buceo SCUBA, representando una variedad de morfotipos del complejo. Para tener una mejor representatividad de la diversidad genética del complejo morfológico R. corallina, se consideraron también 4 especímenes del norte chico de Chile (Coquimbo, 30°S, a 770 km al norte de la localidad tipo de R. corallina) y un ejemplar del norte de Perú (Piura, 6°S), específicamente de la Isla Lobos de Tierra, localidad de recolección de uno de los tres especímenes tipo de R. howeana (Fig. 1, Tabla 1). En total, 52 especímenes fueron prensados en hojas de herbario y fragmentos de talo de cada espécimen fueron conservados en una solución de formol al 4% en agua de mar para el estudio de la morfología. Estas muestras, herbario y líquidas, fueron depositadas en la Colección Científica del Instituto del Mar del Perú (IMARPE), Perú.

Figura 1 Mapa de la costa de Perú y Chile mostrando las ecorregiones marinas y localidades de recolección de los especímenes de Rhodymenia estudiados / Map of Peruvian and Chilean coast showing marine ecoregions and collection sites of Rhodymenia specimens in study  

Tabla 1 Información de los especímenes de Rhodymenia recolectados y utilizados en el análisis molecular: información de recolección, código de espécimen, número de acceso GenBank de las secuencias obtenidas, especie inferida en base a las filogenias y referencia a figuras de ilustración de la morfología / Information about Rhodymenia specimens collected and used in molecular analyses: information on collection, specimen code, GenBank accession numbers for the generated sequences, species inferred on the basis of phylogenies and reference to morphology illustration figures 

Análisis molecular

Para el análisis molecular se consideraron el ejemplar de Perú norte, los 4 ejemplares de Chile y 22 ejemplares de Perú central que representaban diferentes morfologías (Tabla 1).

A partir de trozos de talo de material herborizado, se extrajo ADN utilizando el protocolo CTAB modificado de Soltis Lab1 (2002) (basado en Doyle & Doyle 1987, Cullings 1992) y el kit d1e extracción GF-1 Plant DNA Extraction (Vivantis™). Para los 27 especímenes analizados, las secuencias rbcL fueron amplificadas de acuerdo a Schmidt et al. (2016), empleando los iniciadores F15, F57, F577, R916, R753, R1150 y R1381 (Hommersand et al. 1994, Gabriel et al. 2016). Adicionalmente, para 8 especímenes de Perú central, se consideró la región COI-5P como marcador secundario para validar los resultados obtenidos con rbcL. La amplificación de esta región se realizó siguiendo el programa para PCR de Filloramo & Saunders (2016a ) y se utilizaron los iniciadores GazF1, GazR1, GazF2 (Saunders 2005) y R686 (Sherwood et al. 2010). Las muestras fueron purificadas y secuenciadas por Macrogen Inc. (Corea del Sur).

Las secuencias obtenidas fueron editadas manualmente con el programa CodonCode Aligner 7.0. (CodonCode Corporation). Adicionalmente, se incluyeron secuencias disponibles en GenBank para el género Rhodymenia y la familia Rhodymeniaceae (Filloramo & Saunders 2016b ) como grupo interno, y de la familia Fryeellaceae como grupo externo (Saunders & McDonald 2010) ( Anexo Tabla S1 ). El compilado de secuencias fue alineado utilizando el algoritmo MUSCLE en MEGA7 v.7.0.26 (Kumar et al. 2016) y las distancias genéticas fueron calculadas en MEGA7 como distancias P no corregidas.

Las secuencias de rbcL y COI-5P fueron analizadas de forma independiente con los métodos de Máxima Verosimilitud (MV) e Inferencia Bayesiana (IB). El análisis de Máxima Verosimilitud fue implementado en RAxML v.8.2.X (Stamatakis 2014), con un bootstrap de 1000 réplicas y utilizando la interfaz gráfica de usuario raxmlGUI v.1.5 (Silvestro & Michalak 2012). Se consideró el modelo GTR+GAMMA+I, seleccionado en jModelTest 2 (Darriba et al. 2012) utilizando el Criterio de Información de Akaike (AIC). El análisis filogenético de Inferencia Bayesiana fue realizado con el programa MrBayes v.3.2.6 (Ronquist et al. 2012), con el modelo GTR+G+I, seleccionado en jModelTest 2, sin partición de codón. El análisis consistió en 2 procesos independientes, cada uno con 3 cadenas templadas y una cadena fría, 10 millones de generaciones y muestreos cada 1000 generaciones. La convergencia de corridas fue evaluada con el programa Tracer v.1.6.0 (Rambaut et al. 2014), descartando el primer 25% de los árboles de cada proceso como periodo de calentamiento o burn-in.

Análisis morfológico

Con el propósito de comparar los especímenes recolectados para el presente trabajo con aquellos descritos previamente por taxónomos, se revisaron los ejemplares del complejo morfológico que habían sido depositados en el Herbario del Museo de Historia Natural, Lima (USM) y en el Museo Nacional de Historia Natural de Santiago, Chile (SGO) (Thiers 2017). En Lima, 2 ejemplares se encuentran registrados como Rhodymenia corallina y 6 como R. howeana. Siete de los 8 especímenes han sido recolectados en los alrededores de Lima (Ancón, Callao, Pucusana; 11-12°S), con excepción de un espécimen de R. corallina procedente del norte de Perú (Piura, 5-7°S). En Santiago, los 11 especímenes revisados han sido registrados como R. corallina y recolectados entre la frontera de Chile con Perú (18°S) y la localidad tipo, Concepción (36°S).

El hábito de los 52 especímenes herborizados para el presente trabajo (47 de Perú central, 1 de Perú norte y 4 de Chile) fue registrado con un escáner y fotografiado con un estereoscopio Zeiss® Discovery V.12.

Morfología interna

Para el análisis de la morfología interna de las estructuras vegetativas y reproductivas, se realizaron cortes longitudinales en 18 ejemplares de Perú central, utilizando para ello una hoja de afeitar de acero inoxidable, bajo estereoscopio. Segmentos del talo fueron teñidos con azul de anilina al 1%, enjuagados con HCl al 1% y montados en jarabe de maíz KARO al 50%. Las observaciones morfológicas fueron registradas con un capturador de imágenes Leica® DFC290 HD acoplado a un microscopio Leica® DM1000 LED.

Los caracteres morfológicos internos considerados fueron: grosor del talo en los segmentos medios, número de capas de células de la médula y corteza y el grado de modificación de la corteza en los soros tetrasporangiales.

Morfología externa (hábito)

En la evaluación de los caracteres morfológicos externos se analizaron los 22 ejemplares de Perú central también incluidos en el análisis molecular, y 4 ejemplares, recolectados en Casma. Estos últimos fueron agregados para contar con una mayor representatividad de la diversidad morfológica en una de las especies encontradas.

En una primera etapa, se evaluaron los siguientes caracteres de la morfología externa: tipo de estructura de fijación, forma y tamaño del estipe, tipo de ramificación, textura de la fronda, longitud de fronda, número de dicotomías, longitud y ancho del primer segmento (a la primera dicotomía), longitud y ancho de los segmentos medios y finales, crecimiento de proliferaciones, forma de los ápices, ubicación y forma externa de las estructuras reproductivas, principalmente de los soros tetrasporangiales.

En una segunda etapa, y considerando los mismos ejemplares, se realizó un análisis exclusivamente cuantitativo considerando las siguientes variables: longitud de la fronda (Lf), ancho de la fronda (Af), longitud del estipe (Le), ancho del estipe (Ae), longitud del primer segmento (Lps), ancho del primer segmento (Aps), longitud de los segmentos medios (Lsm), ancho de los segmentos medios (Asm), y las razones Lf/Af, Lps/Aps, Lsm/Asm y Lf/Le. Para comparar los caracteres entre las 2 especies encontradas en el análisis filogenético (Rhodymenia corallina y R. howeana) se utilizó la prueba de Kruskal-Wallis en IBM SPSS Statistics versión 22 (IBM, Armonk, New York).

Resultados

Análisis molecular

rbcL

Todas las secuencias obtenidas para rbcL están depositadas en GenBank con los números de acceso MN092232 a MN092258 (Tabla 1). El alineamiento utilizado en el análisis filogenético de la familia Rhodymeniaceae consistió en un total de 58 secuencias de rbcL (1004 pares de bases, pb), 25 de las cuales fueron generadas en este estudio (Tabla 1). Las secuencias MN092236 y MN092237 fueron excluidas del análisis filogenético por tener un tamaño inferior (972 y 910 pb, respectivamente). Estas secuencias son idénticas a MN092238.

La filogenia obtenida con el análisis de Inferencia Bayesiana tiene una topología similar a la obtenida con el análisis de Máxima Verosimilitud, a excepción de la posición de Rhodymenia delicatula, la cual se describe más adelante. En la topología resultante para ambos análisis, Rhodymenia y Cordylecladia conforman un clado fuertemente soportado (bootstrap para el análisis MV= 90%, y PPB= 0,98 de probabilidad posterior bayesiana), hermano a Botryocladia, con el cual se agrupan con bajo soporte (MV < 50%, PPB= 0,54; Fig. 2).

Figura 2 Árbol filogenético inferido en RAxML a partir de secuencias rbcL de Rhodymenia de la costa central del Perú y de secuencias disponibles en GenBank del género Rhodymenia y de otros géneros de la familia Rhodymeniaceae, así como 3 taxones de la familia Fryeellaceae como grupo externo. Las secuencias obtenidas en el presente estudio se indican con color, las secuencias de R. corallina disponibles en GenBank en formato negrita. Los números sobre las ramas indican los valores de bootstrap (ML) y debajo de las ramas, la probabilidad posterior Bayesiana (PPB). Los asteriscos (*) denotan soporte total (100% o 1,00); no se incluyen soportes con valores por debajo del 50% para ML ni por debajo de 0,5 para PPB / Phylogenetic tree inferred in RAxML from rbcL sequences of Rhodymenia from the central coast of Peru and sequences available in GenBank for the Rhodymenia genus and for other genera of the Rhodymeniaceae family, as well as 3 taxa of the Fryeellaceae family as outgroup. Colored letters indicate the sequences obtained in the present study; sequences of R. corallina from GenBank are in bold. The numbers over the branches indicate the bootstrap value (ML) and, below the branches, the posterior Bayesian probability (PPB). Asterisks (*) denote total support (100% or 1.00); supports with values below 50% for ML and below 0.5 for PPB are not included 

Las especies de Rhodymenia forman un grupo con bajo soporte (MV < 50%, PPB= 0,61), donde los valores de divergencia interespecífica varían entre 1,5 y 9% (Tabla 2). R. pseudopalmata y R. divaricata forman un clado (MV= 89%, PPB= 1,00) posicionado en la base del género. Las otras especies de Rhodymenia se resuelven en 2 grupos y el taxón R. delicatula. La posición de este último no queda bien resuelta en la filogenia obtenida con MV, mientras que se encuentra separado de los 2 grupos en la filogenia obtenida con IB. Un grupo bien soportado está conformado por R. bamfieldensis, R. rizoides, R. californica, R. intricata y R. pacifica, todas distribuidas en el Pacífico Norte (EE.UU., Canadá y Japón). El otro grupo, medianamente soportado (MV= 56%; PPB= 0,93), incluye R. corallina, R. capensis, R. obtusa, R. stenoglossa y R. skottsbergii, distribuidas en el Pacífico Sur y el Atlántico Sur (Perú, Chile, Australia y Sudáfrica), así como las secuencias de Rhodymenia generadas en el presente trabajo (Fig. 2).

Tabla 2 Distancias P no corregidas (porcentaje) en secuencias rbcL entre especies de Rhodymenia y Cordylecladia incluidas en este estudio. Adicionalmente, se indica el rango de distancias intraespecíficas para R. corallina y R. howeana / Uncorrected P-distances (percentage) in rbcL sequences among Rhodymenia and Cordylecladia species included in this study. In addition, the range of intraspecific distances for R. corallina and R. howeana is indicated 

Las secuencias de Rhodymenia de Perú y las secuencias de R. corallina de Chile se agrupan en un clado fuertemente soportado (MV= 100%, PPB= 1,00), subdividido en 2 grupos monofiléticos con altos soportes (MV= 98 y 100%; PPB= 1,00 y 0,98), y separados por una distancia P media de 1,6% (Tabla 2). Esto sugiere la presencia de 2 especies distintas (véase Discusión), que denominaremos R. corallina y R. howeana, por la presencia de las 2 secuencias de GenBank registradas como R. corallina de Chile en uno de los grupos y la presencia de la secuencia obtenida de Piura (la localidad tipo de uno de los especímenes tipo de R. howeana) en el otro grupo.

El grupo monofilético correspondiente a Rhodymenia corallina incluye 16 secuencias de ejemplares de Perú central (Casma a Marcona, 9-15°S) y 6 secuencias de Chile, tanto las generadas en este trabajo como las procedentes de GenBank, todas de ejemplares recolectados en Coquimbo (30°S). El grupo presenta entre 0 y 0,5% de variación genética intraespecífica y agrupa seis haplotipos, tres de ellos registrados únicamente en Perú, 2 en Chile y uno compartido entre Marcona (Perú) y Coquimbo (Chile).

En Rhodymenia howeana se encuentran agrupadas la secuencia del único ejemplar de Piura (6°S) con 6 de las 7 secuencias obtenidas para ejemplares recolectados en Casma (9°S). Nótese que MN092236 y MN092237 no están incluidos en el análisis filogenético, pero son idénticos a MN092238. Este grupo presenta entre 0 y 0,1% de variación genética intraespecífica, con 2 haplotipos, uno presente en Piura y Casma y el otro registrado en un único individuo de Casma.

COI-5P

Todas las secuencias obtenidas para COI-5P están depositadas en GenBank con los números de acceso MN092259 a MN092266 (Tabla 1). El alineamiento de estas secuencias consistió en 562 pb, incluyendo 49 secuencias, 8 de las cuales han sido generadas en este estudio y corresponden a especímenes previamente asignados a Rhodymenia corallina o R. howeana con el marcador cloroplastidial. La filogenia obtenida con el análisis de IB resuelve las mismas agrupaciones que en la topología obtenida con el análisis de MV, pero no resuelve las relaciones entre aquellas secuencias agrupadas con bajo soporte con el análisis de MV, como por ejemplo entre géneros de Rhodymeniaceae y entre subgrupos de Rhodymenia del Pacífico y Atlántico Sur (Fig. 3).

Figura 3 Árbol filogenético inferido en RAxML a partir de secuencias COI-5P de Rhodymenia de la costa central del Perú y de secuencias disponibles en GenBank del género Rhodymenia y de otros géneros de la familia Rhodymeniaceae, así como 3 taxones de la familia Fryeellaceae como grupo externo. Las secuencias obtenidas en el presente estudio se indican con color, las secuencias de R. corallina disponibles en GenBank en formato negrita. Los números sobre las ramas indican los valores de bootstrap (ML) y, debajo de las ramas, la probabilidad posterior Bayesiana (PPB); los asteriscos (*) denotan soporte total (100% o 1,00); no se incluyen soportes con valores por debajo del 50% para ML ni por debajo de 0,5 para PPB / Phylogenetic tree inferred in RAxML from COI-5P sequences of Rhodymenia from the central coast of Peru and sequences available in GenBank for the Rhodymenia genus, and for other genera of the Rhodymeniaceae family, as well as 3 taxa of the Fryeellaceae family as outgroup. Colored letters indicate the sequences obtained in the present study; sequences of R. corallina available in GenBank are in bold. The numbers over the branches indicate the bootstrap value (ML) and below the branches, the posterior Bayesian probability (PPB); the asterisks (*) denote total support (100% or 1.00); supports with values below 50% for ML and below 0.5 for PPB are not included 

Ambas filogenias muestran un agrupamiento bien soportado de Rhodymeniaceae (MV= 100%, PPB= 1,00), donde Rhodymenia forma un clado claramente soportado (MV= 100%, PPB= 1,00; Fig. 3). También se resuelve el clado que representa a Botryocladia (MV= 96%, PPB= 1,00), mientras que en un grupo medianamente soportado (ML= 53%, PPB= 0,93) se reúnen el resto de géneros de Rhodymeniaceae: Halichrysis, Halopeltis, Chamaebotrys, Coelarthrum, Sparlingia, Irvinea, Drouetia, Chrysymenia, Microphyllum, Cephalocystis y Leptosomia (Fig. 3).

Las especies de Rhodymenia presentan un rango de divergencia interespecífica entre 1,3 y 15%, dividiéndose en 2 grupos. El primer grupo está formado por especies de Australia, Nueva Zelanda, Irlanda y Francia, a saber R. holmesii, R. gladiata, R. leptophylla, R. insularis, R. norfolkensis, R. lociperonica, R. novazelandica, R. compressa y R. delicatula (Fig. 3). En el segundo grupo se distinguen 2 subgrupos y el taxón correspondiente a la especie tipo R. pseudopalmata. Uno de los subgrupos está conformado por especies del Pacífico Norte (EE.UU., Canadá y Corea del Sur): R. rhizoides, R. bamfieldensis, R. californica, R. intricata y R. pacifica. El otro subgrupo incluye especies del Pacífico sur y del Atlántico Sur (Australia, Sudáfrica, Perú y Chile): R. womersleyi, R. novaehollandica, R. prolificans, R. stenoglossa, R. contortuplicata, R. obtusa y R. wilsonis, además de R. corallina y las secuencias generadas en este estudio (Fig. 3).

Los tres especímenes asignados a Rhodymenia howeana en base al marcador rbcL presentan secuencias COI-5P idénticas (haplotipo único). En un grupo hermano y bien soportado (MV= 99%, PPB= 0,92), se encuentran los cinco especímenes asignados previamente a R. corallina, por lo que el análisis de secuencias COI-5P permite corroborar los resultados obtenidos con el marcador rbcL para los especímenes de Perú (Fig. 3), diferenciando R. howeana y R. corallina de Perú. Estas están separadas por una distancia P media de 2,9% (Tabla 3), donde R. corallina incluye 2 haplotipos, con 1,1% de divergencia intraespecífica. Cabe destacar que la única secuencia de R. corallina disponible en GenBank y procedente de Chile no se asocia con el clado R. corallina de Perú, siendo separados por una distancia P media de 8,6%.

Tabla 3 Distancias P no corregidas (porcentajes) en secuencias COI-5P entre especies de Rhodymenia incluidas en este estudio. Adicionalmente, se indica el rango de distancias intraespecíficas para R. corallina y R. howeana / Uncorrected P-distances (percentage) in COI-5P sequences among Rhodymenia species included in this study 

Análisis morfológico

De los 26 ejemplares de Perú central para los cuales se midieron caracteres morfológicos externos, 16 fueron asignados a Rhodymenia corallina y 6 asignados a R. howeana, en base al análisis filogenético. Los 4 ejemplares adicionales, procedentes de Casma, corresponden a un ejemplar de R. corallina y a 3 de R. howeana. La caracterización morfológica interna se realizó en 15 ejemplares de R. corallina y 3 de R. howeana de la costa central de Perú. Adicionalmente, se midieron caracteres externos de los 4 ejemplares de Coquimbo. Las características morfológicas vegetativas y reproductivas de ambas especies se presentan en la Tabla 4, donde también se compara con lo descrito en la literatura para R. multidigitata, R. howeana y R. corallina, de acuerdo a Howe (1914), Dawson (1941) y Dawson et al. (1964).

Tabla 4 Comparación de caracteres morfológicos externos, internos, vegetativos y reproductivos descritos en la literatura para Rhodymenia corallina, R. howeana y R. multidigitata, y hallados en el presente estudio para R. corallina y R. howeana / Comparative analysis of external, internal, vegetative and reproductive morphological characters described in literature for Rhodymenia corallina, R. howeana y R. multidigitata, and found in the present study for R. corallina and R. howeana 

Rhodymenia corallina presenta una amplia variabilidad morfológica (Figs. 4, 5 y 6) a diferencia de R. howeana (Fig. 7, Tabla 4). Los especímenes de R. howeana presentan similitud para la mayoría de los caracteres morfológicos, con valores incluidos en el rango de medidas observado para especímenes de R. corallina, como la longitud del talo y el tamaño del estipe (Tabla 4). Adicionalmente, los especímenes de R. howeana comparten características morfológicas con algunos especímenes de R. corallina respecto a sus estructuras de fijación con disco simple y eventual formación de estolones, forma del estipe, ramificación en un solo plano de forma dicótoma a subdicótoma, crecimiento de nuevas láminas o proliferaciones desde las áreas dañadas (Figs. 4, 7B-C), forma de los ápices (Figs. 5, 7D, 7F), estructuras vegetativas internas, y características de los ejemplares femeninos (Figs. 6C, 6D, 7F-G; Tabla 4).

Figura 4 Hábito de los especímenes del clado Rhodymenia corallina de la costa central del Perú. A) Marcona (BG-244, vegetativo). B) Marcona (BG-218, vegetativo). C) Paracas (BG-278, femenino). D) Pucusana (BG-246, tetrasporofito). E) Ancón (BG-237, femenino). F) Casma (BG-901, tetrasporofito). G) Callao (BG-256, tetrasporofito). H) Callao (BG-920, vegetativo). I) Callao (BG-259, vegetativo). Barras de escala= 5 cm / Habit of Rhodymenia corallina specimens from the central coast of Peru. A) Marcona (BG-244, vegetative). B) Marcona (BG-218, vegetative). C) Paracas (BG-278, female). D) Pucusana (BG-246, tetrasporophyte). E) Ancón (BG-237, female). F) Casma (BG-901, tetrasporophyte). G) Callao (BG-256, tetrasporophyte). H) Callao (BG-920, vegetative). I) Callao (BG-259, vegetative). Scale bars= 5 cm 

Figura 5 Variación morfológica de ápices y del soro tetrasporangial de Rhodymenia corallina de la costa central del Perú. A) Paracas (BG-276, tetrasporofito). B) Casma (BG-901, tetrasporofito). C) Callao (BG-256, tetrasporofito). D) Marcona (BG-218, vegetativo). E) Callao (BG-920, vegetativo). F) Pucusana (BG-246, tetrasporofito). Barras de escala= 2 mm / Morphological variation of apices and tetrasporangial sori of R. corallina from the central coast of Peru. A) Paracas (BG-276, tetrasporophyte). B) Casma (BG-901, tetrasporophyte). C) Callao (BG-256, tetrasporophyte). D) Marcona (BG-218, vegetative). E) Callao (BG-920, vegetative). F) Pucusana (BG-246, tetrasporophyte). Scale bars= 2 mm 

Figura 6 Morfología externa e interna de los soros tetrasporangiales y cistocarpos de Rhodymenia corallina de la costa central del Perú. A) Soros tetrasporangiales (s) sin bordes definidos, ubicados en el área subapical (BG-277). B) Sección transversal de un soro tetrasporangial con tetrasporangios (t) insertos en la corteza, sin generar modificación (BG-256), indicando la corteza (c) y médula (m). C) Cistocarpos jóvenes dispersos en el ápice (BG-278). D) Sección transversal de un cistocarpo maduro (BG-245). Barras de escala: A= 1 mm; B= 100 µm; C= 2 mm; D= 200 µm / External and internal morphology of the tetrasporangial sori and cystocarps of Rhodymenia corallina from the central coast of Peru. A) Tetrasporangial sori (s) without defined borders, located at the subapical area (BG-277). B) Cross section of tetrasporangial sori with tetrasporangia (t) inserted in the cortex, without generating modification (BG-256), with indication of the cortex (c) and marrow (m). C) Young cystocarps scattered at the apex (BG-278). D) Cross section of a mature cystocarp (BG-245). Scale bars: A= 1 mm; B= 100 μm; C= 2 mm; D= 200 μm 

Figura 7 Hábito, morfología externa e interna de los cistocarpos y soros tetrasporangiales de Rhodymenia howeana. A) Piura, tipo tetrasporofito de Rhodymenia howeana (UC 199622). B) Casma (BG-250, tetrasporofito). C) Casma (BG-300, femenino). D) Soros tetrasporangiales (s) con contorno definido ubicados cerca al ápice y marca de soro después de la esporulación (flecha) (BG-249, Casma). E) Sección longitudinal de un soro mostrando corteza (c), médula (m) y tetrasporangios cruciados insertos en la corteza (t) (BG-250, Casma). F) Cistocarpos sobre la fronda (BG-300, Casma). G) Sección transversal de un cistocarpo maduro (BG-300, Casma). Barras de escala: A, B, C= 5 cm; D= 1 mm; E= 100 µm; F= 2 mm; G= 200 µm / Habit, external and internal morphology of the tetrasporangial cystocarps and sori of Rhodymenia howeana. A) Piura, tetrasporic type of Rhodymenia howeana (UC 199622). B) Casma (BG-250, tetrasporophyte). C) Casma (BG-300, female). D) Tetrasporangial sori (s) with defined contour located near the apex and mark of sori after sporulation (arrow) (BG-249, Casma). E) Longitudinal section of a sorus showing bark (c), marrow (m) and cruciately divided tetrasporangia insert in the bark (t) (BG-250, Casma). F) Cystocarps on the frond (BG-300, Casma). G) Cross section of a mature cystocarp (BG-300, Casma). Scale bars: A, B, C= 5 cm; D= 1 mm; E= 100 μm; F= 2 mm; G= 200 μm  

Rhodymenia corallina se diferencia de R. howeana principalmente por la disposición de los tetrasporangios. En R. corallina los tetrasporangios están agrupados en soros irregulares y sin bordes definidos (Tabla 4; Figs. 5A-C y 5F), mientras que en R. howeana se encuentran agregados en soros redondeados o en forma de media luna, con bordes definidos, ubicados en la parte apical o subapical, generando una ligera modificación en la corteza (huella de soro) (Figs. 7D-E).

El análisis cuantitativo de la morfología externa confirma una sobreposición de la distribución de valores entre las especies, donde los valores para Rhodymenia howeana generalmente están incluidos en el rango de valores observados para R. corallina (Tabla 4, Fig. 8). No obstante, R. corallina y R. howeana muestran diferencias altamente significativas (prueba de Kruskal-Wallis; P ≤ 0,001 y P ≤ 0,01, Anexo Tabla S2) en la distribución de las siguientes variables: ancho del primer segmento (Aps), ancho de segmentos medios (Asm), longitud del primer segmento/ancho del primer segmento (Lps/Aps) y longitud de segmentos medios/ancho de segmentos medios (Lsm/Asm) (Anexo Tabla S2, Fig. 8). Para el resto de las variables (Lf, Af, Le, Ae, Lps, Lsm, Lf/Af y Lf/Le), las distribuciones de medidas para R. corallina y R. howeana se sobreponen sin diferencia significativa (Fig. 8).

Figura 8 Diagramas de cajas de la distribución de medidas de 12 variables morfológicas externas para Rhodymenia corallina y R. howeana mostrando diferencias altamente significativas para 4 variables (prueba de Kruskal-Wallis, P ≤ 0,01). Ver Anexo Tabla S2 para los resultados de la prueba de Kruskal-Wallis por variable. Diferencias altamente significativas (***= P ≤ 0,001 y **= P ≤ 0,01); diferencias significativas (*= P ≤ 0,05); n.s.= sin diferencias significativas (P > 0,05). Longitud de fronda (Lf), Ancho de fronda (Af), Longitud de fronda/Ancho de fronda (Lf/Af), Longitud del primer segmento (Lps), Ancho del primer segmento (Aps), Longitud del primer segmento/Ancho del primer segmento (Lps/Aps), Longitud de segmentos medios (Lsm), Ancho de segmentos medios (Asm), Longitud de segmentos medios/Ancho de segmentos medios (Lsm/Asm), Longitud del estipe (Le) y Longitud de fronda/Longitud de estipe (Lf/Le) / Box-plot diagrams of the distribution of 12 external morphological variables for Rhodymenia corallina and R. howeana showing highly significant differences for 4 variables (Kruskal-Wallis test, P ≤ 0.01). See Annex Table S2 for the results of the Kruskal-Wallis test by variable. Highly significant differences (***= P ≤ 0.001 and **= P ≤ 0.01); significant differences (*= P ≤ 0.05); n.s.= no significant differences (P > 0.05). Frond length (Lf), Frond width (Af), Frond length/Frond width (Lf/Af), First segment length (Lps), First segment width (Aps), First segment length/First segment width (Lps/Aps), Middle segment length (Lsm), Middle segment width (Asm), Middle segment length/Middle segment width (Lsm/Asm), Stipe length (Le) and Frond length/Stipe length (Lf/Le)  

En base a la morfología del hábito y de los soros tetrasporangiales, los especímenes de herbario revisados en las colecciones de los Museos de Historia Natural de Lima y Santiago corresponderían a estas 2 especies. Los herbarios de Lima incluirían 1 ejemplar de Rhodymenia howeana del norte de Perú (Piura), y 6 ejemplares de R. corallina recolectados en Lima (3 de Ancón, 2 de Callao y 2 de Chorrillos). Los herbarios de Santiago incluirían 11 ejemplares de R. corallina procedentes de Arica (3), Antofagasta (1), Coquimbo (5), Valparaíso (1) y Concepción (1).

Discusión

El estudio del complejo Rhodymenia corallina, tal como ha sido señalado, incluyó el análisis combinado de datos tanto de la morfología como de las secuencias genéticas obtenidas con los marcadores rbcL y COI-5P. Los resultados obtenidos indican que molecularmente este complejo conforma 2 grupos, uno asignado a R. corallina y el otro asignado a R. howeana.

Los especímenes recolectados para el presente estudio, con morfologías del complejo Rhodymenia corallina (R. multidigitata, R. howeana y R. corallina), conformaron 2 grupos monofiléticos hermanos bien soportados en ambas filogenias realizadas (rbcL y COI-5P). La entidad R. corallina conforma un único grupo monofilético en la construcción basada en rbcL, incluyendo secuencias de especímenes de todas las localidades muestreadas en Perú central (9-15°S), así como las secuencias de Coquimbo, Chile (30°S, a 770 km de la localidad tipo Concepción, Chile) recolectadas para este estudio como por estudios anteriores. Todos los especímenes asignados a R. corallina en la base del marcador cloroplastidial conforman un grupo monofilético en la filogenia basada en COI-5P, mostrando congruencia entre marcadores. No obstante, este grupo diverge por 8,6% de la única secuencia disponible en GenBank para R. corallina, correspondiente a un espécimen de Chiloé, Chile (42°S). No hay información disponible respecto a la morfología de este espécimen, por lo cual no se puede descartar un problema de identificación taxonómica o la presencia de especies crípticas. Se hace necesario completar el estudio con un muestreo abarcando el sur de la distribución de R. corallina e incluyendo los 2 marcadores moleculares.

La segunda entidad encontrada en el complejo morfológico Rhodymenia corallina, de forma consistente entre los 2 marcadores moleculares, es asignada a R. howeana. La identificación se basa en la secuencia de un espécimen recolectado en una de las localidades tipo señaladas para esta especie (Lobos de Tierra, Piura, 6°S), y en la presencia de caracteres morfológicos similares a la ilustración del espécimen tipo tetrasporofito de R. howeana (Dawson 1941), con soros redondeados delimitados y marcas oscuras visibles en los segmentos medios.

La divergencia entre Rhodymenia corallina y R. howeana para el marcador rbcL (1,6%, en promedio) es muy superior a la variación observada a nivel intraespecífico (0-0,5%), tanto en R. corallina como en R. howeana. Adicionalmente, la divergencia interespecífica cabe dentro del rango de divergencia observada entre las otras especies incluidas en nuestras reconstrucciones filogenéticas (1,5-9,0%). De forma similar, para el marcador COI-5P la distancia interespecífica entre estas 2 especies (2,9%) es superior a la máxima variación intraespecífica observada en R. corallina (1,1%), la cual presenta un alto valor comparado con los valores típicos de variación intraespecífica para COI-5P en algas rojas (0-0,6%; Saunders 2005, Filloramo & Saunder 2016a). Valores altos de divergencia intraespecífica, como el observado para R. corallina, ya han sido registrados para otras especies de Rhodymenia (R. novaehollandica, 1,7%, R. wilsonis 2,4%; Filloramo & Saunders 2016a), lo que los autores atribuyen tentativamente al aislamiento entre poblaciones y posterior recurrencia del cruzamiento exitoso, o de una separación pasada e incompleta de linajes (Filloramo & Saunders 2016a). Además, la divergencia interespecífica se encuentra dentro del rango de divergencia observada entre las otras especies incluidas en nuestras reconstrucciones filogenéticas (1,3-15,0%). La distinción de 2 especies filogenéticas, R. corallina y R. howeana, está por lo tanto soportada por la monofilia recíproca y los valores de divergencia interespecífica.

Características de los tetrasporangios, considerados de importancia taxonómica en la delimitación morfológica de especies de Rhodymenia (Dawson 1941, Filloramo & Saunders 2016a), permiten diferenciar a R. howeana de R. corallina por la forma del soro y el grado de modificación de la corteza producida por el desarrollo de los tetrasporangios. En R. corallina de la costa central de Perú y de Chile (Coquimbo), los soros tetrasporangiales presentan formas irregulares o en bandas, sin bordes definidos, y sin generar modificación en la corteza. En R. howeana, los soros tetrasporangiales presentan formas de media luna a redondeadas, con bordes definidos, además de “marcas” oscuras visibles en los segmentos medios, después de la esporulación con una ligera modificación en la corteza. Estas características se asemejan a los soros con forma elíptica y asociados a una ligera modificación nematecial en la corteza reportados por Dawson et al. (1964) para un espécimen recolectado en la Bahía de Sechura en el norte de Perú (Piura, 5-6°S). Si bien los autores asignaron este espécimen a R. corallina, la descripción e ilustración del espécimen son coincidentes con la descripción e ilustración de R. howeana de Dawson (1941).

Una comparación del hábito de ambas especies indica que existen diferencias significativas para la distribución de las medidas del ancho de los segmentos (primer segmento y segmentos medios) y de la proporción entre la longitud y ancho de los segmentos (primer segmento y segmentos medios), donde los valores de las medidas del ancho de los segmentos de la fronda de R. corallina son menores a R. howeana (Anexo Tabla S2, Fig. 8).

La descripción de R. howeana (Dawson 1941) fue realizada en base a 3 ejemplares del herbario de Coker procedentes de 2 localidades distintas, 2 ejemplares de Callao (12°S) (estéril y gametofito femenino) y 1 ejemplar de Isla Lobos de Tierra (6°S) (tetrasporofito), contraviniendo la Regla del Código Internacional de Nomenclatura para Algas, Hongos y Plantas (Shenzhen Code 2018, “A efectos de tipificación, un ejemplar es una recolección, o parte de una recolección, de una única especie o taxón infraespecífico, sin tomar en consideración elementos en mezcla”) (Turland et al. 2018: Art. 8.2). Las ilustraciones de los especímenes tipo de R. howeana de Callao (herbarios UC197771 y UC199608) muestran similitud con el hábito de R. corallina; contrario al espécimen tetrasporofito (herbario UC199622) recolectado en Isla Lobos de Tierra (Fig. 7A), cuyo hábito (ancho de los segmentos de la fronda) y soros tetrasporangiales (soros delimitados y huellas de los soros después de la esporulación en los últimos segmentos y segmentos finales) son similares al hábito del espécimen recolectado en Isla Lobos de Tierra (Piura) en el presente estudio, el cual se diferencia filogenéticamente como una especie distinta a R. corallina. Por lo tanto, R. howeana estaría representada solo por el espécimen tipo de Isla Lobos de Tierra (Piura). La especie de Rhodymenia diferenciada en este trabajo para el norte de Perú (Casma, 9°S y Lobos de Tierra, 6°S) sería asignada como R. howeana, siendo necesario tipificar el ejemplar del norte de Perú (UC199622, Fig. 7A) como holotipo de R. howeana, modificando la descripción y distribución de la especie. Asimismo, se debieran considerar los ejemplares de Callao como reportes de R. corallina.

Los especímenes del norte de Perú asignados en este estudio a Rhodymenia howeana, presentan poca variabilidad en la morfología del hábito, a diferencia de R. corallina (Fig. 7B-C). En R. corallina se integran las morfologías descritas en la literatura para R. multidigitata de Callao y de 2 de los 3 ejemplares tipos de R. howeana, aquellos procedentes de Callao (Dawson 1941, Dawson et al. 1964). Los caracteres morfológicos externos, como tamaño del estipe, conformación de los segmentos de la fronda y forma de los ápices, fueron determinantes para la diferenciación de las especies de Rhodymenia en Perú central. No obstante, estos caracteres se presentan muy variables entre los especímenes de R. corallina recolectados recientemente en Perú central, abarcando las medidas descritas en la literatura para R. howeana y R. multidigitata (Tabla 4). R. corallina presenta un estipe de 0,1 a 2,6 cm de longitud (hasta 5,4 en ejemplares de Coquimbo, Chile), así como frondas flabeladas divididas dicotómica o subdicotómicamente hasta 15 veces. Su longitud en los segmentos medios tiene un rango de 0,3 a 8,5 cm, presentándose una gran variabilidad en la forma de los ápices, los que pueden ser enteros simple o bilobados, redondeados hasta multidigitados. En base a este último carácter, Dawson et al. (1964) describieron a la nueva especie R. multidigitata, ahora incluida en R. corallina.

Con el presente trabajo se confirma que Rhodymenia corallina se encuentra distribuida en la costa central del Perú, desde los 9°S (Casma) hasta los 15°S (Marcona). Hasta este punto, y solo basado en la evidencia filogenética de este estudio, se podría establecer que la distribución de R. corallina abarcaría al menos hasta los 30°S, a lo largo de la Costa Temperada del Pacífico de Sudamérica, influenciada por el sistema de la Corriente de Humboldt (Camus 2001, Spalding et al. 2007, Briggs & Bowen 2012). De acuerdo a la literatura, su rango de distribución incluye localidades de la costa norte y central de Chile entre 18°S y 43°S (Ramírez & Santelices 1991), región donde se encuentra la localidad tipo de la especie (Concepción, 36°S). Recolecciones extensivas e intensivas en Chile son necesarias para clarificar los rangos de distribución de las especies y corroborar los registros de las colecciones de herbarios. A pesar de que R. corallina ha sido también registrada en el Océano Indo-Pacífico (Silva et al. 1996, Littler & Littler 2003, N’Yeurt & Payri 2010, Atmadja & Prud'homme van Reine 2012), actualmente no hay secuencias disponibles en GenBank que procedan de esas áreas.

Por otra parte, el presente trabajo muestra que Rhodymenia howeana tendría una distribución actual más limitada, al menos desde Piura, norte de Perú (6°S), hasta Casma, límite norte de Perú central (9°S). No hay evidencia filogenética de la presencia de R. howeana al sur de 9°S, aunque un mayor esfuerzo de muestreo sería necesario para confirmarlo. En la literatura, esta especie ha sido registrada en Perú de 6-14°S (Piura, La Libertad, Áncash, Lima, Callao, Ica) y en Chile de 23-42°S (Antofagasta, Puerto Montt, Isla de Chiloé) (Ramírez & Santelices 1991). Por ahora, la distribución de R. howeana estaría restringida al límite norte de la Costa Temperada del Pacífico de Sudamérica con el Pacífico Este Tropical (Spalding et al. 2007).

El complejo morfológico de especies de Rhodymenia de Perú central (9-15°S) ha sido resuelto en base al análisis de secuencias rbcL y COI-5P, morfología externa y estructuras reproductivas del tetrasporofito, diferenciando 2 especies, donde morfológicamente habían sido registradas tres. La especie R. corallina, con localidad tipo Concepción (Chile), se distribuye a lo largo de toda la costa central del Perú desde Casma (9°S) hasta Marcona (15°S). La otra especie se asigna a R. howeana, en base al análisis comparativo con la ilustración del espécimen tipo de R. howeana procedente de Isla Lobos de Tierra (Piura) de Dawson (1941), y se distribuye en el norte de Perú desde Piura (6°S) hasta Casma (9°S). De esta forma, se recomienda considerar el espécimen tipo de R. howeana de Isla Lobos de Tierra (UC199622) como holotipo de R. howeana, y considerar los ejemplares recolectados en Callao (UC197771 y UC199608) como registros de R. corallina.

Agradecimientos

Esta investigación ha sido financiada por el Convenio de Subvención N° 219-2015-FONDECyT, CONCYTEC Perú. Las autoras agradecen al personal del Área Funcional de Investigaciones en Biodiversidad del IMARPE por el uso de sus instalaciones y al financiamiento complementario otorgado por la Universidad Católica de la Santísima Concepción ( Proyecto DIN 22/2016y Financiamiento de Actividades Académicas).

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1
Anexo

Tabla S1 Especie, lugar de recolección de los especímenes, número de acceso a GenBank y referencia de las secuencias rbcL y COI-5P de Rhodymenia, Botryocladia, Cephalocystis, Chrysymenia, Chamaebotrys, Coelarthrum, Cordylecladia, Drouetia, Fryeella, Halopeltis, Halichrysis, Hymenocladiopsis, Irvinea, Leptosomia, Microphyllum, Pseudohalopeltis y Sparlingia incluidas en los análisis / Species, place of specimens collection, GenBank accession number and reference of rbcL and COI-5P sequences of Rhodymenia, Botryocladia, Cephalocystis, Chrysymenia, Chamaebotrys, Coelarthrum, Cordylecladia, Drouetia, Fryeella, Halopeltis, Halichrysis, Hymenocladiopsis, Irvinea, Leptosomia, Microphyllum, Pseudohalopeltis and Sparlingia included in the analyses  

Continuación Tabla S1  / Continued Table S1 

Tabla S2 Resultados de la prueba de Kruskal-Wallis para dos muestras independientes (especies Rhodymenia corallina y R. howeana) por cada variable morfológica externa medida (grados de libertad = 1). N= número de individuos (total y por especie); nivel de significancia= 0,05; ***= P ≤ 0,001 y **= P ≤ 0,01 (diferencias altamente significativas); *= P ≤ 0,05 (diferencias significativas); n.s.= P > 0,05 (sin diferencias significativas) / Results of Kruskal-Wallis test for two independent samples (Rhodymenia corallina and R. howeana species) for each morphological variable measured (degrees of freedom= 1). N= number of individuals (total and per species); level of significance= 0.05; ***= P ≤ 0.001 and **= P ≤ 0.01 (highly significant differences); *= P ≤ 0.05 (significant differences); n.s.= P > 0.05 (no significant differences). Frond length (Lf), Frond width (Af), Frond length/Frond width (Lf/Af), First segment length (Lps), First segment width (Aps), First segment length/First segment width (Lps/Aps), Middle segment length (Lsm), Middle segment width (Asm), Middle segment length/Middle segment width (Lsm/Asm), Stipe length (Le) and Frond length/Stipe length (Lf/Le)  

Recibido: 23 de Agosto de 2018; Aprobado: 09 de Julio de 2019

*Autor corresponsal: pe.al.melissalia@gmail.com

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