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Revista chilena de cirugía

versión On-line ISSN 0718-4026

Rev Chil Cir vol.65 no.5 Santiago set. 2013

http://dx.doi.org/10.4067/S0718-40262013000500004 

 

ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN

 

Entrenamiento microquirúrgico básico para realizar un modelo animal de alotrasplante compuesto vascularizado*

Basic microsurgical training for a vascularized composite allotransplantation animal model

 

Drs. Alejandro Ramírez M.1, Rodrigo Contreras D.2, Jaime Cartes U.3, Mónica Martínez M.3, Carlos Martínez P.4, Valeria Alvarado S.4, Mirentxu Iruretagoyena B.5, Jorge Martínez C.6

1 Residente de Cirugía Plástica y Reconstructiva. Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. Santiago, Chile.
2 Sección de Cirugía Plástica y Reconstructiva. Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. Santiago, Chile.
3 Residente de Cirugía General. Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. Santiago, Chile.
4 Laboratorio de Cirugía Experimental, Centro de Investigaciones Médicas, División de Cirugía. Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. Santiago, Chile.
5 Departamento de Reumatología. Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. Santiago, Chile.
6 Programa de Trasplantes, Departamento de Cirugía Digestiva. Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile. Santiago, Chile.

Correspondencia a:


Abstract

Introduction: Rat hind limb transplantation is a complex animal model of vascularized composite allo-transplantation (VCA). A basic microsurgical training is required prior to the implementation of this model. Aim: To propose a training program for the acquisition of basic skills to perform a microsurgical VCA model. Animals and Methods: The training program was conducted in two stages. First, at the dry lab, basic suturing skills with 9-0 to 11-0 nylon sutures were practiced, reproduced from surgical videos performed by experts. In a second stage, at the wet lab using 13 Lewis rats, 6 hind limb microsurgical dissections were performed and the important steps for transplantation were identified: 10 end to end femoral artery anastomoses with 10-0 nylon interrupted suture; 10 end to end femoral vein anastomoses with 10-0 nylon suture; 3 femoral vein interposition in the femoral artery; 6 end to end sciatic nerve neurorrhaphy; 4 femur osteosynthesis with 21g needle and wire cerclage. Anastomotic patency rate and anastomotic surgical time were recorded. Results: Arterial and venous patency rate was 100 and 90% respectively. Surgical time decreased from 49 to 24 minutes on arterial anastomoses and from 55 to 25 minutes on venous anastomoses after completion of the training program. When a vein interposition was performed, an immediate patency rate of 100% was obtained. Conclusion: A successful staged training model of basic microsurgical skills was performed, in order to perform a VCA model.

Key words: Vascularized composite allotransplantation, microsurgical training, rat hind limb, animal models.


Resumen

Introducción: El trasplante de extremidad posterior de la rata es un modelo microquirúrgico de alotras-plante compuesto vascularizado (ACV), que requiere para su implementación de un entrenamiento microquirúrgico básico sistematizado. Objetivo: Comunicar un modelo de entrenamiento microquirúrgico básico para adquirir las habilidades y destrezas que permitan realizar un modelo microquirúrgico de ACV Animales y Métodos: El entrenamiento se realizó en 2 etapas: La primera, en laboratorio en seco. A partir de vídeos de microcirugía, se practicó las destrezas para maniobrar suturas de nylon de 9-0 a 11-0. En la segunda etapa in vivo con animales, (13 ratas Lewis), se realizaron: 6 disecciones microquirúrgicas de extremidad posterior para reconocimiento de estructuras anatómicas; 10 anastomosis término-terminal (T-T) de arteria femoral con sutura interrumpida 10-0; 10 anastomosis T-T de vena femoral; 3 interposiciones de vena femoral en arteria femoral; 6 neurorrafias T-T de nervio ciático; 4 fijaciones óseas de fémur con aguja 21 g y cerclaje con alambre. Se evaluó la permeabilidad de las anastomosis y los tiempos quirúrgicos. Resultados: Anastomosis arteriales: la permeabilidad inmediata fue de un 100%. Los tiempos de anastomosis disminuyeron de 49 a 24 min con el entrenamiento. Anastomosis venosas: la permeabilidad inmediata fue de un 90%. Los tiempos de anastomosis disminuyeron paulatinamente de 55 a 25 min. Interposiciones venosas: se logró una permeabilidad de 100%. Conclusión: Una estrategia de entrenamiento por etapas, es una forma factible de entrenamiento en microcirugía. Este entrenamiento permite obtener una aceptable permeabilidad anastomótica, paso crítico para realizar modelos de ACV.

Palabras clave: Tejido compuesto, trasplante, modelo animal, alotrasplante, extremidad posterior de la rata, microcirugía, entrenamiento microquirúrgico.


Introducción

Los alotrasplantes compuestos vascularizados (ACV) son la próxima frontera del campo de los trasplantes de órganos y tejidos1. En la última década los trasplantes de manos y de cara, constituyen las indicaciones más conocidas de esta nueva área de la medicina y de la cirugía2,3. Para su implementa-ción clínica, el entrenamiento microquirúrgico en modelos animales es una etapa esencial a realizar. Las curvas de aprendizaje de las técnicas microquirúrgicas demandan habilidades básicas y de un entrenamiento continuo4. Sin embargo, frecuentemente los recursos para el entrenamiento son escasos y la seguridad de los pacientes limitan las oportunidades de docencia sistemática. Por otro lado, el entrenamiento en un laboratorio en seco sin animales, es cada vez más usado para desarrollar las habilidades y destrezas pertinentes en microcirugía, a la vez que disminuye los costos y la utilización de un gran número de animales de laboratorio5-19.

El trasplante de extremidad posterior de la rata, es un modelo animal microquirúrgico complejo de ACV20,21 que los autores pretenden implementar. Previo a la ejecución del mismo, se diseñó realizar un modelo de entrenamiento microquirúrgico básico combinando una práctica en laboratorio en seco con la ejecución de microanastomosis vasculares, neurales y osteosíntesis en extremidades posteriores en ratas. El objetivo del trabajo es comunicar un modelo por etapas de entrenamiento microquirúrgico y sus resultados en términos de permeabilidad de las microanastomosis vasculares realizadas y de los tiempos quirúrgicos de las mismas.

Materiales y Métodos

Se diseñó un programa de entrenamiento micro-quirúrgico en 2 etapas. Éste lo realizó uno de los autores, durante su residencia de Cirugía General, sin previa experiencia microquirúrgica, bajo la supervisión de un microcirujano experimentado. El protocolo de implementación fue aprobado por la Secretaría de Investigación de la División de Cirugía de la Facultad de Medicina de nuestra Universidad y la etapa de entrenamiento con animales, fue aprobada por el Comité de Ética Animal de la Dirección de Investigación de la misma Facultad.

Entrenamiento microquirúrgico

      a) Primera etapa de laboratorio en seco: Se utilizó un microscopio binocular (Leyca®) con poder de aumento hasta 5X y suturas de nylon 9-0, 10-0, y 11-0. Se empleó además un teflón número 21, un guante de látex y un molde se silicona. Como instrumentos microquirúrgicos, se usó una pinza de relojero número 5, un microporta, una microtijera de disección y un microclamp aproximador (Figura 1). Para el estudio de vídeos de microcirugía, se utilizaron vídeos del protocolo de estudio del Dr. Acland.

Figura 1. A) Material laboratorio en seco. B) Comparación entre una aguja microvascular 10-0.

El entrenamiento se comenzó con el estudio de los vídeos de microcirugía, seguido por la práctica de destrezas microquirúrgicas básicas. Se practicaron 300 puntos simples más anudados con nylon 110. Durante la ejecución de este ejercicio, se practicó además la toma de la aguja, su posicionamiento en el porta y la recogida desde la silicona; 200 puntos simples más anudados con nylon 10-0; 20 suturas corridas con nylon 10-0 y 20 ligaduras simples con nylon 9-0 (Figura 2).

Figura 2. Entrenamiento microquirúrgico básico en laboratorio en seco. A) Anudado simple con nylon 9-0. B) Puntos simples en silicona. C) Montaje con micro-clamp aproximador, simulación con trozos de látex.

      b) Segunda etapa, entrenamiento in vivo: Se utilizaron 13 ratas machos Lewis que pesaron entre 200 y 400 g que fueron anestesiadas con una mezcla de ketamina (70 mg/kg) + xilazina (3 mg/kg) intra-peritoneal, además de los materiales utilizados en la etapa previamente descrita.

Disección microquirúrgica

El entrenamiento in vivo se comenzó con las disecciones microquirúrgicas de extremidad posterior (3 ratas, 6 disecciones) (Figura 3): durante esta etapa se adquirieron destrezas básicas de disección y se reconocieron las estructuras anatómicas fundamentales para realizar el trasplante: disección de vasos femorales, disección de nervio ciático, reconocimiento de los grupos musculares y del fémur.

Figura 3. Disección extremidad posterior de rata Brown Norway. Se observan los vasos femorales seccionados (a), los músculos del muslo seccionados (b), el fémur (c) y el nervio ciático (d).

Anastomosis microvasculares

En 10 ratas Lewis se practicó: (i) 10 anastomosis término-terminal de arteria femoral con sutura interrumpida de nylon 10-0. Cinco de éstas se realizaron con la técnica de pared anterior y pared posterior (Figura 4A) y cinco con la técnica de triangulación (Figura 4B). De forma resumida, la primera técnica consiste en colocar los dos primeros puntos separados en 180 grados, para luego completar la pared anterior con 3 puntos más, luego se da vuelta el microclamp aproximador con la anastomosis para colocar 3 puntos en la pared posterior, completando la anastomosis con 8 puntos en total. En la técnica de triangulación, los primeros 2 puntos se separan en 120 grados para luego colocar 2 puntos entre estos, con lo que se completa uno de los lados del triángulo. A continuación se da vuelta la anastomosis y se coloca un punto en el medio de la pared posterior. Este punto se tracciona para un lado, colocándose 2 puntos en la cara expuesta, luego se tracciona hacia el lado contrario y se colocan 2 puntos más, hasta completar la anastomosis con 9 puntos en total; (ii) Además se efectuó 10 anastomosis término-terminal de vena femoral con sutura interrumpida de nylon 10-0, con técnica de triangulación (Figuras 5 y 6), de la forma ya descrita para la arteria22. También se realizaron 3 interposiciones de vena femoral en la arteria femoral (Figura 7) (6 anastomosis término-terminal arterio-venosas). Todas estas anastomosis, se realizaron bajo irrigación con solución de hepari-na no fraccionada (100 UI/ml). De los elementos no vasculares; (iv) se efectuaron 6 neurorrafias término-terminal de nervio ciático con sutura interrumpida de nylon 10-0 y (v) 4 osteosíntesis de fémur con aguja 21g, a modo de clavo endomedular más cer-claje con alambre de acero de 0,4 mm de diámetro.

Figura 4. Esquema sobre las técnicas de anastomosis microvascular. La zona gris representa la pared del vaso sanguíneo. Los números muestran la ubicación y el orden de los puntos. A) Técnica de pared anterior y pared posterior. B) Técnica de triangulación.

Figura 5. Práctica de anastomosis microvascular. Anastomosis de vena femoral con sutura interrumpida de nylon 10-0. Técnica de triangulación.

Figura 6. Anastomosis microvascular de arteria y vena femoral.

Figura 7. Interposición de vena femoral. Vaso abierto en forma longitudinal. Vista desde el lumen.

En todas las anastomosis vasculares se evaluó la permeabilidad inmediata a los 2 y 30 min mediante inspección directa y test de Acland. El tiempo de anastomosis se cuantificó en todas las uniones arteriales y venosas.

Resultados

Fue factible realizar un entrenamiento por etapas. En total se realizaron 26 anastomosis microvasculares, siendo la permeabilidad anastomótica inmediata de 96,2%. La permeabilidad inmediata de las anastomosis arteriales fue de un 100%. La Tabla 1 muestra los tiempos de anastomosis microvascular de las anastomosis venosas y arteriales. El tiempo de ejecución de la anastomosis arterial disminuyó paulatinamente de 49 a 24 min. La permeabilidad inmediata de las anastomosis venosas fue de un 90%. Observamos una trombosis en la primera anastomosis venosa en la evaluación a los 30 min sin identificarse un factor mecánico evidente (sutura de pared posterior, puntos desiguales, exposición de la media, etc.). El tiempo de anastomosis venosa disminuyó de 55 min en el primer caso a 25 min en el último. La permeabilidad anastomótica de las interposiciones venosas fue de un 100%.

Tabla 1. Tiempos de anastomosis microvascular término-terminal de vasos femorales con nylon 10-0
n: número de anastomosis. Tiempo expresado en minutos

Discusión

El ACV consiste en el trasplante de diferentes tejidos complejos que pueden contener piel, músculo, hueso, cartílago, nervios, vasos sanguíneos, células inmunes o una combinación de estos1-3,23-25. Los modelos animales de ACV, permiten no sólo obtener entrenamiento microquirúrgico y estudiar la factibilidad técnica de estos trasplantes, sino también establecer plataformas para la investigación en ACV26. La dificultad técnica del ACV, requiere de cirujanos entrenados en diversas técnicas microquirúrgicas. En la literatura varios artículos describen los elementos necesarios para aprender microcirugía. Algunos de estos aspectos son la necesidad de tiempo, paciencia, motivación, tolerancia a la frustración y recursos entre otros4,13,27-31. Si bien existen algunas publicaciones al respecto, aún no se ha desarrollado un currículo válido de entrenamiento para los especialistas que necesitan usar técnicas microquirúrgicas en su práctica diaria29,32-36. Entre los diferentes esquemas de entrenamiento propuestos, está la simple exposición directa a procedimientos microquirúrgicos, sin embargo, esta opción, además de ser riesgosa para los pacientes, se reserva sólo a centros con alto volumen microquirúrgico. Así, se ha sugerido que el entrenamiento microquirúrgico debe empezar en el laboratorio y una vez dominadas las habilidades básicas de microcirugía, dar el paso a la microcirugía clínica. Sin embargo, aún no se ha estandarizado el entrenamiento en el laboratorio, ni la forma de evaluarlo28,35,37,38. Si bien creemos que se debe trabajar en este punto, nos parece que la mejor opción es adaptarse a las condiciones locales para lograr adquirir las destrezas básicas de microcirugía.

Este artículo, describe cómo con elementos relativamente simples, se puede obtener un entrenamiento microquirúrgico básico fuera del pabellón. Este entrenamiento debe ser estandarizado para poder comparar resultados, la evolución de las habilidades adquiridas y facilitar la enseñanza microquirúrgica. Si bien en nuestro trabajo no se observaron los resultados a mediano plazo como se ha realizado en otros estudios37, en todas las anastomosis microvasculares, se evaluó la permeabilidad inmediata y a los 30 min, lo que en general revela cualquier problema mayor en la ejecución de una anastomosis microvascular.

El objetivo primario de nuestro modelo de entrenamiento fue adquirir las habilidades básicas para implementar un modelo experimental microquirúrgico de ACV, realizado por residentes de Cirugía General. Sin embargo, se revelan las evidentes ganancias secundarias de este modelo de entrenamiento como un primer paso, antes de realizar microcirugía en forma clínica.

Según la experiencia aquí presentada, creemos que un entrenamiento básico en el laboratorio, que incluya una etapa de laboratorio en seco, independiente del tipo o subetapas de entrenamiento, es una buena forma de iniciar el entrenamiento microquirúrgico para poder implementar en nuestro medio un modelo microquirúrgico complejo de ACV.

 

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* Recibido el 14 de octubre de 2012 y aceptado para publicación el 15 de abril de 2013. Los autores no refieren conflictos de interés.

Fuente de financiamiento: Concurso Investigación para Residentes. División de Cirugía. Pontificia Universidad Católica de Chile.

Aprobado por el Comité de Ética Animal de la Dirección de Investigación de la Facultad de Medicina.

Correspondencia: Dr. Alejandro Ramírez M. Marcoleta 350, Patio Interior, Edificio División de Cirugía. 2° piso. Teléfono: 2354 3472. aeramire@.puc.cl

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